1、食用鹽中亞硝酸鹽測定方法的探討樓雨芝 李洪亞硝酸鹽是潛在的致癌物質，人體攝入的亞硝酸鹽含量過高可能使血液中的變性蛋白增加，目前在食品監測中，亞硝酸鹽是一項重要的分析項目。以往一般認為食用鹽中亞硝酸鹽的含量很低，因此在現有的食用鹽及相關鹽產品標準中均未將亞硝酸鹽列入檢測項目，也未制定食用鹽中亞硝酸鹽的檢測方法標準。由于食用鹽與亞硝酸鹽用肉眼及味覺難以區分，亞硝酸鹽又常作為食品添加劑使用，使得食用鹽與亞硝酸鹽有可能會同時出現于廚房灶頭上，故屢有亞硝酸鹽食物中毒事件發生；另外一些用于食品加工行業，特別是腌制行業，加工以后本身會產生大量的亞硝酸鹽，一旦產品亞硝酸鹽指標超標，往往要對原料包括食用鹽進行亞

2、硝酸鹽含量的檢測，但由于沒有合適的檢測方法，易產生糾紛。目前主要借用食品中亞硝酸鹽的測定方法（GB/T 5009.33），該方法適用于食品檢測，食品的成份復雜，有大量的蛋白質、脂肪、纖維等有機物，前處理復雜，而食用鹽以氯化鈉為主的無機鹽產品，相對成份簡單，不需要經過除去有機物的過程，有時候前處理不好反而帶入了較大的誤差；另外加碘食鹽普遍采用的碘劑為碘酸鉀，有報道4.5碘酸鉀對用重氮偶合光度法測定亞硝酸鹽時有干擾，在對食物中毒樣品進行亞硝酸鹽定性時4,含有碘酸鉀樣品往往會出現假陽性現象,但至今未有解決的辦法。本文通過試驗，省去了GB/T5009.33標準方法中前處理的過程，在對加碘食用鹽檢測過程

3、通過在標樣中同時加入不含亞硝酸鹽的試劑氯化鈉和碘酸鉀的方法，消除氯化鈉和碘酸鉀的影響,保證了加碘食用鹽中亞硝酸鹽的準確測定。一、方法原理在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮后，與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，該染料在545550nm波長范圍內產生最大的吸收，可用光度法測定其含量。二、實驗操作1、 試劑與儀器實驗中所用試劑和水未注明要求時，均使用分析純試劑和蒸餾水。1.1亞硝酸鈉標準溶液（0.5mg/ml）：稱取0.2500g已于干燥器中放置24小時的亞硝酸鈉，溶于500ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。1.2亞硝酸鈉標準工作液（2g/ml）：吸取上述亞硝酸鈉標準溶液1ml于250ml容量瓶

4、中，加水稀釋至刻度。1.3亞硝酸鈉標準工作液（5g/ml）：吸取上述亞硝酸鈉標準溶液1ml于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。1.4對氨基苯磺酸溶液（4g/L）：分別稱取0.4g溶于100ml20%、30%鹽酸溶液中，置棕色瓶中混勻，避光保存。1.5鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺，溶解于100ml水中，混勻后，置于棕色瓶中，避光保存。1.6碘酸鉀溶液（0.04mol/L1/6KIO3）：稱取0.71g KIO3，溶解于500ml水中，混勻。1.7儀器：安捷倫6010型分光光度計，3cm比色皿。2、 實驗步驟2.1基本操作于50ml比色管中加入適量的標液或樣液后，加入適

5、量的對氨基苯磺酸，混勻靜置35min后再加入適量的鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，靜置適當時間，用3cm比色皿，以試劑空白作參比，在分光光度計上選取合適的波長測定其吸光度。2.2條件的選擇測定波長的確定用加1ml工作標液，然后按上述操作程序，用分光光度計在400600nm范圍內對其進行波長掃描，見圖1，以獲取最大吸光度的波長。圖1. 反應物的波長掃描圖。從上圖中可看出當波長在544550nm之間，其吸光度可達到最大。在實驗中分別選取了545、549nm波長做試驗，結果無差異。2.2.3空白溶液的選擇分別對試劑空白（2ml對氨基苯磺酸溶液+1ml鹽酸萘乙二胺溶液）、5g氯化鈉溶液、5g精制鹽溶液、

