1、實驗目的實驗目的實驗原理實驗原理實驗步驟實驗步驟注意事項注意事項儀器試劑儀器試劑 問題討論問題討論目的要求目的要求: 1、學習比色法測磷的方法和原理、學習比色法測磷的方法和原理;2、掌握、掌握722型分光光度計的使用方法型分光光度計的使用方法;重點重點: 比色法測磷的原理和方法。比色法測磷的原理和方法。難點難點: 顯色條件的控制。顯色條件的控制。實驗原理實驗原理 微量磷的測定，一般采用鉬藍法。此法是在含微量磷的測定，一般采用鉬藍法。此法是在含PO43-的酸性溶液中加入的酸性溶液中加入(NH4)2MnO4試劑，可試劑，可生成黃色的磷鉬酸，其反應式如下：生成黃色的磷鉬酸，其反應式如下：PO43-

2、+ 12 MoO42- + 27H+ = H2P(Mo2O7)6 + 10H2O若以此直接比色或分光光度法測定，靈敏度較低，若以此直接比色或分光光度法測定，靈敏度較低，適用于含磷量較高的試樣。適用于含磷量較高的試樣。 如在該溶液中加入適量還原劑（如抗壞血酸、如在該溶液中加入適量還原劑（如抗壞血酸、SnCl2 等等), 磷鉬酸中部分正六價鉬被還原生成低價的磷鉬酸中部分正六價鉬被還原生成低價的藍色的藍色的磷鉬藍磷鉬藍，從而提高測定的靈敏度，還可消除，從而提高測定的靈敏度，還可消除Fe3+等離子的干擾。經上述顯色后可在等離子的干擾。經上述顯色后可在690nm波長下測波長下測定其吸光度。含磷的質量濃度

3、在定其吸光度。含磷的質量濃度在1mg.L-1, 以下符合朗伯以下符合朗伯比耳定律：比耳定律： 儀器試劑儀器試劑儀器：儀器：722型分光光度計；比色管型分光光度計；比色管(50ml)；吸量管吸量管(5ml,10ml)；藥品藥品(NH4)2MnO4-H2SO4混合液混合液， SnCl2甘油溶液甘油溶液 ，磷標準溶液磷標準溶液 (10mg.L-1)1. 工作曲線的繪制工作曲線的繪制按表中用量用吸量管分別吸取按表中用量用吸量管分別吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml磷標準溶液依次放入個已編號的磷標準溶液依次放入個已編號的25ml比色管中，用蒸餾水稀釋至比色管中，用蒸餾水稀

4、釋至2/3刻度左右。然后刻度左右。然后各加入各加入1.0ml鉬酸銨試劑鉬酸銨試劑,搖勻搖勻 ,再各加入再各加入2滴滴2.5% SnCl2甘油液，用蒸餾水稀釋至刻度，充分搖勻，靜甘油液，用蒸餾水稀釋至刻度，充分搖勻，靜置置1012min。選擇波長。選擇波長690nm，用，用1.0cm吸收池。以空吸收池。以空白溶液作參比，測出各標準溶液的吸光度白溶液作參比，測出各標準溶液的吸光度,以吸光度以吸光度為縱坐標，磷的質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。為縱坐標，磷的質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。實驗步驟實驗步驟取取2.50ml試液于試液于25ml容量瓶中，與標容量瓶中，與標準溶液相同條件下顯色，并測定其吸

5、準溶液相同條件下顯色，并測定其吸光度。從工作曲線上查出相應的磷的光度。從工作曲線上查出相應的磷的含量，并計算原試液的質量濃度（單含量，并計算原試液的質量濃度（單位為位為mg.L-1)2. 未知液中磷含量的測定未知液中磷含量的測定3. 數據處理及結果討論數據處理及結果討論標準曲線上查得磷濃度標準曲線上查得磷濃度c(P) =_mg.L-1原試液原試液 c(P) =_ mg.L-1繪制標準曲線繪制標準曲線 ：（1）蒸餾水稀釋后應充分搖動。）蒸餾水稀釋后應充分搖動。（2）由于該實驗顯色不穩定，溶液配好后）由于該實驗顯色不穩定，溶液配好后 半小時內必須測定。半小時內必須測定。（3）作圖時，盡量使直線與）作圖時，盡量使直線與X軸成軸成45o。注意事項注意事項1. 空白溶液中為何要加入同標準溶液及未知溶空白溶液中為何要加入同標準溶液及未知溶液同樣量的液同樣量的(NH4)2MnO4-H2SO4混合液和混合液和SnCl2甘油溶液？甘油溶液？問題與思考問題與思考 答：試劑空白。消除由答：試劑空白。消除由(NH4)2MnO4-H2SO4混合液和混合液和SnCl2甘油溶液對光的吸收而產甘油溶液對光的吸收而產生的誤差。生的誤差。2. 本實驗使用的本實驗使用的(NH4)2MnO4顯色劑的顯色劑的用量是否要準確加入？過多過少對測用量是否要準確加