1、名詞解釋生物技術、RAPD、 酶單位、載體、 質粒、 基因工程，退火， 基因組文庫，cDNA 文庫 ， PCR，轉化， DNA 甲基化，RFLP， ISSR， 植物基因工程，感受態(tài)細胞，受體細胞，工具酶、 YAC、探針、AFLP、基因芯片、質粒、基因治療、基因打靶、基因療法、原位雜交、分子標記、核酸分子雜交選擇題(單選和多選)1、第一個作為重組DNA 載體的質粒是()(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl82、n型限制性內切核酸酶 ()(a)有內切核酸酶和甲基化酶活性且經常識別回文序列(b)僅有內切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供(c)限制性識別非甲基

2、化的核甘酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供3、在下列試劑中，那一種可以螯合Ca2+離子()(a)EDTA(b)檸檬酸鈉(c)SDS (d)EGTA4、同一種質粒DNA ，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是()(a)OCDNA>SCDNA>LDNA(b)SCDNA>LDNA>OCDNA(c)LDNA>OCDNA>SCDNA(d)SCDNA>OCDNA>LDNA5、黏粒(cosmid)是一種人工建造的載體()(a)它具有COS位點，因而可進行體外包裝(b)它具有質粒DNA的復制特性

3、進入受體細胞后，可引起裂解反應(d)進入受體細胞后，可引起溶源化反應6、用堿法分離質粒DNA 時，染色體DNA 之所以可以被除去，是因為()(a)染色體DNA斷成了碎片(b)染色體DNA分子量大，而不能釋放(c)染色體變性后來不及復性(d)染色體未同蛋白質分開而沉淀7、根據構建方法的不同，基因文庫分為基因組文庫、cDNA 文庫等。在下列文庫中()屬 cDNA 文庫(a) YAC 文庫(b) MAC 文庫(c) 扣減文庫(d) BAC 文庫8、關于感受態(tài)細胞性質的描述，下面哪一種說法不正確()(a)具有可誘導性(b)具有可轉移性(c)細菌生長的任何時期都可以出現(xiàn)(d)不同細菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例是不

4、同的9、在利用lacZ 失活的顯色反應篩選法中，IPTG 的作用是()(a)誘導宿主的“肽的合成(b)誘導宿主的3肽的合成(c)作為酶的作用底物(d)作為顯色反應的指示劑10、基因工程發(fā)展史上理論上的三個重要發(fā)現(xiàn)是()(b)DNA 雙螺旋結構和半保留復制機理的建立(a) DNA 的發(fā)現(xiàn)遺傳信息傳遞方式(中心法則) (d)限制性內切酶和DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)(e)載體的使用基因的體外重組3、在下列進行DNA 部分酶切的條件中，控制那一項最好?()(a)反應時間(b)酶量(c)反應體積(d)酶反應的溫度4、下列哪種克隆載體對外源DNA 的容載量最大?()(a)質粒 (b)黏粒(c)酵母人工染色體(YA

5、C) (d) 噬菌體(e) cDNA表達載體5、黏粒(cosmid)是一種人工建造的載體，()(a)它具有COS位點，因而可進行體外包裝(b)它具有質粒DNA的復制特性(c)進入受體細胞后，可引起裂解反應(d)進入受體細胞后，可引起溶源化反應6、關于堿解法分離質粒DNA ,下面哪一種說法不正確 ?()(a)溶液I的作用是懸浮菌體(b)溶液II的作用是使 DNA變性(c)溶液出的作用是使 DNA復性(d)質粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復性7、 cDNA 文庫包括該種生物的()(a)某些蛋白質的結構基因(b)所有蛋白質的結構基因(c)所有結構基因(d)內含子和調控區(qū)8、 Sout

6、hern 印跡是用DNA 探針檢測DNA 片段，而Northern 印跡則是：()(a)用RNA探針檢測DNA片段 (b)用RNA探針本測RNA片段(c)用DNA探針檢測RNA片段 (d)用DNA探針檢測蛋白質片段9、同一種質粒DNA ，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：()(a)OCDNA>SCDNA>LDNA(b)SCDNA>LDNA>OCDNA(c)LDNA>OCDNA>SCDNA(d)SCDNA>OCDNA>LDNA10、在基因工程中，可用堿性磷酸酶()(a)防止DNA的自身環(huán)化(b)同多核甘酸激酶一起進行 DNA的5,末端

7、標記制備突出的3,末端(d)上述說法都正確簡答題質粒作為理想的基因工程載體應具備哪些特點？在提取 DNA 的過程中，用無水乙醇和異丙醇均可沉淀DNA 有什么區(qū)別？在堿法提取質粒的過程中應注意哪些問題？與其他轉基因方法相比，基因槍法有哪些優(yōu)點？如果一個DNA 酶解液在電泳后發(fā)現(xiàn)DNA 未被切動，你認為可能是什么原因。基因工程的研究內容是什么？基因組文庫與cDNA 文庫有何區(qū)別？PCR引物設計的原則是什么？基因工程操作要求受體細胞應該具備哪些特點？簡述農桿菌介導的基因轉化的特點及其在基因轉化過程中的影響因素？植物基因轉化受體建立中常常會遇到哪些問題？基因工程的基本操作程序包括哪幾部分內容？基因組文

