1、第一章概論 1.臨床檢驗儀器常用性能指標（可能考問答題）1靈敏度 2誤差 3噪聲 4最小檢測量5精確度6可靠 性7重復性 8分辨率9測量范圍和示值范圍 10線性范圍11 響應時間 12頻率影響范圍1靈敏度：檢驗儀器在穩態下輸出量變化與輸入量變化之比。2誤差：當對某物理量進行檢測時， 所測得的數值與真值之間的 差異。3噪音:檢測儀器在沒有加入被檢物品時，儀器輸出信號的波動 或變化范圍。4最小檢出量：檢驗儀器能確切的反應最小物質含量。5精確度：檢測值偏離真值的程度。6可靠性：儀器在規定時期內及在保持運行不超限的情況下執行 其功能的能力，反應儀器是否耐用的一項指標。第二章 離心機1 .離心技術：應用

2、離心沉降進行物質的分析和分離的技術2 .離心機的工作原理：利用離心轉子高速旋轉產生的強大離心 力，迫使液體中的微粒克服擴散，加快沉降速度，把樣品中具有 不同沉降系數和浮力密度的物質分離。顆粒的沉降速度取決于離心機的轉數、顆粒的質量、大小和密度。3 .離心力：由于物體旋轉而產生的力，物體作圓周運動所產生 的向心力的反作用力。4,相對離心力：通常顆粒在離心過程中的離心力是相對于顆粒 本身所受的重力而言，因此把這種離心力叫做相對離心力。5 .離心機的分類：按轉數分為：低速、高速、超高速。6 .離心機的最大容量：離心機一次可分離樣品的最大體積，mx n,一次可容納最多離心管x 一個離心管容納樣品最大體

3、積。7 .沉降系數：顆粒在單位離心力場作用下的沉降速度，其單位 為秒。8 .離心機的基本結構低速離心機的結構較簡單，由電動機，離心轉盤（轉頭）、調速器、定時器、離心套管與底座等主要部件構成。其最大轉速在10000r/min以內，相對離心力在 15000xg以內。高速（冷凍）離心機 最大轉速為2000025000r/min超速（冷凍）離心機 最大轉速可達5000080000r/min9 .差速離心法：差速離心法又稱分步離心法，根據分離物的沉 降速度不同，采用不同的離心速度和時間分步離心的方法。10 .差速離心法的優缺點：優點：操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開， 并可使用容量較大的角

4、式轉子；分離時間短、重復性高；樣品處 理量大。缺點：分辨率有限、分離效果差，沉淀系數在同一個數量級 內的各種粒子不容易分開，不能一次得到純顆粒；壁效應嚴重， 特別是當顆粒很大或濃度很高時，在離心管一側會出現沉淀，顆粒被擠壓，離心力過大、離心時間過長會使顆粒變形、聚集而失活。11 .密度梯度離心法：密度梯度離心法又稱區帶離心法，該方法主要用于沉降速度差別不大的微粒， 將樣品放在一定惰性梯度介 質中進行離心沉淀或沉降平衡， 在一定離心力下把顆粒分配到梯 度液中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。12 .密度梯度離心法的優缺點：優點：具有很好的分辨率分離、分離效果好，可一次獲得較純的顆粒；分離范

5、圍廣；缺點：分離時間長，需要制備梯度液，操作嚴格，不易掌握。 第三章顯微鏡1 .光學顯微鏡的工作原理：光學顯微鏡是利用光學原理，把人 眼所不能分辨的微小物體放大成像，供人們提取物質細微結構信息的光學儀器。光學顯微鏡由兩組會聚透鏡組成光學折射系統。把焦距較短，靠近觀察物、成實像的透鏡組稱為物鏡；焦距較長， 靠近眼睛、成虛象的透鏡組稱為目鏡。 被觀察的物體位于物鏡前 方，被物鏡作為第一級放大后成一倒立的實像，然后此實像再被目鏡作為第二級放大，得到最大放大效果的倒立的虛象， 位于人 眼的明視距離處。2 .光學顯微鏡的最小分辨率是 0.25um3 .光學顯微鏡的基本結構：1 .光學系統：物鏡、目鏡、聚

6、光鏡、反光鏡。2 .機械系統：聚光鏡升降、調焦系統、載物臺和物鏡轉換器 等運動夾持部件以及底座、鏡臂、鏡筒等支持部件）4 .光學顯微鏡放大倍數的計算5 .顯微鏡的一半操作規程：1打開電源開關，旋轉光強調節旋鈕 使光強適中，2旋轉粗調旋鈕把載物臺姜到最低處，打開夾片器，放好標本，輕輕松開夾片器自然夾住玻片， 旋轉載物臺下標本平 面移動控制旋鈕，將標本放置在恰當是位置，3旋轉物鏡轉換器把10倍物鏡置于標本上方，先從側面觀察，旋轉顯微鏡的粗調， 樣品盡可能接近物鏡，若有鎖死裝置需鎖死；4通過右目鏡觀察標本，慢慢旋轉粗調使載物臺下降.，粗調聚焦后再用微調作 精細調節，調節光瞳間距調節把手， 雙目可以觀