6、5g日曬鹽溶液分別加入50ml比色管中加水至刻度，在549nm處進行了吸光度測試，結果如表1。表1.各種溶液的吸光度測定值溶液試劑空白氯化鈉精制鹽日曬鹽吸光度A0005000100260040從上表中看純的試劑氯化鈉溶液吸光度很小，幾乎可忽略，食用鹽樣品溶液由于存在一定的懸浮物會產生較高的吸光度，因此應對樣品采取過濾措施以減少對結果的正誤差。空白溶液以選擇試劑空白為宜。2.2.4酸度與顯色劑量的選取試驗中分別采用10%、20%、30%的鹽酸溶液溶解對氨基苯磺酸和加入0.5、1.0、1.5ml的鹽酸萘乙二胺溶液進行吸光度的比較，樣液為1.0ml亞硝酸鈉工作液（5g/ml），結果見表2。表2. 不

7、同酸度和顯色劑的用量對吸光度的影響試劑的量10%HCl20% HCl30% HCl0.5ml1.5ml2ml1ml鹽酸萘乙二胺溶液+2ml對氨基苯磺酸1ml鹽酸萘乙二胺溶液+2ml對氨基苯磺酸吸光度A0.23202340333023502350236從上表可看出鹽酸的濃度及顯色劑的用量在上述試驗的范圍內對吸光度結果影響不大。因此在以下的實驗中選取的鹽酸濃度為20%，顯色劑用量為1ml。2.2.5顯色時間的選取將同一份標液，從加入鹽酸萘乙二胺試劑溶液時開始計算，分別在靜置不同時間后測定其吸光度，結果見表3。表3. 不同放置時間對吸光度的影響時間（min）0710154060吸光度A0.2300.

8、2470.2470.2480.2500.250從上表可以看出，在放置7min后其吸光度已趨穩定，為了提高工作效率，在實驗中選取放置時間為10min即可。2.3試驗結果2.3.1標準曲線按上述確定的條件，建立標準曲線。吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.5,2.0, 3.0,5.0,7.0,10.0ml 5g/ml標準工作液，于50ml比色管中，分別加入2ml對氨基苯磺酸（20%鹽酸）溶液，搖勻，放置35min，再加入1ml鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，搖勻，放置10min，在549nm處用蒸餾水作參比，作標準曲線測定，結果見圖2。當亞硝酸鈉濃度在01.0g/ml范圍內，與吸光度

9、之間呈良好的線性關系，回歸方程為：A=2.036C+0.0276，R2=0.9982。實際曲線呈兩邊彎曲，用不同濃度及不同時間作標線時，其回歸方程斜率K的變化在2.0002.400之間變化，截距在00.03A之間變化。因此在測試時盡量選取與實際濃度相近值來制作標準曲線，這樣可減少誤差，線性、回收較好的濃度范圍在0.050.7g/ml之間。回歸線實際線 圖2. 亞硝酸鈉濃度C與吸光度A的標準曲線2.3.2氯化鈉對吸光度的影響將40克不含亞硝酸鹽的氯化鈉試劑（600灼燒，去除亞硝酸鹽）溶解于250ml蒸餾水中，分別吸取0、15、25ml，置于50ml比色管中，分別加入1ml2g/ml亞硝酸鈉標準工

