1、20082009學(xué)年第二學(xué)期實(shí)訓(xùn)一 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制備（6學(xué)時(shí)）一、目的和要求1、掌握鹽析法的原理和操作；2、掌握等電點(diǎn)沉淀法的原理和基本操作。二、實(shí)驗(yàn)原理牛奶中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，乳蛋白素是一種廣泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白質(zhì)。酪蛋白在pH4.8左右會(huì)沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才會(huì)沉淀。利用此一性質(zhì)，可先將pH降至4.8，或是在加熱至40的牛奶中加硫酸鈉，將酪蛋白沉淀出來(lái)。酪蛋白不溶于乙醇，這個(gè)性質(zhì)被利用來(lái)從酪蛋白粗制劑中除去脂類雜質(zhì)。將去除掉酪蛋白的濾液的pH調(diào)至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分雜質(zhì)即可隨澄清液除去。再經(jīng)過(guò)一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素

2、。三、實(shí)驗(yàn)材料1、材料脫脂牛乳或低脂牛乳（50ml）、蒸餾水2、器材100ml量筒、100ml燒杯（2個(gè)）、250ml燒杯、水浴鍋、玻璃棒、布氏漏斗、濾紙、抽濾瓶、真空泵、pH計(jì)、pH試紙、離心機(jī)、離心管、磁力攪拌器3、試劑無(wú)水硫酸鈉、無(wú)水乙醇、濃HCl、NaOH0.1mol/L HCl溶液配制：用潔凈的量杯（或量筒）量取9mL濃鹽酸，注入盛有1000mL水的試劑瓶中，蓋上玻璃塞，搖勻。（一般來(lái)講最濃的濃鹽酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)是37.5%，量濃度約是12mol/L，密度1.183g/cm³左右。）0.1mol/L NaOH溶液配制：稱取4克氫氧化鈉固體，用少量蒸餾水溶解，將溶液轉(zhuǎn)移到1L的容量

3、瓶中，定容，搖勻。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、鹽析沉淀法制備酪氨酸（1）將50ml牛乳倒入100ml燒杯中，于40水浴中加熱并攪拌。（2）向上述燒杯中緩緩加入（約10min內(nèi)分次加入）10g無(wú)水硫酸鈉，再繼續(xù)攪拌10min。（或者是書中所講述的部分-）（3）將溶液用布氏漏斗過(guò)濾，分別收集沉淀和濾液。沉淀懸浮于30ml乙醇中，傾于布氏漏斗中過(guò)濾除去乙醇溶液，抽干。將沉淀從布氏漏斗中移出，在表面皿上攤開(kāi)以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。準(zhǔn)確稱重。2、等電點(diǎn)沉淀法制備乳蛋白素（1）將制備酪蛋白操作步驟（3）所得濾液置于100ml燒杯中，一邊攪拌，一邊利用pH計(jì)以濃鹽酸調(diào)整pH至3±0.1。（2）將溶液

4、倒入離心管中，6000r/min離心15min，倒掉上層液。（3）在離心管內(nèi)加入10ml去離子水，振蕩，使管內(nèi)下層物重新懸浮，并以0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至8.59.0，此時(shí)大部分蛋白質(zhì)均會(huì)溶解。（4）將上述溶液以6000r/min離心10min，上層液倒入50ml燒杯中。（5）將燒杯置于磁攪拌加熱板上，一邊攪拌，一邊利用pH計(jì)以0.1mol/L鹽酸調(diào)整pH至3±0.1。（6）將溶液倒入離心管中，6000r/min離心10min，倒掉上層液。取出沉淀干燥，并稱重。五、注意事項(xiàng)離心機(jī)的使用安全：1、使用前，離心管和離心物一定要對(duì)稱平衡；2、離心開(kāi)始時(shí)，設(shè)置好了轉(zhuǎn)速和時(shí)間，一定要等到轉(zhuǎn)速穩(wěn)定了后，人才能離開(kāi)；3、離心結(jié)束，只有儀器報(bào)警了，且轉(zhuǎn)速完全為零后，才能打開(kāi)離心機(jī)蓋。六、結(jié)果與討論1、計(jì)算出每100ml牛乳所