7、察到一個單一的 像，5旋轉左目鏡上的屈光度調節環，使樣品清晰可見，使雙眼 視力差得到補償，6旋轉聚光鏡上下移動鈕將聚光鏡轉移到最高 位置，然后取下目鏡鏡頭，直接往鏡筒內看并旋轉聚光鏡孔徑光 闌刻度盤使孔徑光闌調到大約為物鏡 NA的80%的位置便可獲得 高質量的像，要注意更換物鏡后都要重新調整孔徑光闌；7物質物鏡轉換器轉動，選用所需放大倍數的物鏡并配合使用對應的目 鏡；8觀察并記錄。第四章紫外一可見分光光度計1 .紫外-可見分光光度計工作原理：光照射到物質可發生折射、 反射和透射，一部分光會被吸收，其能量以熱釋放出來。利用測 量物質對某些波長光的吸收來了解物質特性。不同物質會吸收不 同波長的光。

8、改變入射光波長，并記錄物質對不同波長光的吸收 程度，得該物質吸收光譜，可根據物質吸收光譜分析物質結構、 含量和濃度。2 .光的吸收定律：即郎伯-比爾定律，是比色分析的基本原理。 表達了物質對單色光吸收程度與溶液濃度和液層厚度之間的函數關系。A=-lg I/I 0=lg |0/I=lg 1/T=kbc3 .郎伯-比爾定律適用條件：1入射光為單色光，2溶液濃度不能 過大。4 .紫外一可見分光光度計的基本結構：光源、單色器、吸收池、檢測器、信號顯示系統、光源：提供入射光的裝置；單色器：是將來自光源的復合光分解為單色光并分離出所需波段 光速的裝置，是分光光度計的關鍵部件；吸收池：又稱比色皿、比色杯、樣

9、品池或液槽，受用盛放被測溶液的器件；檢測器：把光信號轉換為電信號的裝置。信號顯示系統：是把放大的信號以適當的方式顯示或記錄下來的 裝置。5 .紫外一可見分光光度計的性能指標：1.波長準確度和波長重復 性；2.光度準確度3.光度線性范圍4.分辨率5.光譜帶寬6.雜散 光7.基線穩定度8.基線平直度6 .紫外一可見分光光度計的基本分析方法（1）定性分析（2）定量分析（3）純度鑒定：在紫外光區，核算的最大吸收峰是260nm，蛋白質的最大吸收峰是 280nm。 純RNA樣品的A260/A280的比值是2.0+0.1,純DNA樣品的 A260/A280的比值是1.8+0.1,無論是 RNA還是DNA ,

10、 A260/230的比值應大于 2.0小于2.4。第五章臨床血液常規檢驗儀器1 .血細胞分析儀（BCA）:又稱血細胞自動計數儀（ABCC）、 血液自動分析儀（AHA）等，是對一定體積全血內血細胞數量和 異質性進行自動分析的常規檢驗儀器。其主要功能是血細胞計 數、白細胞分類、血紅蛋白測定、先關參數計算等。2 .血細胞分析儀的細胞計數原理1 .電阻抗型血細胞分析儀的細胞計數原理：血細胞與等滲 的電解質溶液相比為不良導體，其電阻值比稀釋值大。當血細胞通過檢測器的微孔的孔徑感受區時，其內外電極的恒流電路上的電阻值瞬間增大，產生電壓脈沖信號。脈沖信號數等于通過的細 胞數，脈沖信號幅度大小與細胞體積成正比

11、。根據歐姆定律，在 恒電流電路上，電壓變化與電阻變化成正比，電阻值又同細胞體積成正比，血細胞體積越大，電壓越高，產生信號的脈沖幅度就 越大。各種大小不同的細胞產生的脈沖信號分別被送入儀器的檢 測通道，經計算機處理后，以體積直方圖顯示出特定細胞群中的 細胞體積和細胞分布情況。最后得出白細胞、紅細胞、血小板等 相關參數。2 .聯合檢測型血細胞分析儀的細胞計數原理：以流式技 術為基礎再聯合使用流式、激光、射頻、電導、電阻抗、細胞化 學染色等多項技術進行細胞分析，并綜合分析檢測數據，從而得出較為準確的“五分類”結果。具均使用了流式細胞計數，形成 流體動力聚焦的流式通道，使單細胞流在鞘液的包裹下通過流式