8、庫與cDNA 文庫有何區(qū)別？影響凝膠電泳的因素有哪些？采用 CTAB 法提取植物基因組DNA 的基本原理是什么？限制性內切酶的活性受哪些因素影響？理想的分子標記必須達到的要求是什么？CTAB和SDS法提取核酸的原理各是什么？如何對轉基因植株進行檢測？制備目的基因片段的途徑有哪些？什么是cDNA文庫(complementDNAlibrary)?同基因組文庫有何差別？列舉質粒載體必須具備的幾個基本特性。什么是 Western印跡？它與Southern印跡有什么不同？分子標記有哪幾種類型？YAC 載體具有什么樣的功能性DNA 序列？為什么在克隆大片段時，YAC 具有優(yōu)越性？論述題 、如果實驗中對照組

9、本不該長出菌落的平板上長出了一些菌落，你如何解釋這種現(xiàn)象？請論述植物基因工程在農業(yè)上的應用的研究進展前景根據所學的知識，論述農桿菌介導的基因轉化和基因槍轉化法兩種方法的基本原理以及在農業(yè)生產上的應用。請詳述PCR技術的原理、種類以及在生產實際中的應用情況利用學過的知識設計一個植物基因轉化的試驗方案根據所學知識列出兩個PCR 使用過程中常發(fā)生的問題，并提出解決方案。目前，許多目的基因的產物是未知的，特別是建立在遺傳表型分析基礎上的目的基因，試述克隆這些產物未知的目的基因的策略是什么，并簡要介紹一下其基本原理。如何以大腸桿菌質粒DNA 為載體克隆一個編碼植物激素的基因，并使之在大腸桿菌中進行表達?

10、簡要說明實驗中可能遇到的問題及可能的解決辦法。、名詞解釋一、填空題（20 分，每個4分 ）轉化：是指將外源DNA 引入受體細胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究的基本實驗技術。DNA 的物理圖譜：是指DNA 鏈的限制性酶切片段的排列順序，即酶切片段在DNA 鏈上的定位。因限制性內切酶在DNA 鏈上的切口是以特異序列為基礎的,核苷酸序列不同的DNA， 經酶切后就會產生不同長度的DNA 片段,由此而構成獨特的酶切圖譜。因此， DNA物理圖譜是DNA 分子結構的特征之一。酶單位： 反映某一特定條件下，使單位時間內反應物的變化量達到某一程度所需要的酶量。酶單位都

11、是以酶活力為根據而定義的。載體：把一個有用的目的基因DNA 片段通過重組DNA 技術，送進受體細胞中去進行繁殖和表達的工具叫載體。目前使用的載體主要有四大類：質粒，噬菌體入、單鏈噬菌體和粘粒。質粒：是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb 不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA 分子，并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細胞中。主要發(fā)現(xiàn)于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復制和轉錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達所攜帶的遺傳信息。二、填空題：1、變性、退火、延伸2、雙鏈環(huán)狀 DNA線狀DNA超螺旋狀DNA3、CTAB核酸復合物，CTAB核酸復合物，殘留 RNA4、火藥爆炸力型、高壓氣體動力型、

12、高壓放電動力型5、凝膠濃度，DN冊子的大小和構象，電泳緩沖液、指示劑、染色6、電荷、分子大小及形狀（每題5 分，共30 分）1、質粒作為理想的基因工程載體應具備哪些特點？1）一個復制起點2）可選擇的標記，是鑒定細胞是否攜帶載體所必需的。3）合成的單一限制酶酶切位點4）插入標記，是用來觀察外源基因是否插入。5）合適的大小，質粒應該相對的小，小質粒不易受物理損傷，而且限制酶的酶切圖譜較簡單，另外，小質粒一般具有較高的拷貝數(shù)。( 6)高拷貝數(shù)，基因工程應該選擇具有高拷貝數(shù)的松弛型的質粒為載體。不同的質粒有不同的拷貝數(shù)。( 7)不易丟失2在提取DNA 的過程中，用無水乙醇和異丙醇均可沉淀DNA 有什么

13、區(qū)別？在提取DNA的過程中，利用無水乙醇和異丙醇均可沉淀 DNA,但它們之間是有區(qū)別的：沉淀 DNA 通常使用冰乙醇，在低溫條件下放置時間稍長可使DNA 沉淀完全，而且沉淀的多數(shù)是大片段的DNA。利用冰冷的異丙醇(一般用等體積)也可沉淀DNA,而且沉淀速度快，沉淀完全，但常把鹽 沉淀下來，所以多數(shù)還是用乙醇。3、在堿法提取質粒的過程中應注意哪些問題？(1) 整個過程都需要在低溫下操作(2) 加入溶液II 和溶液 III 后操作應混和，切忌劇烈振蕩。(3) 在提取的過程中應該保持動作溫和，不要劇烈振蕩(4) 提取過程中除去蛋白很重要，采用酚/氯仿去除蛋白效果較單獨用酚或氯仿好，要將蛋白盡量除干凈