10、作液，加入2ml對氨基苯磺酸及1ml鹽酸萘乙二胺溶液，放置不同時間測定吸光度，結果如表4。表4. 氯化鈉對吸光度的影響加入氯化鈉的量（ml）01525放置時間（min）103045103045103045吸光度0.0980.0950.0950.1010.0980.0960.1040.1010.100從表4可看出氯化鈉對溶液的吸光度稍有影響，但總的影響不大。加入氯化鈉后其線性R=0.9998，回歸方程斜率與不加氯化鈉時的基本一致，兩線截距相差僅0.007，小于0.01，因此應該說氯化鈉的影響不大，見表5、圖3。如為了提高準確度時，可在標液中同時加入與樣品相同量的不含亞硝酸鹽的氯化鈉試劑作標線或通

11、過減空白方式消除氯化鈉的影響。2.3.3加碘食鹽中的碘酸鉀對測定的影響在圖3中也可明顯看出碘酸鉀對測定過程的影響，同一濃度的亞硝酸鹽溶液中加碘酸鉀與不碘鉀其對應的吸光度呈明顯的變化。在圖3中加入碘酸鉀后其標準曲線斜率變化不大，其截距比純亞硝酸鹽溶液和加入氯化鈉的亞硝酸鹽溶液的標線明顯增加。表5. 氯化鈉、碘酸鉀對標準曲線測定的影響比較表亞硝酸鈉濃度g/mL吸光度ABS.不加其他加NaCl加NaCl加碘酸鉀0.000 0.004 0.010 0.036 0.016 0.042 0.049 0.073 0.032 0.079 0.087 0.108 0.048 0.115 0.122 0.146

12、0.064 0.152 0.161 0.183 0.080 0.190 0.197 0.220 線性方程A=2.3143C+0.0044A=2.3321C+0.011A=2.3000C+0.0357R20.99990.99980.9999注：加入氯化鈉為4g，加入碘酸鉀量相當于32g/g的碘鹽中碘酸鉀的量。圖3. 氯化鈉、碘酸鉀對標準曲線的影響在加碘食用鹽樣品測試過程中發現，當取的量增加到一定程度時，其顏色會發生根本的變化，見表6。試驗中，取10g不加碘食鹽隨著亞硝酸鹽標液量的增加無此現象發生，如加入一定量的KIO3，也會產生上述變色現象，氯化鈉的存在會加劇這一現象的發生，但如改加KI溶液，則

13、不出現此現象。表6.不同量加碘食鹽顏色的變化情況樣品所取的量（g）加標液量顏色變化情況描述50著色劑加入搖勻，顏色慢慢變成淡紫色，顏色變化正常；0.30.97.50著色劑加入搖勻，馬上出現粉紫色，隨即消失變淺暗略帶黃色；0.30.9著色劑加入搖勻，馬上出現深紫色，隨即消失變淺紫中略帶黃色；100著色劑加入搖勻，馬上由深紫變暗淡黃漸變淺，幾乎沒有顏色。0.30.92.3.4 碘酸鉀用量與鹽酸濃度、放置時間對吸光度的影響為了研究加碘食鹽中不同含碘量樣品，由于碘酸鉀含量不一致是否會對亞硝酸鹽結果產生影響，同時確定標線中加入碘酸鉀的量，以及合適的放置時間。對此對碘酸鉀、鹽酸濃度（配制對氨基苯磺酸時的鹽

14、酸濃度）、放置時間三因素進行了正交試驗，結果如表7、圖4。從圖中可以直觀的看出，當加入碘酸鉀（0.04mol/L）量為0.1ml（相當于碘鹽含碘量為20g/g）時，酸度大小不影響其吸光度，隨著碘酸鉀加入量增加到0.2、0.3ml（相當于碘鹽含碘量為40、60g/g）時，酸度大小對吸光度的影響越來越大，當酸度達到30%時加入碘酸鉀0.20.3ml時，其吸光度不受影響；放置時間基本上需30min以后達到平衡，不管是測定數據還是從肉眼觀察，加入氯化鈉和碘酸鉀后其顏色達到平衡時間比不加要慢。時間(min)05101530456075圖表系列號HCl濃度(%)KIO3量(ml)吸光度(A)100.10.