12、 通道，將重疊限制到最低濃度。3 .網織紅細胞計數分析基本原理：采用激光流式細胞分析 技術與細胞化學熒光染色技術聯合對網織紅進行分析，利用網織紅中殘存的嗜堿性物質一 RNA ,在活體狀態下與特殊熒光染 料（新亞甲藍等）結合，激光激發產生熒光，熒光強度與 RNA 含量成正比；用流式細胞技術檢測單個的網織紅的大小和細胞內 RNA含量及Hb含量。由計算機處理，得出網織紅技術及其他參 數。4 .血細胞分析儀測定 Hb的原理：除干式離心分層型、無 創型外，各種BCA對Hb測定都采用光電比色原理。血細胞懸 液中加入溶血劑后，RBC溶解釋放出Hb,后者與溶血劑中有關 成分形成Hb衍生物，進入Hb測試系統。在

13、特定波長（多為 530550nm）下進行光電比色，吸光度值與所含 Hb含量成正比。 與不同型號BCA配套的溶血劑不同，形成 Hb衍生物也不同， 吸收光譜也有差異，但最大吸收峰都接近540nm,因為國際血液 學標準化委員會（ICSH）推薦的氟化高鐵（HiCN）法的最大吸 收峰在540nm,儀器Hb的校正必須以HiCN值為標準。5,血液凝固分析儀的凝固法是通過檢測血漿在凝血激活劑 作用下一系列物理量（光、電、超聲、機械運動等）的變化，再 由計算機分析所的數據并將之換算成最終結果的方法。6,血液凝固分析儀檢測原理：血凝儀使用的主要檢測技術方 法有凝固法、底物顯色法、免疫學法，干化學法等。凝固法是血

14、栓/止血實驗中最基本、最常用的方法。半自動血凝儀以凝固法 檢測為主，全自動血凝儀還可使用底物顯色發和免疫學法等。7,凝固法：是通過檢測血漿在凝血激活劑作用下一系列物理 量（光、電、超聲、機械運動等）的變化，再由計算機分析所得 數據并將之換算成最終結果的方法，故也稱生物物理法。按測量原理可分為電流法、超聲分析法、光學法、磁珠。第六章臨床血液流變學檢驗儀器1 .血液粘度計的分離：工作原理分為毛細管粘度計和旋轉式 粘度計。2 .紅細胞沉降率：是指紅細胞在一定條件下沉降的速度，簡稱血沉。是應用于臨床診斷和觀察某些疾病活動情況的一項重要 參數。在血液流變學測定中常作為紅細胞聚集、 紅細胞表面電荷、 紅細

15、胞電泳的通用指標，其結果對許多疾病的活動、復發、發展 有監測作用。3 .自動血沉儀工作原理：所以自動血沉儀的原理和方法都是 建立在魏氏法的基礎上，利用光學阻擋原理進行測量； 也有采用 紅外線障礙法或激光光源掃描微量全血進行檢測4 .影響紅細胞沉降的因素：1.紅細胞的大小和形態；2.紅細胞 的變形性；3.紅細胞聚集性和相互作用；4紅細胞的壓積，5血 漿介質的上升流動；6.沉降管的傾斜度。5 .自動血沉儀基本結構：光源、沉降管、檢測系統、數據處 理系統。6 . 紅細胞沉降曲線：分為紅細胞不下沉的懸浮期、紅細胞緡 線狀形成的聚集期、紅細胞等快速下降的 快速沉降期、紅細胞開 始積壓的緩慢沉降期。7 .

16、自動血沉儀的質量控制： 第七章臨床尿液檢驗儀器1 .尿液分析：是臨床診斷泌尿系統疾病的重要措施之一， 通過對尿液的物理學檢查和化學檢查，可觀察尿液物理性狀和化 學成分的變化。在尿沉渣檢查中能夠看到的有形成分為紅細胞、 白細胞、上皮細胞、管型、巨噬細胞、腫瘤細胞、細菌、精子以 及由尿液中沉析出來的各種結晶（包括藥物結晶）等。這些檢查 資料對腎和尿路疾患的診斷、 鑒別診斷以及疾病的嚴重程度和預 后的判斷，都有極重要的意義。隨著現代醫學科學技術的發展， 特別是電子技術及計算機的應用，各種尿液分析儀、特別是尿沉 渣全自動分析儀的相繼問世， 為尿液化學成分檢查和尿沉渣的自 動化檢查提供了可靠的手段。2

