1、氯血紅素對大鼠缺氧性肺動脈高壓的作用肺動脈平滑肌細胞增殖引起的肺血管重構是造成慢性阻塞性肺疾病（COPD）缺氧性肺動脈高壓的病理形態學基礎。誘導型血紅素氧合酶（HO-1）在缺氧狀態下表達增多，分解血紅素產生的CO可抑制肺動脈平滑肌細胞（PASMC）增殖。我們檢測了血紅素氧合酶促進劑氯血紅素(Hemin)對慢性缺氧大鼠肺組織中HO-1基因表達及肺動脈壓的影響。材料與方法按薛全福方法1復制動物模型。雄性Wistar大鼠72只，體重200300 g，隨機分為下列3組，每組各8只。Hemin干預組：即每次缺氧前0.5 h腹腔注射Hemin 15 mg/kg體重，分別在5 d、10 d、15 d進行檢測

2、；單純缺氧組：在每次缺氧前0.5 h注射等量生理鹽水，分別在5 d、10 d、15 d進行檢測；另設正常對照組，也分別在5 d、10 d、15 d進行檢測。RVSP和RV/(LV+SP)檢測及病理觀察：在預定的時間點,經右側頸外靜脈插管至右心室，導管另一端通過壓力傳感器接多導生理記錄儀(日本Nihon Kohden)，記錄右室壓力峰值作為右心室收縮壓（RVSP）。剪取大鼠右心室游離壁（RV）及左心室（LV）加室間隔（SP），分別稱其濕重，計算右心肥大指數RV/(LV+SP)。肺組織標本經HE染色，光鏡下觀察腺泡內肺動脈(IAPA)管壁厚度及管腔大小。逆轉錄多聚酶鏈反應（RT-PCR）：使用TR

3、Izol試劑盒(美國GibcolBRL)提取總RNA，取2 g總RNA進行逆轉錄反應，逆轉錄產物取2 l進行PCR。HO-1引物的設計依據大鼠HO-1序列2，正向引物：5-GAA TTC AGC ATG CCC CAG GAT TTG-3，反向引物：5-TCT AGA CTA GCT GGA TGT TGA GCA GGA-3， 擴增的目的片段長615 bp。大鼠-actin正向引物：5-GAG CAC CCT GTG CTG CTC ACC CTA GG-3，反向引物：5-GTG GTG GTG AAG CTG TAG CCA CGC T-3，目的片段長310 bp。使用50 l反應體系同時

4、擴增HO-1和-actin，PCR的具體循環參數為：94 5 min；94 1 min，56.1 1 min，72 1 min，35個循環，末次循環延伸時間為72 10 min。循環完成后，取10 l PCR產物進行電泳、照相、掃描，用HPIAS-1000像分析系統進行分析，結果以HO-1/-actin的積分光密度表示。統計學處理：進行t檢驗。結果(1)在單純缺氧組各時相點，RVSP和RV/(LV+SP)明顯高于正常對照組（P0.01或P0.05），且呈逐漸上升的趨勢。Hemin干預組各時相點RVSP和10 d、15 d的RV/(LV+SP)顯著低于單純缺氧組各相應時相點（P0.01或P0.0

5、5），但高于正常對照組（P0.01或P0.05，表1)。(2) HE染色顯示，常壓缺氧15 d大鼠IAPA較正常大鼠管壁增厚，管腔明顯狹窄，而經Hemin干預后，上述病理改變減輕（13）。(3)RT-PCR分析顯示，單純缺氧組各時相點HO-1 mRNA水平明顯高于正常對照組（P0.01），且有逐漸升高的趨勢。Hemin干預組各時相點HO-1 mRNA水平均顯著高于正常對照組及單純缺氧組（P0.05，表1，4)。表1各組大鼠不同時相點RVSP、RV/(LV+SP)及HO-1 mRNA的變化(s)組別鼠數RVSP（mm Hg）RV/(LV+SP)(%)HO-1mRNA5 d10 d15 d5 d1

