1、第一張、氣相色譜死時間tM(dead time)：不被固定相吸附或溶解的組分（如空氣、甲烷）通過色譜柱所需的時間。在色譜圖上即為從進樣開始到空氣色譜峰頂的時間，稱為死時間。保留時間tR(retention time)：流動相攜帶組分穿過柱長所需的時間。在色譜圖上為進樣開始到組分色譜峰頂的時間。調整保留時間tR：扣除死時間以后的保留時間。 tR= tR- tM相對保留值r21或a某組分2的調整保留值與另一組分1的調整保留值之比半峰寬Y1/2 峰高一半處的寬度 Y1/2 =2.35峰底寬Y 自色譜峰兩測的轉折點所作切線在基線上的截距 Y= 4分配系數 在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相間達到

2、分配平衡時的濃度比值，用K表示。 容量因子k（capacity factor） 在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相之間分配達到平衡時的質量比，稱為容量因子，也稱分配比，用k表示。 塔板理論 ：H = L / n理論塔板數（n）可根據色譜圖上所測得的保留時間（tR）和峰底寬（Y）或半峰寬（ Y1/2）按下式推算：或者tR及Y1/2或用同一物理量的單位色譜峰越，n越大，H越小，n或H為描述柱效能的指標有效塔板數（n有效） H有效=L/n有效速率理論范第姆特方程式A項為渦流擴散項；B/ u項為分子擴散項；C u為傳質項；u為載氣線速度，單位為cm/s。組分在柱內保留時間越長，B項越大，峰越寬使

3、用適當細粒度和顆粒均勻的擔體，并盡量填充均勻，液膜薄、選擇合適的載氣類型以及載氣流速是減少渦流擴散，提高柱效的有效途徑分離度：相鄰兩色譜峰保留值之差與兩組分色譜峰底寬度平均值之比，用R表示。分離度是色譜柱的總分離效能指標。 R=1.5時可認為色譜峰已完全分開。色譜分離基本方程 設兩相鄰峰的峰寬相等，即Y1=Y2，則表明R隨a和k有關，也與n有關。 分離度、柱效、柱選擇性的關系 例題：設有一對物質，其r2,1 =1.15,要求在Heff=0.1cm的某填充柱上得到完全分離，試計算至少需要多長的色譜柱？解：要實現完全分離，R1.5,故所需有效理論塔板數為：使用普通色譜柱，有效塔板高度為0.1cm,

4、故所需柱長應為：程序升溫：柱溫按照預定的加熱速率，隨時間作線性或非線性的增加。如，每分鐘2°C等。柱溫的選擇前提：柱溫不能高于固定液的最高使用溫度（通常低20-50）“相似相溶原理”(1)分離非極性物質一般選用非極性固定液，這時試樣中各組分按沸點次序先后流出色譜柱，沸點低的先出峰，沸點高的后出峰。(2)分離極性物質，選用極性固定液，這時試樣中各組分主要按極性順序分離，極性小的先流出色譜柱，極性大的后流出色譜柱。(3)分離非極性和極性混合物時，一般選用極性固定液，這時非極性組分先出峰，極性組分(或易被極化的組分)后出峰。(4)對于能形成氫鍵的試樣、如醉、酚、胺和水等的分離。一般選擇極性

5、的或是氫鍵型的固定液，這時試樣中各組分按與固定液分子間形成氫鍵的能力大小先后流出，不易形成氫鍵的先流出，最易形成氫鍵的最后流出。(5)對于復雜的難分離的物質可以用兩種或兩種以上的混合固定液。通用檢測器有：1、熱導池檢測器，TCD 測一般化合物和永久性氣體2、氫火焰離子化檢測器,FID 測一般有機化合物專用檢測器有：3、電子俘獲檢測器，ECD 測帶強電負性原子的有機化合物4、火焰光度檢測器，FPD 測含硫、含磷的有機化合物特殊檢測器有：FTIR、MS、測化合物結構靈敏度S（響應值）一定濃度或一定質量的試樣進入檢測器后，產生響應信號R，以進樣量Q對檢測器的響應信號作圖，得到一直線。直線的斜率為檢測

6、器的靈敏度S。靈敏度是響應信號對進樣量的變化率：檢出限D（detection limit，敏感度）檢測器恰能產生和噪音相鑒別的信號時，在單位體積或時間需向檢測器進入的物質質量（單位為g）。通常認為恰能鑒別的響應信號至少應等于檢測器噪聲的3倍。D=3N/SN-檢測器噪聲（mV），S靈敏度D越小，儀器越敏感。線性范圍 指試樣量與信號之間保持線性關系的范圍，用最大進樣量與最小檢出量的比值來表示。保留指數 正庚烷 Xz=174. 0 s lg174.0=2.2405乙酸正丁酯 Xi=310.0 s lg310.0=2.4914正辛烷 Xz+1=373.4 s lg373.4=2.5722相對響應值s