17、. 尿液分析儀的檢測原理：（可能考大題）把試劑帶浸入 尿液以后，除了空白塊外，其余的試劑塊都因和尿液發生了化學 反應而產生了顏色的變化，試劑塊的顏色深淺與光的吸收和反射 程度有關，顏色越深，相應某種成分濃度越高，吸收光量值越大， 反射光量值越小：反之，反射率越大。因為顏色的深淺與光的反 射率成反比關系，而顏色的深淺又與尿液中各種成分的濃度成比 例關系，所以只有測得光的反射率及可以求得尿液中各種成分的 濃度。3 .尿液分析儀的試劑帶結構：單項試劑帶以濾紙為載體，將 各種試劑成分浸漬后干燥， 作為試劑層，再在其表面覆蓋一層纖 維素膜作為反射層。一般把這樣一條上面附有試劑塊的塑料條叫 做試劑帶。尿液

18、侵入試劑帶后，與試劑發生反應，可產生顏色變 化4 .試劑帶的反應原理：pH測定：pH指示劑原理尿蛋白 質測定：pH指示劑蛋白質誤差的遠離尿葡萄糖測定：一種是 基于葡萄糖氧化酶法原理，另一種是基于銅還原法的原理尿酮 體測定：采用亞硝基鐵氟化鈉反應測量酮體尿隱血測定：血紅素具有過氧化物酶樣作用，能催化過氧化氫釋放出新生態氧，使 色原氧化而顯色，其顏色深淺與血紅蛋白含量有關尿膽紅素測 定：采用重氮反應法原理尿膽原測定：采用Ehrlich醛反應原理或重氮反應原理尿亞硝酸鹽測定：尿亞硝酸鹽試驗.5 .試劑帶的應用：不同型號的尿液分析儀一般使用自己配套 的專用試劑帶。試劑塊要比測試項目多一個空白塊， 有些

19、儀器還 多一個位置參考塊。各試劑塊與尿液中被測定成分反應而呈現不同顏色。空白塊是為了消除尿液本身的顏色及試劑塊分布的狀態 不均等產生出測試誤差，提高測量準確度而設置的。 固定塊是為 了消除在測試過程中因每次測定試劑塊的位置不同而產生的測 試誤差設置的。每次測定前，檢測頭都會移到參考位置進行自檢， 必要時，自動調整發光二極管的亮度和靈敏度，以提高檢測的信噪比。（尼龍膜、絨制層、吸水層、塑料底層）。6 .尿液分析儀的質量控制：檢測前的質量控制、檢測中的質 量控制、檢測后的質量控制。7 .流式全自動尿有形成分分析儀工作原理：流式全自動尿有 形成分分析儀的測定是應用流式細胞術和電阻抗的原理進行的。 一

20、個尿液標本被稀釋并經染色液染色后，靠液壓作用通過鞘液流 動池。反應樣品從樣品噴嘴出口進入鞘液流動室時，被一種無粒子顆粒的鞘液包圍，使每個細胞以單個縱列的形成通過流動池的 中心（豎直）軸線，在這里每個尿液細胞被僦激光光束照射。每 個細胞有不同程度的熒光強度， 從染色尿液細胞發出的熒光， 主 要反映細胞的定量特性（如細胞膜、核膜、線粒體和核酸）、前 向散射光強度，它成比例地反映細胞的大小和電阻抗的大小（電阻抗電信號與細胞的體積成正比）。儀器將這種熒光、散射光等 光信號轉變成電信號，并對各種信號進行分析，最后得到每個尿 液標本產生出的直方圖和散射圖、 通過分析這些圖形，即可區分 每個細胞并得出有關細

21、胞的形態。8 .流式全自動尿有形成分分析儀儀器結構：流式全自動尿有形成分分析儀包括光學檢測系統、液流系統、電路系統和自動進 樣裝置。第八章 臨床自動生化分析儀器1 .自動生化分析儀器及特點：自動生化分析儀器是將生物化學 分析過程中的取樣、加試劑、去干擾、混合、保溫反應、自 動檢測、結果計算、數據處理和打印報告，以及實驗后的清 洗等步驟自動化的儀器。這類儀器一般都具有靈敏、準確、 快速、節約和標準化等優點，不僅工作效率高，而且減少了 主觀誤差，穩定了檢驗質量。2 .自動生化分析儀根據儀器反應裝置結構的不同，可分為連續 流動以，離心式、分立式和干化學式。3 .自動生化分析儀的基本結構：樣品處理系統

22、、檢測系統、計 算機系統。樣品處理系統：樣品裝載和輸送裝置，閉蓋穿刺、開蓋閉蓋 裝置，試劑倉，樣品和試劑取樣單元，攪拌系統。檢測系統：1.光源2.分光裝置 目前多用光柵。使用后分光 技術，可以在同一體系中測定多種成分。 如果比色池中有多種吸 收特征不同的組成物質，當復色光通過后，各物質分別對各自的 特征性光波產生吸收，之后再分成光譜對不同的波長進行測定， 可以在同一體系中同時得到多組分結果， 無需移動儀器的任何部 分，穩定性好，速度快，噪聲低，分析精確度和準確度高，故障 少。3.比色杯4.恒溫裝置5.清洗裝置6.信號轉換與傳輸裝。4 .自動生化分析儀的性能指標：1.檢測準確度 檢測準確度包含