6、0 d15 d5 d10 d15 d正常對照組834.13.431.32.933323.12.522.52.722.72.10.420.030.390.040.410.03單純缺氧組848.83.8*55.34.3*643*29.93.2*36.83.7*43.94.0*0.980.04*1.510.06*1.700.07*Hemin干預組840.32.8*48.34.6*533*27.03.9*30.73.5*39.83.0*1.930.08*2.060.08*1.980.07*注：單純缺氧組、Hemin干預組各時相點與正常對照組比較 *P0.01，*P0.05; Hemin干預組與單純缺氧

7、組間對應的時相點比較 P0.01， P0.05, 1 mm Hg=0.133 kPa1正常對照組大鼠IAPAHE2002單純缺氧組大鼠IAPAHE2003Hemin干預組大鼠IAPAHE200A：正常對照組；B：缺氧5 d；C：缺氧10 d；D：缺氧15 d；E：Hemin干預5 d；F:Hemin干預10 d；G：Hemin干預15 d；M：PCR marker，從上到下依次為237、377、515、695、994、1 543 bp4RT-PCR的電泳結果討論COPD導致肺泡缺氧，引起缺氧性肺動脈高壓（PAH）。在肺動脈高壓的晚期，肺血管重構越重，給PAH的治療帶來了很大的困難。1968年T

8、enhunne等3首次發現HO酶，HO在體內將血紅素分解產生CO。近來發現多種應激原，如缺氧、高熱、內毒素、休克、創傷等都可誘導HO-1表達，這是機體在應激狀態下的一種適應性反應。本組實驗使用較敏感的RT-PCR方法檢測正常及缺氧不同時相點的大鼠肺組織發現，在正常大鼠肺組織有低水平的HO-1 mRNA，而在缺氧第5 d、10 d、15 d，HO-1 mRNA水平升高24倍，在缺氧15 d時為最高。說明缺氧可以誘導大鼠肺組織HO-1基因的表達。隨著缺氧時間的延長，RVSP和RV/(LV+SP)也逐漸升高，與HO-1 mRNA水平的升高相關，說明右心室收縮壓間接反映了肺動脈壓的水平。Hemin可誘

9、導HO-1基因表達增強，促進內源性CO產生4。本組實驗發現，Hemin干預后可使缺氧大鼠肺組織中HO-1 mRNA維持在高水平，顯著高于正常對照組及單純缺氧組各相應時間點，Hemin干預組RVSP和RV/(LV+SP)則顯著低于單純缺氧組各相應時相點。這說明Hemin使缺氧大鼠肺組織HO-1基因高表達，促進內源性CO產生后，改善了缺氧時大鼠肺血流動力學的改變及對右心室的不利影響。同時Hemin干預組大鼠IAPA管壁增厚、管腔狹窄等血管重構的特征較單純缺氧組也有所改善。這說明，Hemin可通過促進HO-1基因表達增強，使CO產生增多，阻抑肺血管重構，在缺氧性肺動脈高壓的形成中起調節作用。作者單位

10、：甄國華（430030 武漢，同濟醫科大學附屬同濟醫院呼吸疾病研究室）張珍祥（430030 武漢，同濟醫科大學附屬同濟醫院呼吸疾病研究室）徐永健（430030 武漢，同濟醫科大學附屬同濟醫院呼吸疾病研究室）參考文獻1薛全福，謝劍鳴，胡長貴，等. 常壓缺氧性肺動脈高壓模型的建立. 中華結核和呼吸雜志，1989,12:350-352.2Shibahara S, Muller R, Taguchi H. Cloning and expression of cDNA for rat heme oxygenase. Proc Natl Acad Sci USA, 1985, 82：7865-7869.3Tenhunne R, Marver HS, Sohmid R. The enzymatic conversion of heme to bilirubin by microsomal heme oxygenase. Proc Natl Acad Sci USA, 1968,