15、0870.0980.0990.1010.1120.1180.1190.11910.20.0950.1060.1100.1150.130.1360.1380.1420.30.1510.1620.1640.1660.1770.1790.1820.1833200.10.0820.0980.1010.1030.1150.1190.1210.12140.20.0940.1150.1240.1320.1380.1390.140.14150.30.1250.1390.1410.1440.1530.1550.1560.1566300.10.0750.0970.1010.1040.1140.1190.1210.

16、12270.20.0920.1190.1300.1310.1410.140.1410.1480.30.1150.1290.1320.1320.140.1390.140.1399表7. 鹽酸濃度、放置時間、碘酸鉀用量對吸光度的影響圖4. 鹽酸濃度、放置時間、碘酸鉀用量對吸光度的影響的比較圖不加碘食用鹽樣品精密度與回收率試驗 精密度試驗：稱取50克鹽樣溶解于250ml容量瓶中，加水至刻度搖勻，用定量濾紙干過濾，吸取25ml濾液，置于50ml比色管中，加入2ml對氨基苯磺酸（20%鹽酸）溶液，混勻后放置5min，再加入1ml鹽酸萘乙二胺溶液，加水定容，混勻，放置10 min后，在549nm波長下測定

17、。同一樣品測定6次。標準曲線為不加氯化鈉的標液。結果見表8。回收率試驗：同上述鹽樣液一樣的處理辦法，吸取25ml過濾液若干份于50ml比色管中，分別加入0.4、0.8ml 2g/ml標液；稱取上述相同樣品50克2份溶解于250ml容量瓶中，分別再加入5、10ml 2g/ml的亞硝酸鈉工作標液，加水定容，余下操作同精密度試驗。結果見表8。表8. 不加碘食用鹽精密度、回收率試驗結果表加碘食用鹽樣品精密度及回收率試驗所取樣品為含碘量34g/g日曬鹽（樣液1）及含碘量為28g/g的日曬自然鹽（樣液2），所加對氨基苯磺酸溶液為30%的鹽酸溶液作溶劑，標線溶液中加5gNaCl和與樣品相當量的碘酸鉀溶液，放

18、置時間為30min。其余操作同不加碘食用鹽，結果見表9。表9. 加碘食用鹽精密度與回收率試驗結果序號樣液1（g/g）樣液2（g/g）樣液 濃度加標0.4g/g加標0.8g/g樣品濃度加標0.3g/g加標1.0g/g10.5340.9721.356-0.0210.2870.96020.5330.9511.3120.0050.3070.96330.5490.8901.277-0.0090.3070.92140.5660.9141.3090.0100.2920.92450.5451.2860.0010.2650.92960.5291.341-0.0110.2980.961平均值0.5430.9321

19、.313-0.0040.2930.943標準偏差0.0140.0370.0300.0110.0160.020CV%2.583.972.285.462.12回收率%97.2596.2597.6794.30注所用標線加氯化鈉及碘酸鉀所用標線不加氯化鈉及碘酸鉀三、討論1、不加碘食用鹽測定時從表8結果可看出不加碘食用鹽采用標準工作曲線法測定是可行的，其變異系數在1.115.43%，回收率在100105%之間，說明該方法有較好的精密度和準確度。用重氮偶合分光光度法測定不加碘食鹽其亞硝酸鹽含量時，只需要對樣品溶解后的樣液進行過濾處理，不需要其它處理，即可直接測定，方法簡便快捷，結果準確可靠，樣品中亞硝酸鈉含量在5g/g之內，氯化鈉對測定結果影響不大。但試驗中發現氯化鈉會影響亞硝酸根離子與對氨基苯磺酸反應速度，試驗中要注意在加入對氨基苯磺酸后必須放置5min以上，時間太短會影響其最終結果。2、加碘食用鹽測定時表9結果顯示，加碘食用鹽采用在標準工作液中加與樣品同樣量的氯化鈉和碘酸鉀溶液制作標線，或通過減空白（與樣品相當量的氯化鈉和碘酸鉀溶液），然后測定其結果有較好的相對標準偏差和較好的回收率，表明方法可行。