23、正確度和精密度，由檢測儀器、試劑、校準品等共同組成的檢測 系統決定。 精密度是正確度的基礎，主要取決于儀器各部分諸 如加樣和加試劑系統，溫控系統、光路檢測系統等的加工精密度 和良好的工作狀態。2.自動化程度3.分析效率4.應用范圍5.其 他性能。5 .自動生化分析儀的相關參數：基本分析參數（1）終點分 析法：又稱平衡法，是通過測定反應開始至反應達到平衡時的產 物或底物濃度的總變化量來求出待測物濃度或活性的方法。可分為：一點法：指樣品和試劑混合后，反應一定時間到達終點時， 通過吸光度的檢測計算待測物濃度。該法簡便，但易受樣品、試 劑顏色、血清濁度及干擾物的影響。 單試劑型的生化檢測項目需 選用一

24、點法，如鈣、磷、鎂的測定兩點法：常應用于具有雙試 劑的檢測項目。加入樣品后分別讀取試劑I、II吸光度值，即樣品空白值和實際呈色反應值， 計算待測物濃度。該法可在一定程 度上消除樣品、試劑顏色、血清濁度及干擾物的影響。目前大多 數生化檢測項目都可使用雙試劑，如血清總蛋白、白蛋白、總膽 紅素、結合膽紅素、葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯等的測定。 固定時間法：是終點分析法的一種情況，可減少非特異性反應， 指樣品和試劑混合后分別讀取延滯期后和反應一定時間后的吸 光度，計算待測濃度。（2）連續監測法：又稱速率法，是通過 連續測定酶促反應過程中某一反應產物或底物的吸光度，根據吸 光度隨時間的變化求出待測物濃度

25、或活性的方法。（ 3）免疫投 射比濁法：用于測定產生抗原抗體特異性濁度的項目， 在光源的 光路方向測量投射強度來測定物質濃度，常采用終點法。6 .檢測波長 可選擇單波長或雙波長，自動生化分析儀常用雙波長或多波長7 ,反應溫度 通常設有25C、30 C、37 c等溫度。一般選用37 C8 .試劑選擇 可選擇單試劑或雙試劑（2）雙試劑法：在反應過程中試劑分開配制和加入反應系統，可消除干擾和非特異性反應，穩定試劑，使檢測結果更準確。包括雙試劑單波長一點 法雙試劑二點法雙試劑雙波長法。第九章臨床電化學分析儀器1.電化學分析法就是利用這些性質， 通過點擊變換器，將被測物 質的濃度轉變為電學參數而進行測量

26、的方法2.血氣分析儀PCO2電極：是一個氣敏電極，其前端有一 層半透膜，只允許CO盼子通過，其內部有一玻璃電極和參比電 極。PO電極：是一種Clark電極，屬于氣敏氧電極，也是極譜電 極。第十章臨床微生物檢測儀器1 .目前微生物鑒定的自動化系統大致分為 2類：一類是自動血培養檢測和分析系統，另一類是自動微生物鑒定及藥敏分析系統。2 .自動血培養系統分為四類：1 BioArgos系統、2 Bact/Aler t 系統、 3、Bactec 9000 系歹U、4、Vital 系統3 .微生物自動鑒定原理；采用微生物數碼鑒定原理，即通過數學的編碼技術將細菌的生化反應模式轉換成數學模式，給每種細菌的反應

27、模式賦予一組數碼，建立數據庫。然后將待檢菌有關生化試驗結果轉換成生物數碼，與編碼數據庫進行對 比，得到細菌名稱。4 .微生物自動化抗菌藥物敏感試驗原理；實質是微型化的肉湯稀釋試驗。將抗菌藥物微量稀釋在條孔或條板中，加入菌懸液孵育后放入儀器或在儀器中直接孵育，儀器每隔一定的時 間自動測定細菌生長的濁度，或測定培養基中熒光指示劑的 強度，或熒光原性物質是水解，觀察細菌的生長情況。得出 待檢菌在各藥物濃度的生長斜率，經回歸分析得到最低抑菌濃度MIC值，并根據CLDI標準得到相應敏感5 .藥敏測試板：藥敏測試板分為常規測試板和快速熒光測試板。常規測試板原理為比濁法，如 Vitek系統，在含有抗菌藥物

