1、功能性食品的設計方案：一 . 設計題目：增強人體免疫力香菇（香菇多糖）二 . 香菇多糖提取方案： 原理：香菇多糖， 是從優質香菇子實體中提取的有效活性成分，經熱 水提取的香菇多糖可調節人休內有免疫功能的 T 細胞活性，可降低甲 基膽蒽誘發腫瘤的能力，從而提高人體的免疫能力。實驗方法1 提取將香菇洗凈后除根部后切除根部， 菌傘切成小塊， 放入真空干燥箱 （低溫）烘干，然后將烘干的香菇小塊放在研缽里研磨。用臺秤量取香菇粉20g,置于250ml燒杯中，加入100ml蒸餾水， 于石棉網上加熱至沸，并不斷攪拌，煮沸30min后，抽濾。濾渣再用100ml蒸餾水溶液煮沸30min,抽率。合并兩次濾液，然后將

2、合并后的 濾液加熱濃縮至20ml,溶于100ml95%乙醇，攪拌并冷卻至室溫，靜 置1h。將混合液以4000r/min的轉速離心10min,得到的沉淀放在真 空干燥器中干燥，得到粗香菇多糖。2. 除蛋白將得到的粗糖50ml100C熱水溶解，加Sevage溶液氯仿：正丁 醇=5: 1 （V/V） 10ml,劇烈震動 10mim,靜置 10min, 4000r/min 離 心 10min, 取上層清液，加 Sevage 溶液反復操作 5 次3. 純化將提取的粗糖置于燒杯中，加蒸餾水 50ml溶解，向溶液中加入等體積0.15mol/l的CTAB與硼酸-硼砂緩沖液處理，靜置10min, 4000r/m

3、in離心得沉淀用2mol/l乙酸溶解，靜置10min, 4000r/min 離心后去上清液加等體積甲醇，靜置 24h.三.香菇多糖注射液的用量及毒理學評價1. 用法用量：每周兩次，每次一瓶 2ml （含1mg，加入250ml生理 鹽水或5%葡萄糖注射液中滴注，或用5%葡萄注射液20ml稀釋后靜注。2. 毒理學評價：藥理作用：香菇多糖是一種具有免疫調節作用的抗腫瘤輔助藥物， 能促進T、B淋巴細胞增殖，提高NK細胞活性，從而提高人體免疫能 力。毒理研究重復給藥毒性：大鼠、犬和猴重復給藥試驗中均可見網狀內皮細胞腫大和增殖，在大鼠（0.03mg/kg , 1個月；0.01mg/kg , 3個月） 和猴

4、（2mg/kg, 6個月）中，可見中小動脈動脈炎，在2mg/kg組 中，部分犬和猴有胃腸道或膀胱出血及皮疹和潰瘍。以上病變除大鼠的動脈炎外，僅見于高劑量組，停藥后有恢復趨勢。猴和犬大劑量注 射本品可產生泡沫細胞和血管炎，泡沫反應表現過量的多糖進入組 織，特別是網狀內皮系統。遺傳毒性：本品致突變試驗結果陰性。生殖毒性：雌性大鼠妊娠前給予香菇多糖劑量達1.0mg/kg，未見異常。雄性大鼠給予0.01mg/kg未見授精異常，但在0.1和1.0mg/kg組可見輕至中度授精異常。在大鼠和免器官形成期給藥的試驗中，最大劑量分別為5.0mg/kg和1.0mg/kg，未見致畸作用，但仔鼠斷乳后 體重略低。大鼠

5、圍產期和哺乳期給予香菇多糖果劑量達5.0mg/kg時未見異常。四：香菇多糖的功能學評價選取六只生長狀況相近的小鼠，分為三組，每組都用電壓為0.2伏, 電流為45微安的電擊設備進行處理，使小鼠的胸腺萎縮，免疫功 能下降，然后注射一定量的香菇多糖液，觀察并測定小鼠的免疫力增 強情況，相同試驗重復三次。1. 試驗項目（動物試驗）（1）體重（絕對體重）（2）臟器|體重比值 胸腺|體重比值、脾臟|體重比值相對比值越大，免疫能力也越強。（3）細胞免疫功能測定：小鼠脾淋巴細胞轉化試驗、遲發型變態反 應*小鼠脾淋巴細胞轉化試驗：1. 采用刀豆蛋白A刺激T淋巴細胞，使母細胞發生增殖反應，活細 胞特別是增殖細胞中