14、需多次抽提。4、與其他轉基因方法相比，基因槍法有哪些優(yōu)點？與其它遺傳轉化方法相比較，有以下優(yōu)點：A、 無 宿主限制：根癌農桿菌只對某些雙子葉植物敏感，而對多數(shù)單子葉植物尤其是重要的禾谷類作物不敏感，從而大大限制了它的應用范圍。基因槍技術沒有物種限制，對雙子葉和單子葉植物都可適用，對動物、微生物也同樣適用。B、靶受體類型廣泛：PEG法、脂質體法、電擊法等介導基因轉化需要以原生質體作為受體細胞。由于原生質體不易培養(yǎng)和再生，或再生周期長，基因型依賴性強，使這些方法的應用受到限制。基因槍技術可以選用易于再生的受體，繞過原生質體再生的困難。它不僅以原生質體、葉圓基為靶受體，而且懸浮培養(yǎng)細胞、莖或根切段以

15、及種子胚、分生組織、幼穗、幼胚、愈傷組織、花粉細胞、子房等幾乎所有具有潛在分生能力的中組織或細胞都可以用基因槍進行轟擊轉化。C、 可 控度高：近代的高壓放電或高壓氣體基因槍已可根據實驗需要無級調控微彈的速度和射入濃度，可以較高的命中率把DNA 微粒載體射入特定層次的細胞，即廠家態(tài)細胞和分生區(qū)細胞，從而為基因轉化提供可靠的技術措施D 、 操 作簡便快速，甚至可克服無菌的困難5、如果一個DNA 酶解液在電泳后發(fā)現(xiàn)DNA 未被切動，你認為可能是什么原因。可能的原因是：(1) 所加的限制性酶已失活，(2) DNA 片段結構的特殊性，對酶要求高，或相對應的酶切位點很少(3) 電泳時所加的電極緩沖液的離子

16、強度太大使DNA 分離不明顯，或者是離子強度太小，使 DNA 沒有泳動。(4) 瓊脂糖的濃度沒有控制好，(5) 有外來 DNA 的污染三、為了提高轉化效率，實驗中要考慮哪幾個方面的因素(15 分) 。(1) 細胞生長狀態(tài)和密度：不要用經過多次轉接或儲于4 度冰箱的培養(yǎng)菌。最好多 -70 度或-20 度甘油中保存的菌種中直接用于制備感受態(tài)細胞的菌液。細胞生長密度以剛進入對數(shù)生長期為好，可通過監(jiān)測培養(yǎng)液的OD600 來控制。(2) 質粒的質量和濃度：用于轉化的質粒DNA 主要是超螺旋狀態(tài)DNA(cccDNA) 。轉化效率和外源DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA 的量過多或體積過

17、大時，轉化效率就會降低。一般情況下，DNA 溶液的體積不應超過感受態(tài)細胞體積的5%。(3) 試劑的質量：所用的試劑，均需是最高純度的(GR 或 AR) ，并用超水配制，最好分裝于干燥的冷暗處。(4) 防止雜菌和雜DNA 的污染：整個操作過程均需在無菌條件下進行，所用器皿如離心管最好是新的，并經高壓滅菌處理，所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA 酶或雜 DNA 所污染，否均會影響轉化效率或雜DNA 的轉入，為以后的篩選、鑒定帶來不必要的麻煩。四、如果實驗中對照組本不該長出菌落的平板上長出了一些菌落，你如何解釋這種現(xiàn)象？(15 分)在實驗過程中對照組不該長出菌落的平板上長出了一些菌落，

18、這種現(xiàn)象的可能原因是：(1) 操作過程儀器、器皿等不是無菌的，出現(xiàn)了一些雜菌和雜DNA 的污染(2) 細菌在感受態(tài)時發(fā)生了一些自然變異，對所加的抗生素有一定的抗性，所以長出一些菌落(3) 所加的抑菌抗生素濃度不夠，不能夠抑制住細菌的生長(4) 一些實驗誤差，錯將菌液放錯五、假如用高效液相色譜分析內源植物激素，應從哪些方面考慮提高結果的準確性？(20)可從樣品的制備、高效液相色譜柱的選擇、流動相的選擇、分離條件的選擇及操作過程等六個方面來考慮：(1) 植物內源激素的提取：提取所用的試劑，即提取液的配比要達到最適，使提取物能夠達到較高的純度，并且在操作過程中力求準確，離心的條件，離心機的轉數(shù)要調整到最適范圍。(2) 植物內源激素的純化：A 純 化可用離子層析法，一般選用磷酸纖維素陽離子柱效果最好，離子層析過程中，需選擇合適的洗脫液，控制好洗脫液的流速，洗脫液收集的最適范圍，每種激素的洗脫液的體積都要估計準確。8 高 效液相色譜分析中要注意的是：1) 溶劑的純化：一般選擇“色譜純”的溶劑，如甲醇、乙腈等作為溶劑，必要時需進行純化操作，不純的溶劑會使色譜柱堵塞，且直接影響分析結果。2) 流動相的選擇：一般用甲醇、乙腈等與水配比形成流動相，要求流動相在檢測 波長下無背