28、的培養基中，濁度的增加提示細菌生長，根據判斷標準解釋敏感 或耐藥；快速熒光測試板原理為熒光法，如 Sensititre 系統， 在每一反應孔內參與熒光底物， 若細菌生長，表面特異酶系統水 解熒光底物，激發熒光，反之沒有熒光。以最低藥敏濃度仍無熒光產生的濃度為最低抑菌濃度（MIC）第十一章臨床免疫檢驗儀器酶免疫分析技術EIA分類：可分為非均相（或異相）酶免疫測定和均相酶免疫測定兩種。均相酶免疫分析法：以激素、藥物等小分子抗原或半抗原為 主，測定過程中無需分離結合的和游離的酶標記物，實驗在液相中進行，可直接用自動生化分析儀進行測定。非均相酶免疫分析法：是在抗原抗體反應達平衡后，將游離 的與抗原或抗

29、體結合的酶標記物加以分離，再通過底物顯色進行測定，酶標儀與普通光電比色計的不同之處在于，酶標儀比色液的 容器不是比色皿，而是塑料微孔板；以垂直光束通過微孔板中的 待測液。現在大部分的酶標儀還加上了判讀系統和軟件操作分析 系統等，可進行資料錄入、結果計算、儲存信息和質控管理等操 作分析，在各類實驗室已廣為應用。酶免疫分析儀性能評價：濾光片波長精度檢查及其峰值測定、 靈敏度和準確度、通道差與孔間差檢測、零點漂移、精密度評價、 線性測定、雙波長評估。全自動化學發光免疫分析方法：固相抗原競爭法，雙抗體夾 心法，雙抗原夾心法：時間分辨熒光免疫檢測原理：用鐲系三價稀土離子及其螯合 物作為示蹤物標記抗體、抗

30、原、核酸探針等物質。當免疫反應發生后，根據稀土離子螯合物的熒光光譜的特點，用時間分辨熒光分析儀延緩測量時間，排除標本中非特異性熒光的干擾， 所得信 號完全是稀土元素螯合物發射的特異熒光，測定免疫反應最后產 物的特異熒光信號。根據熒光強度判斷反應體系中分析的濃度， 達到定量分析的目的。時間分辨熒光免疫分析儀特點：特異性強、敏感度高、標記物穩 定、熒光信號強。第十二章臨床即時檢驗儀器非重點章節1. 即時檢驗POCT也稱床邊檢驗，指在患者身邊，由非 檢驗專業人員利用便攜式儀器快速分析患者標本并準確獲取結 果的分析技術，或者說測試不在主實驗室而在一個可移動的系統 內進行。2.即時檢驗的特點:1儀器小型

31、化，便于攜帶；2操作簡單 化，一般3-4個步驟即可完成實驗；3報告及時化，縮短檢驗周 期；4經權威機構的質量認證；5儀器和配套試劑中應配有質控 品，可檢測儀器和試劑的工作狀態；6儀器檢驗項目具備臨床價值和社會意義；7儀器的檢測費用合理；8儀器試劑的應用不應 對患者和工作人員的健康或對環境造成不良影響。3快速血糖測試儀的檢驗原理：目前快速檢測血糖儀多采用葡萄糖脫氫酶法，根據酶電極的響應電流與被測血樣中的葡萄糖 濃度呈現線性關系來計算血標本中的葡萄糖濃度值。4即時檢驗儀器分類：1.按照用途分類 快速血糖檢測儀，電解質分析儀，血液分析儀，血氣分析儀，抗凝測定儀，心肌損傷 標志物檢測儀，藥物應用檢測儀

32、，酶聯免疫檢測儀，放射免疫分 析儀，甲狀腺激素檢測儀等。2.根據體積大小和重量分類 便攜 型，桌面型，手提式，手提式一次性使用型等。3.根據所用的一次性裝置分類 卡片式裝置，單一或多墊試劑條，微制造裝置， 生物傳感器裝置，其他多孔材料等多種裝置。5.及時檢驗POCT僉驗儀器的構成：分析系統和信號檢測系統 兩大類第十三章PCR核酸擴增儀1. PCR 技術的基本原理類似于 DNA勺天然復制過程，其特 異性依賴于靶序列兩端互補的寡核甘酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成2. 原位PCFa:即在細胞內進行PCRT增，而組織細胞的形態不被破壞，它是原位雜交與PCRK術的結合。以往手工技術