6、的線粒體水解酶可將 MTT（黃色）分解成藍 紫色結晶。2. 721分光光度計570nim測定光密度值0D能反映細胞的增殖情 況。3. 受試樣品組的光密度差值顯著高于對照組的光密度差值，結果為陽性，需方差分析。* 遲發型變態反應：1. 二硝基氟苯(DNFB稀釋液與腹壁皮膚蛋白結合成完全蛋白，由此刺激 T 淋巴細胞增殖成致敏淋巴細胞， 47 天后，再將其涂抹 于耳部進行抗原攻擊， 使局部腫脹， 一般在抗原攻擊后， 2448 小時后達到高峰，其腫脹程度可以反應 DTHg度。2. 用左右耳的重量之差表示 DTH程度，受試樣品組的重量差值顯著 高于對照組的重量差值，判斷陽性，數據處理采用方差分析。(4)

7、 . 體液免疫功能測定：抗體生成細胞檢測，血清溶血素測定* 抗體生成細胞檢測：1. 經過綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞懸液與一定量的綿羊紅細胞 混合，在補體參與下， 使分泌抗體的脾細胞周圍的綿羊紅細胞溶 解，形成肉眼可見的空斑。2. 溶血空斑數反映抗體生成細胞數，用空斑數|十的六次方 脾細 胞數或空斑數|全脾細胞數表示，受試樣品組的空斑數顯著高于 對照組的空斑數，判斷陽性，數據處理采用方差分析。* 血清溶血素測定1. 用綿羊紅細胞免疫細胞后，產生抗綿羊紅細胞的抗體，利用其凝 集綿羊紅細胞的程度來檢測溶血素的水平。2. 血清凝集程度一般分為 5 級，受試樣品組的抗體水平顯著高于對 照組的抗體水平，判

8、斷陽性，數據處理采用方差分析。級別顯示： + 所有紅細胞均凝集 說明凝集能力很強+ 肉眼觀察到的大部分紅細胞凝集 說明凝集能力強+ 部分紅細胞凝集 - 說明凝集能力屬于中等強度+少部分紅細胞凝集 說明凝集能力弱-紅細胞完全不凝集（5）單核- 巨噬細胞功能測定：小鼠碳廓清試驗，小鼠腹腔巨噬細胞 吞噬雞紅細胞試驗* 小鼠碳廓清試驗1. 從小鼠尾靜脈注入稀釋的印度墨（ 100ml|kg ）立即計時，在一定 范圍內，體內碳顆粒被清除速率與血碳濃度呈指函數關系。2. 721分光光度計600nm測血液碳酸鈉溶液的光密度值，采用吞噬指數表示碳廓清能力，受試樣品組的吞噬指數顯著高于對照組的吞 噬指數，判定陽性

9、，數據處理采用方差分析。吞噬指數=（體重|肝+ 脾的重量）x k的三分之一次方* 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗1. 滴片法：巨噬細胞對光滑表面有粘附的特性，將含有巨噬細胞的 腹腔液滴在載玻片上，加入雞紅細胞，孵育一定時間后，沖洗掉 未粘附的細胞，固定染色，顯微鏡計數巨噬細胞數顯示吞噬細胞 率和吞噬指數。2. 721分光光度計600nm測血液碳酸鈉溶液的光密度值，采用吞噬指數表示小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力，受試樣品組的吞噬 指數顯著高于對照組的吞噬指數，判定陽性，數據處理采用方差 分析。（六）NK細胞活性測定1. 乳酸脫氫酶測定法：活碳含有的乳酸脫氫酶不能透過碳膜，受到NK殺傷后，乳酸

10、脫氫酶釋放到碳外，可使乳酸鋰脫氫，進而使NAD 還原成NADH,NAD再經遞氫體PMS5原INT成紫紅色化合物。2. 在酶標儀上490nm比色測定光密度值，根據公式計算 NK細胞活 性 =【（反應孔0D-自然釋放孔0D | （最大釋放孔0D 自然 釋放孔OD）】X 100%受試樣品組的NK細胞活性顯著高于對照組的 NK細胞活性，判定陽性，數據處理采用方差分析。2】試驗原則：1. 所有項目均為必測項目2. 采用正常或免疫力低下的模型動物進行實驗3】結果判定測定項目 2-5 的結果陽性或任一試驗的兩個劑量組的結果陽性 及測定項目 6 的一個以上劑量組為陽性， 則可判定該受試樣品具有免 疫調節作用。五適宜人群全體人群六自我評價：轉眼間，一學期的功能性食品課程已經結束了， 回想這一學期的表 現，總結如下：我仍然清楚的記得第一節課， 老師給我們進行的思想教育， 課后我 也自己思考了好多，明白自己為什么會迷茫，會找不到方向，最主要 的原因是缺乏動力和意志力因此，以后的每節課，我都會坐在第一排，認真聽講，不把這堂課當做考查課，而是想著多汲取點知識。對于老師上課提出的問題， 我也能認真思考，積級回答，幾乎沒有開過小差，保證了課堂效率， 但是課后疏于鞏固，在以后的學習中我會特別注意這一點的。在做實驗的環節中，我每次都會按時到，嚴格按照老師的要求，積 極主動的投入實驗中，并就