1、實(shí)驗(yàn)標(biāo)題實(shí)驗(yàn)標(biāo)題實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膎掌握谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的掌握谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的n 原理和方法原理和方法l血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸l血清加基液保溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即血清加基液保溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即反響出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。反響出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。l丙酮酸與丙酮酸與2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色，在堿二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色，在堿性溶液中成醌型顯棕紅色。性溶液中成醌型顯棕紅色。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原

2、理 本實(shí)驗(yàn)是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反本實(shí)驗(yàn)是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反響丙酮酸的量，即反響了谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。響丙酮酸的量，即反響了谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。 本法以本法以lml血清與基質(zhì)液在血清與基質(zhì)液在37，保溫，保溫30分鐘生分鐘生成成2.5g丙酮酸為谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性丙酮酸為谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性1單位單位 求酶活性單位的方法：求酶活性單位的方法： 1、規(guī)范品對(duì)照法：檢品與規(guī)范丙酮酸液同樣處、規(guī)范品對(duì)照法：檢品與規(guī)范丙酮酸液同樣處置呈色，進(jìn)展比色，計(jì)算出酶活性單位。置呈色，進(jìn)展比色，計(jì)算出酶活性單位。 2、規(guī)范曲線法：取含待測(cè)物的一系列規(guī)范溶、規(guī)范曲線法：取含待測(cè)物的一系列規(guī)范溶液，作規(guī)

3、范曲線，由規(guī)范曲線查得活性單位。液，作規(guī)范曲線，由規(guī)范曲線查得活性單位。一、規(guī)范品對(duì)照法一、規(guī)范品對(duì)照法 取試管取試管4支，標(biāo)號(hào)，按下表加試劑：支，標(biāo)號(hào)，按下表加試劑：實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作56放置放置5分鐘。分鐘。 加加0.4N NaOH液液5.0ml漸漸參與約漸漸參與約1分鐘，邊加邊混勻。分鐘，邊加邊混勻。室溫放置室溫放置 30分鐘，分鐘，測(cè)測(cè)OD值，波長值，波長 520nm，用蒸餾水調(diào)零點(diǎn)。，用蒸餾水調(diào)零點(diǎn)。 計(jì) 算ODA-ODBODs-ODs= =X 待測(cè)樣品丙酮酸含量待測(cè)樣品丙酮酸含量50ug/ml 0.1 ml X= =ODA-ODBODs-ODs5 5SGPT單位單位=ODA-ODBO

4、Ds-ODs5 50.10.12.52.5=ODA-ODBODs-ODs2020二、規(guī)范曲線法二、規(guī)范曲線法 配制一系列不同濃度的規(guī)范丙酮酸液，并且各加配制一系列不同濃度的規(guī)范丙酮酸液，并且各加以適量的基質(zhì)液，以適量的基質(zhì)液，作成規(guī)范曲線。詳細(xì)做法如下表。作成規(guī)范曲線。詳細(xì)做法如下表。各管混勻，放各管混勻，放37水浴水浴5分鐘分鐘 加加0.4N NaOH液液5.0ml 漸漸參與約漸漸參與約1分鐘，邊加邊混勻分鐘，邊加邊混勻然后各加呈色試劑然后各加呈色試劑0.5ml，混勻，混勻56放置放置5分鐘。分鐘。室溫放置室溫放置 30分鐘分鐘測(cè)定測(cè)定OD值值, 波長波長 520nm，用蒸餾水調(diào)零點(diǎn)。，用蒸

5、餾水調(diào)零點(diǎn)。一規(guī)范對(duì)照法一規(guī)范對(duì)照法.原始數(shù)據(jù)記錄2、公式計(jì)算酶活性單位要求帶入數(shù)據(jù)，寫出結(jié)果、公式計(jì)算酶活性單位要求帶入數(shù)據(jù)，寫出結(jié)果二、規(guī)范曲線法二、規(guī)范曲線法.原始數(shù)據(jù)記錄原始數(shù)據(jù)記錄2、繪制規(guī)范曲線，要求規(guī)范作圖、繪制規(guī)范曲線，要求規(guī)范作圖3、經(jīng)過方法一的、經(jīng)過方法一的ODA-ODB，在規(guī)范曲線中，查得酶活性單位，在規(guī)范曲線中，查得酶活性單位實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果本卷須知本卷須知n操作中加操作中加 0.4N NaOH0.4N NaOH液時(shí)，需以較慢速度液時(shí)，需以較慢速度參與，并且邊加邊搖勻加快時(shí)那么參與，并且邊加邊搖勻加快時(shí)那么a a一戊酮一戊酮二酸引起的發(fā)色加強(qiáng)。二酸引起的發(fā)色加強(qiáng)。n本實(shí)驗(yàn)中各試劑加量都需求準(zhǔn)確，并且要本實(shí)驗(yàn)中各試劑加量都需求準(zhǔn)確，并且要留意控制條件，保溫時(shí)間要嚴(yán)厲留意控制條件，保溫時(shí)間要嚴(yán)厲n本法測(cè)定本法測(cè)定S