33、 操作復雜，擴增效果及實驗結果重復性均不理想。原位PCR以其創新的設計，比較好地解決了這些問題。原位PCF與普通PCFa的區別在于，具樣品基座上有若干平行的鋁槽，每條鋁槽 內可垂直放置一張載玻片， 每張載玻片面均與鋁槽緊密接觸， 溫 度傳導極佳，控溫很精確。目前也有在普通PCF上增加原位PCRg塊的，就可以進行原位 PCFT增。不少廠家的PCF都可 以提供原位適配器，配有支持原位PCR莫塊的PCR可以一機兩 用，比較經濟。2. 實時熒光定量PCR亥酸擴增儀名構：定量 PCFa通常由兩 部分組成：PC解統和熒光檢測系統。熒光檢測系統包括激發光 源和檢測器。3. PCR擴增儀的性能指標 （一） 溫

34、度控制：是決定PCRS 應能否成功的關鍵，主要包括溫度的準確性， 均一性以及升降溫 度，對PCFT增儀而言溫度控制意味著質量。（二）熒光檢測（1） Ct值重復性錯誤（2）熒光檢測范圍（3）儀器的檢測通道數量（三） 樣品基座容量和樣品數4. PCR核酸擴增儀常見的故障的排除熒光強度減弱或不穩定：原因有濾光片發霉或有水氣等， 需工程師檢修；或光源損耗， 需更換光源；或需調節檢測元件靈敏度，也需工程師調試。5 .各孔獨立控溫的熒光定量 PCR各孔獨立控溫的定量 PCFa設計非常獨到，不同樣品槽分別擁有獨立的智能升降溫模 塊，各孔獨立控溫，可以在同一臺定量PC限上分別進行不同條 件的定量PC即應，隨時

35、利用空置的樣品槽開始其他定量反應， 使用效率非常高。升降溫速度高達10C/s ,控溫精度高。每個模塊獨立控制的激發光源和檢測器直接與反應管壁接觸，保證熒光激發和檢測不受外界干擾。該類儀器整合多通道光學檢測系 統，能有效分辨 FAM/SYBRGreeni Tet/Cy3、Texasred 和 cy5 等 多種熒光染料，可對同一樣品進行多靶點分析， 同時檢測四種熒 光信號。可使用Taqman探針，分子信標，Amplifluor引物等多 種檢測方法，定量線性范圍可達9個數量級。具軟件允許一臺儀 器同時操作多個樣品模塊，既滿足高速批量要求，又能靈活運用, 還可實現任意梯度反應。 但是上樣不如傳統方法方

36、便， 而且需要 獨特的扁平反應管，使用成本較高。適合多指標快速檢測，但目 前在國內應用尚少。6 .熒光檢測：Ct值重復性誤差：Ct值是每個反應管內的熒 光信號到達設定的域值時所經歷的循環數，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系，起始拷貝數越多，Ct值越小，一般要求CVC 2.5%。7 .實時熒光定量 PC做術原理：熒光實時定量 PCR在PCR 反應體系中加入特異性的熒光染料或探針，熒光信號的變化真實的反映了體系中模板的增加， 通過檢測熒光信號，可以實時監測 整個PCRS應過程，最好通過標準曲線對未知模板進行定量分 析。第十四章 全自動DNAM序儀和蛋白質自動測序儀1 .目前D

37、NAM序的工作原理主要利用 Sanger雙脫氧鏈末端終止 法或Maxam-Gilbert 化學降解法2 .目前使用的全自動DNAM序儀都是通過凝膠電泳技術進行 DN叫段的分離。第十五章流式細胞儀1.流式細胞儀的分析原理：將特異熒光染料染色的單細胞 懸液放入樣品管，在氣體壓力作用下，懸浮在樣品管中的單細胞 經管道進入FCM勺流動室，沿流動室的軸心向下流動形成樣品流。流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞樣品流的鞘液流。鞘液流和樣品流在噴嘴附近組成一個圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交， 相交點稱為測量區。 染色的細胞受激光照射后發出熒光，同時產生光散射。這些信號分別被光

38、電倍增管和光電二極管接收，并轉換為電子信號，再經過模數轉換器輸入計算機。計算機通過相應的軟件儲存、計算、 分析這些數字化信息，就可得到細胞的大小、核酸含量、酶和抗 原的性質等信息。如果在壓電晶體上加上頻率為30kHz的信號，就會使其產生同頻率的機械振動， 流動室也隨之振動，于是通過 測量區的液柱斷裂成一連串均勻的液滴。由于各類細胞的特性信息在細胞形成液滴以前在測量區已被測定，并儲存在計算機中， 因此，當要分選某類細胞時，FC喇將在這類細胞形成液滴時給 含有這類細胞的液滴充以特定的電荷，而不符合分選條件的含細胞液滴和不含細胞的空白液滴不被充電，即不帶電荷。帶有電荷的液滴向下落入偏轉板間的靜電場時