7、S=1/f定量計算方法歸一化法：若樣品中所有的組分均能流出色譜柱且有較好的、可分辨的色譜峰時可用此法定量。歸一化法的優缺點：該法的主要優點是：簡便、準確；操作條件(如進樣量，流速等)變化時，對分析結果影響較小這種方法常用于常量分析，尤其適合于進樣量很少而其體積不易準確測量的液體樣品使用這種方法的條件是：經過色譜分離后、樣品中所有的組份都要能產生可測量的色譜峰內標法：若樣品中除待測的幾個色譜峰有良好分離，但其它所有的組分不能全部流出色譜柱或有不可分辨的色譜峰時可用此法定量。 具體做法是：準確稱取樣品，加入一定量某種純物質作為內標物，然后進行色譜分析根據被測物和內標物在色譜圖上相應的峰面積(或峰高

8、）)和相對校正因子求出某組分的含量 內標法的優點 內標法是通過測量內標物與欲測組份的峰面積的相對值來進行計算的，因而可以在定程度上消除操作條件等的變化所引起的誤差內標法的要求： 內標物必須是待測試樣中不存在的；內標峰應與試樣峰分開，并盡量接近欲分析的組份內標法的缺點： 在試樣中增加了一個內標物，常常會對分離造成一定的困難。氣相色譜法應用范圍：主要用于易揮發、熱穩定的有機化合物的分析。沸點小于500°C，相對分子量小于400的物質，原則上均可用氣相色譜法分析。 約占全部有機物的1520%局限性：難揮發和熱不穩定的物質氣相色譜法是不適用的。第三章 高效液相色譜分析（B=0）HPLC與GC

9、差別1分析對象的區別 GC：適于能氣化、熱穩定性好、且沸點較 低的樣品；但對高沸點、揮發性差、 熱穩定性差、離子型及高聚物的樣 品，尤其對大多數生化樣品不可檢測 占有機物的20% HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品（包括 有機介質溶液），不受樣品揮發性和 熱穩定性的限制，對分子量大、難 氣化、熱穩定性差的生化樣品及高分 子和離子型樣品均可檢測 用途廣泛，占有機物的80%2流動相的區別GC：流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用 力，只與固定相有相互作用。 HPLC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作用 力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起 正向作用。且流動相種類較多，選擇余地廣，改

10、 變流動相極性和pH值也對分離起到調控作用，當 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相 也可以增大分離選擇性。3操作條件差別GC：加溫操作HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬小）提高液相色譜柱柱效的措施提高柱內填料裝填的均勻性減小粒度5,10m選用低粘度的流動相-甲醇、乙腈適當提高柱溫以降低流動相粘度-室溫降低流動相流速減小柱外效應：柱外效應由連接管、檢測器流通池體積所引起，死體積應盡量小正相色譜：1固定相：硅膠、極性大的氰基或氨基鍵合相2流動相：極性小，烷烴等非極性的疏水性溶劑 底劑 + 有機極性調節劑 ü 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇3出柱順序：結構相近組分，極

11、性小的組分先 出柱極性大的組分后出柱4. 適用：分離中等極性和極性較強的化合物，如酚類、胺類、氨基酸類等反相色譜：1固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱，C18柱（ODS柱HPLC約80%問題）2流動相：極性大的甲醇-水或乙腈-水 流動相極性 > 固定相極性 底劑 + 有機調節劑（極性調節劑）ü 例：水/緩沖溶液 + 甲醇，乙腈，THF3出柱順序：極性大的組分先出柱 極性小的組分后出柱4適用：非極性和極性較弱的組分（HPLC80%問題）離子色譜系統：利用離子交換樹脂為固定相，電解質溶液為流動相，以電導檢測器等為檢測器，為消除流動相中電解質背景離子對電導檢測器的干擾，設置了抑制柱。

12、P82 高效液相色譜儀流程圖、主要構成部件檢測器的幾種類別：（1）紫外光度檢測器（2）熒光檢測器 有較高的靈敏度，靈敏度比紫外-可見光檢測器高101000倍，但有更專一的選擇性。靈敏度高。其靈敏度比紫外-可見檢測器的靈敏度高兩個數量級，最小檢測限可達10-12g/mL。特別適合痕量分析。良好的選擇性。如，檢測牛奶中維生素B2，紫外-可見光檢測（265nm下）時存基體干擾峰；熒光檢測（激發波長265nm，發射波長520nm），基體成分不干擾檢測。線性范圍較寬。約為103-104，比紫外吸收檢測器窄，但對大多數痕量分析已經足夠寬。不是通用型檢測器。（P88 優點）（3）示差折光檢測器（4）電導檢測

