1、(1)連接酶來源:結接成 果 功能：只能連接.四.基因進入受體細胞的載體一“分(2) T4DNA連接酶子運輸車”來源:功能：既可以連接.又可以連接時效率比較低。【拓展】比較DNA連接酶與DNAONA連 接酶DNA聚合 酶作 用實質都是催化兩個核晉酸之間形 成是 否需 模板連 接0 NA鏈鏈鏈作 用過 程在兩個DNA片段之間形成將加到已存在的核昔酸鏈上，形成作用將兩個ONA片段連合成聚介酶1.基因工程中最常用的載體來源:等微生物(2)結構：裸露的、結構簡單、獨立于之外，并具有分子。2.基因的載體必須具備的條件個限制酶切削位點，供外源DNA片段(基丙)插入其中。(2)能在宿主細胞內介到染色體DNA

2、上，隨染色體DNA進行(3)有特姝的.，如四環素抗性基因等，供重組DNA的鑒定和選擇。(4)必須是彳j害。(5)進行操作。的，不會對受體細胞適合，以便提取和在體外3.載體的種類：除質粒外，還有144.在進行基因工程操作中，真正被用作的。載體的質粒，都是在天然質粒的基礎上進行1. 2基因工程的基本操作程序一.基因工程的基本操作程序PCR擴增的前提：要有一段已知目的的獲取。基因的，以便根據這一序列合成引2的構建。3.將目的基因4,目的基因的二、目的基因的獲取1.目的基因主要是的結構基因。2獲取目的基因的方法（1）從基因文庫中獲取目的基因基因文庫概念：將含有某種生物不同基因的許多，導入的群體中儲存各

3、個分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。基因文庫分類：可分為庫和，文庫（如cDNA文庫）。利用PCR技術擴增目的基因PCR技術是的縮寫。PCR 是一項在生物體的核酸合成技術。 PCR技術的原理：ONAPCR擴增的條件：（目的基因），原料（即 dCTP、d&TP、dGTP、dTTP）.耐高溫的（Taq 酶）。PCR擴增的過程a變性：加熱到9095°C, ONA受熱變性后b復性（退火人 冷卻到55-60r.結合C.延伸：加熱到7075乜，在熱穩1的（Taq酶）的作用下進行延伸結果：目的基因以的方式成指數形式擴增。人工合成法：如果基因比較.學方法宜接人工合成。比較用化【拓展】

4、PCR技術和DNA復制的PCRl技術DNA復制同 點原理原 料條 件同 點解旋解旋催化場 所復制熱穩楚的DNA聚合酶細胞內含有的DNA聚合酶結 果在短時間 內形成形成識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA 最終獲得所需的蛋白質，即轉錄開始的部位。(2)終止子：位于目的基因的.也是一段有特殊結構的DNA序列，使轉錄在所需的地方停止下來，即轉錄停止的部位。(3)標記基因:用于鑒別受體細胞中是三.基因表達載體的構建基因表達載體的構建是實施基因工程的第二步，也是基因工程的1.基因表達載體構建目的：使目的基因在受體細胞中給下一代，同叭使目的基因能夠2.基因表達載體的組成：除了目的基因外.還必

5、須有以及(1)啟動子：位于目的基因的是一段有特殊結構的DNA序列，是否.,從而將含有目的基因的細胞來，為四環素抗性基因。，如氨節青霉素抗性基因、3表達載體構建過程中，獲取目的基因打切割質粒時一般用限制性核酸內切酶目的是產生相同的，以便于連接。四.將目的基因導入受體細胞的概念：目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩宦和表達的過 程.稱為0 Z CF畫電哪1.將目的基因導入植物細胞2.將目的基因導入動物細胞(1)常用受體細胞：植物的(1)常用受體細胞:(2)常用方法:(2)方法:法,其中,(3)基本操作程序:因的表達載體一含有目的基(受精卵)法是導入植物細胞最常用的f胚胎移植f新性狀動物方

6、法。農桿菌特點：易感染雙子葉植物和裸3.將目的基因導入微生物細胞子植物。當植物體受到傷害是，傷口處的細(1)常用受體細胞:細胞，其胞會分泌大量的最為廣泛。菌務向這些細胞，這時農桿菌中的(2)原孩生物的特點：上的(可轉移的DNA)多為單細胞；遺傳物質柑對.可轉移到受體細胞染色體的DNA上。(3)轉化方法:轉化過程：將插入到上，通過農桿菌的轉化作用,(4)轉化過程可以使目的基因進入植物細胞，并將次插入處理受體細胞(如到植物細胞中染色體的DNA,使目的基因的大腸桿菌人使細胞處于一種能吸收周圍環境遺傳特性得以中DNA分子的生理狀態，這種細胞稱為將重組表達載體ONA分子溶于中與混合，在一泄下促進吸收DN

7、A分子，完成轉化過程。五.目的基因的檢測與鑒定目的基因導入受體細胞是否可以,只有通過檢測與鑒泄才能知道，這是基因工程的第四步，也是檢查基因工程是否成功的一步。檢測內容方法結果顯示第 二步第一步檢測轉基因生 物的染色體上是否 插入了目的基因檢測目的基因 是否轉錄（ONA探針+轉基因生物DNA ）（ONA探針+轉基因生物 mRNA）是否是否第 三步 _水平 的檢測檢測目的基因 是否翻譯成蛋白質是否包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性的及抗性程度：基因 工程產品需要與天然產品的功能進行活性比較等1. 3基因工程的應用一、植物基因工程碩果累累植物基因工程技術主要用于提高農作物（如抗除草劑、抗蟲

8、、抗病、抗干旱和抗鹽堿等）.以及改良農作物的和利用植物生產等方而。二.動物基因工程前景廣闊動物基因工程主要應用于動物品種、器官務植等多用于提高動物生長速度：將導入動物體內，以提髙動物生長速率。（2）用于改良畜產品的品質。（3）用轉基因動物生產藥物:將藥用蛋白基因與的啟動子等調控組件重組在一起，通過導入哺乳動物的等方法.中，然后，將受精卵送入母體內，使其生長發冇成轉基因動物進人泌乳期后，可以通過分泌的，來生產所需要的藥品，稱為乳腺（房）生物反應器。（4）用轉基因動物作器官移植的供體:將器官供體基因組導入某種調節因子，抑制或設法除去，培補1:用于基因治療的基因有三種類型:的轉基因育出沒有 克隆動物器官。三、基因工程在醫學、藥學上的應用1.基因工程藥物：利用“工程菌"生產基因工程藥品包括等。工程菌：用基因工程的方法.使外源基 因得到高效率表達的菌類細胞株系一般稱為補2：基因診斷。2基因治療：是把導入病人體內，使該基因的發揮功能,從而達到治療疾病的目的，這是治療遺傳病 的最有效的手段，包括r 4蛋白質工程的關系，通過1實質：根據現有蛋白質進行改造或創造自然界不存在的蛋白質。2基本原理：預期-設訃f推測到.3