39、，依所帶電荷的不同分別向左偏轉或向右偏轉，落入指定的收集器內。不帶電的液滴不發生 偏轉，垂直落入廢液槽中被排出，從而達到細胞分類收集的目的， 分選出的細胞可以進一步分析、培養和研究。2 .前向角散射：前向角散射與被測細胞的大小有關，確切的說與細胞直徑的平方密切相關。側向角散色：對細胞膜、細胞質、 核膜的折射率更為敏感，可提供細胞內精細結構和顆粒性質的信 息。兩種信號均來自于激光光速，其波長與激光相同。3 .熒光信號的寬度和面積：熒光信號的面積是對熒光光通量進 行積分測量，熒光信號的寬度常用于區分雙聯體細胞。第十六章臨床電泳分析儀器1 .電泳（EP）:指帶電荷的溶質或粒子在電場中向著與其本身 所

40、帶電荷相反的電極移動的現象。2 .常用的電泳分析方法：醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳、毛細管電泳。3 .電泳的基本原理：物質分子在正常情況下一般不帶電，即 所帶正負電荷量相等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作 用或化學反應條件下，某些物質分子會成為帶電的離子，不同 的物質，由于其帶電性質、顆粒性狀和大小不同，他們在一定 的電場中移動的方向和速度也就不同，因此就可以將他們分離。4 .影響電泳的外界因素：電場強度、溶液的 pH值、溶液的離 子強度、電滲作用、粒子的遷移率、吸附作用。5 .免疫電泳技術有兩大優點，一是加快了沉淀反應的速度；二 是將某些蛋白組分根據其帶電荷的不同

41、而分開，再與抗體起反 應，從而使此方法更為微量化、多樣化。6 . 免疫電泳可用于的研究：抗原和抗體的相對應性，測定樣品的各成分及他們的電泳遷移率， 根據蛋白質的電泳遷移率， 免 疫特性及其他特性，可以確定該復合物中某些蛋白質， 鑒定抗原 或抗體的程度。7 .毛細管的內徑是20-100um。第十八章色譜分析儀器1 .色譜法的基本原理：色譜分離中的兩相是指系統具有一個有大比表面積的固定相（可以是固體或以某種方式固定了的液 體）和一個能攜帶待分離混合物流過固定相的所謂流動相（可以是氣體或液體）。2 .色譜儀的分類：目前比較成熟的色譜儀主要是氣相色譜儀和高效液相色譜儀兩大類3 .氣相色譜柱和溫度控制：

42、 氣相色譜柱：1固定相2柱管形狀 和尺寸。溫度控制：在氣相色譜儀的使用過程中，必須使用氣態樣品（如果是液態樣品需要經過氣化處理），溫度對樣 品在色譜柱上的分離過程、對許多檢測器（如熱導、電子捕獲、示差折光等）的檢測結果等都有很大影響。因此，必須 對色譜柱箱、檢測器和氣化室等實行溫度控制。其關鍵在于 溫度條件的穩定性，它將直接影響色譜柱的分離效率，保留參數的重復性以及檢測器的性能。溫度對于固定相也非常重要。操作時一定要知道所用固定相溫度的極限，把全部操作保持在臨界溫度以下 1015°進行。這將有助于延長柱子 的使用壽命和避免檢測器與其他裝置受固定相“流失”所造 成的污染。第二H一章生物

43、安全柜1.生物安全柜：是防止操作者和環境暴露于試驗過程中產生的生物氣溶膠的負面過濾排風柜，是防止實驗室獲得性感染的 主要設備。2 .生物安全柜的工作原理：主要是將柜內空氣向外抽收， 使柜內保持負壓狀態，安全柜內的氣體不能外泄從而保護工作人 員。外界空氣經高效空氣過濾器過濾后進入安全柜內，以避免處理樣品被污染；同時，柜內的空氣也需經過高效空氣過濾器過濾 后再排放到大氣中以保護環境。3 .生物安全柜的分類：目前世界上生物安全柜領域執行的標準主要有歐盟標準化委員會于 2000年5月頒布的歐洲標準 EN12469 2000和美國國家標準學會于 2002年認可的美國國家 衛生基金會的第49號標準(NSF49等。我國的中華人民共和 國醫藥行業標準：生物安全柜(YY0569-2005)于2006年正式實施，該標準積極吸收采納 EN12469 2000和NSF4跑兩個生物 安全柜標準中的重要部分，并對其中部分內容做了修改、提高。YY0569-2005標準的實施結束了長期以來我國在生物安全柜方面 缺乏統一標準的局面。4 .根據氣流及隔離屏障設計結構，將生物安全柜分為I ,II ,田級。I級生物安全柜是指用于保護操作人員與環境安全，而不保 護樣品安全的通風安全柜。n級生物安全柜 是指用于保護操作人員， 環境，以及樣品安全的通風安