13、器（5）蒸發光散射檢測器第九章 紫外吸收光譜分析幾個概念：生色團：分子中含有非鍵或p鍵的電子體系，能吸收特征外來輻射時并引起n-p* 和p-p*躍遷，可產生此類躍遷或吸收的結構單元，稱為生色團。助色團：含有孤對電子，可使生色團吸收峰向長波方向移動并提高吸收強度的一些官能團，稱之為助色團。常見助色團助色順序為：-F<-CH3<-Br<-OH<-OCH3<-NH2<-NHCH3<-NH(CH3)2<-NHC6H5<-O-紅移或藍移：在分子中引入的一些基團或受到其它外界因素影響，吸收峰向長波方向（紅移）或短波方向移動（藍移）的現象。1）共軛體系的

14、存在-紅移 如CH2=CH2的p-p*躍遷，lmax=165200nm；而1,3-丁二烯，lmax=217nm2）取代基：紅移或藍移。 取代基為含孤對電子，如-NH2、-OH、-Cl，可使分子紅移；取代基為斥電子基，如-R，-OCOR，則使分子藍移。 苯環或烯烴上的H被各種取代基取代，多產生紅移。3）pH值：紅移或藍移 苯酚在酸性或中性水溶液中，有210.5nm及270nm兩個吸收帶；而在堿性溶液中，則分別紅移到235nm和 287nm.吸收帶 在四種電子躍遷類型中*躍遷和n*躍遷所產生的吸收帶波長處于真空紫外區。*躍遷和n*躍遷所產生的吸收帶除某些孤立雙鍵化合物外，一般都處于近紫外區，它們是

15、紫外吸收光譜所研究的主要吸收帶。由*躍遷和n*躍遷所產生的吸收帶可分為下述四種類型。(1)R 吸收帶 R吸收帶是含有氧、氮、硫等雜原子的發色基團，如羰基、硝基中未成鍵電子由n軌道向反鍵*軌道躍遷時所產生的。R 吸收帶的吸收波長比較長，但吸收強度很弱。由于R吸收帶的強度很弱，有時會被其它較強的吸收帶所掩蓋 例如乙醛分子中羰基n*躍遷所產生的R吸收帶的波長為290nm，摩爾吸光系數為 1.7 ×104L·mol-1·c m-1(2)K 吸收帶 K吸收帶是含共軛雙鍵分子。K 吸收帶的特點是波長大于200nm，吸收強度很強，摩爾吸光系數大于105 L·mol-1

16、·c m-1。芳環上若有發色取代基團如苯乙烯、苯甲酸等也會出現K吸收帶。如丁二烯、丙烯醛發生* 躍遷所產生的吸收帶。 (3)B吸收帶 B吸收帶是閉合環狀共軛雙鍵*躍遷所產生的，它是芳環化合物的主要特征吸收帶。B吸收帶波長較長，但吸收強度比較弱。例如苯的B吸收帶波長為256nm，摩爾吸光系數為2.15 ×102 L·mol-1·c m-1。 在非極性溶液劑中或呈氣體狀態時，B吸收帶會呈現精細結構，但某些芳族化合物的B吸收帶往往沒有精細結構。使用極性溶劑會使精細結構消失。 如果芳族化合物的紫外吸收光譜中同時出現K帶、B帶和R帶，則R帶波長最長，B帶次之，K帶

17、最短，但吸收強度的順序正好相反。(4)E 吸收帶E 吸收帶也是芳環化合物的特征吸收帶，它起源于苯環中三個烯雙鍵的*躍遷。E 吸收帶又可分為 E1 帶和 E2 帶，E1 帶波長低于200nm，E2帶波長略高于200nm，但吸收強度則是E1帶比E2帶更強，它們的摩爾吸光系數分別在104103 L·mol-1·c m-1范圍。當苯環與助色基團相連時，E吸收帶發生紅移，但一般不超過210nm。P278圖95P280規律紫外-可見光度計光源：光源有鎢絲燈及氘燈兩種。可見光區（3601000nm）使用鎢絲燈，紫外光區則使用氘燈。由于玻璃要吸收紫外線，因此盛溶液的吸收池用石英制成。第十章

18、 紅外吸收光譜分析 分子吸收輻射產生振轉躍遷必須滿足兩個條件：條件一：輻射光子的能量應與振動躍遷所需能量相等。 當一定頻率的紅外光照射分子時，如果分子中某個基團的振動頻率和外界紅外輻射的頻率一致，就滿足了第一個條件。條件二：輻射與物質之間必須有耦合作用 為滿足第二個條件，分子必須有偶極矩的改變。分子振動方程理論振動數（峰數）設分子的原子數為n， 對非線型分子,理論振動數=3n-6 如H2O分子，其振動數為3×3-6=3 對線型分子，理論振動數=3n-5 如CO2分子，其理論振動數為3×3-5=4X-H伸縮振動區：4000-2500cm-1 叁鍵及累積雙鍵區（25001900cm-1）雙鍵伸縮振動區（19001200cm-1）2）指紋區（可分為兩個區）P301 303