1、雙歧桿菌在短肽腸內營養液中的存活力【摘要】目的：研究雙岐桿菌在短肽腸內營養液中的存活力. 方式：將50g/L兩歧雙歧桿菌菌懸液加入120g/L短肽營養液中，37 C 厭氧培育箱中培育，別離在0,4,8,12,14,16,20,24h時刻點取樣進行活菌數、A55R酸度和pH測定.結果：在短肽腸內營養液中接種兩歧 雙歧桿菌后，活菌數在培育016h生長速度較快，16h達最頂峰，以 后下降.A550隨著時刻的延長而增加.酸度也隨著培育時刻的延長而 增加，在培育014h之間增加較快，14h以后增加緩慢.pH值隨培育 時刻的延長而下降，在培育012h之間下降較快，12h以后下降緩慢. 結論：雙歧桿菌能在1

2、20g/L的短肽腸內營養液中較好地存活，且在 1214h期間應停止發酵.【關鍵詞】二裂菌屬腸道營養短肽存活力0引言臨床上有許多危重患者，在應激狀態下可顯現一系列代謝改變， 這種代謝紊亂貫穿于危重病的始終，可引發腸黏膜損害和營養素、維 生素B1二、脂溶性維生素的吸收障礙，致使患者顯現一系列營養問題 1,腸內營養支持可激活腸道神經內分泌系統，增進胃腸黏膜生長，維持腸道及機體免疫系統正常，保護腸黏膜屏障功能，改善機體的營 養不良2.但是，有部份患者因抗生素、激素和化療藥物的應用致 使菌群失調，在腸內營養支持的進程中，顯現腹瀉，阻礙了營養醫治 成效3.雙歧桿菌是腸道有利菌的主體，是腸道生物屏障的重要組

3、 成部份，可糾正微生態失衡，防治腸源性感染4.咱們觀看雙歧桿 菌在短肽腸內營養液中存活情形，為研究益生菌腸內營養制劑提供科 學依據.1材料和方式材料兩歧雙歧桿菌和雙歧桿菌培育基從甘肅省科學院生物所購得 牛奶培育基：將超市購買來的完達山脫脂奶粉配制成120g/L的濃度,分裝于試管中，每支10mL塞上硅膠塞，置于高壓蒸汽滅菌器中，于 121c下滅菌10min,切斷電源，緩慢排氣，冷卻后置于冰箱冷藏柜中 備用.短肽型腸內營養劑（粉劑）百普素購自荷蘭紐迪希亞，要緊成份為水解乳清蛋白、麥芽糖糊精、植物油、礦物質、維生素、微量元素，為淡黃色細粉，略有芳香氣，味微苦澀.在無菌操作條件下配制成120g/L的濃

4、度，分裝于試管中，每只10mL塞上硅膠塞.現用現配， 為幸免營養素破壞，配制好的營養液不能高壓蒸汽消毒，采納過濾除 菌法.儀器：YQ-II厭氧培育箱，凈化工作臺，2D 2A型自動電位 滴定儀，6230M酸度計，725s可見分光光度計，立式電熱壓力蒸汽滅 菌器，電熱恒溫水浴箱，電子天平，Olympus顯微鏡，電熱恒溫干燥箱.方式為保證菌種的活力，每一個月活化1次.方式是在無菌條件下，按1 ： 9的比例將鏡檢無雜菌的菌懸液加入雙歧桿菌培育基中， 37c厭氧培育48h.按50g/L的接種量將活化后的菌懸液加入 120g/L 百普素的營養液中，37c厭氧培育24h.對上述雙歧桿菌營養液進行 色、味、凝

5、固性和酸甜比例等感官評定.在無菌操作條件下，將菌懸液 加入牛奶培育基中，37C C厭氧培育的雙歧桿菌營養液，按0,4,8,12,14,16,20,24h時刻點取樣進行活菌數、A550值、酸度和pH測定.在培育進程中按時取樣于無菌生理鹽水的試管中，進行10倍梯度稀釋，選擇適當的稀釋度，吸取到瓊脂培育基平板中，涂布均勻， 置于37c厭氧培育48h,進行菌落計數，并革蘭染色觀看菌落特點和 細菌形態.在無菌操作條件下，按時取樣，適當稀釋，采納比濁法測定 A550值，所測A550值乘以稀釋倍數即為實際 A550值.在無菌條件下 掏出營養液10mL于50mL小燒杯中，加入蒸儲水20mL混勻，用校正 過的酸

6、度計進行測定.2結果百普素溶液在加入雙歧桿菌后仍呈淡黃色，氣味芳香，在原 有苦澀味的基礎上，略有酸味，不凝固.菌落為圓形，半透明，光亮， 突起，全緣，質地較軟，針尖般大小.在鏡下可見革蘭氏染色陽性的多 形態桿菌，呈Y, V字形，變曲狀、刮勺狀，其典型的形態是分叉的桿 菌，未見其他雜菌（圖1）.接種在百普素中的菌懸液凝乳時刻為 272min. 雙歧桿菌在短肽營養液中活菌數在培育016h之間呈上升趨勢，且016h生長速度較快，16h活菌含量達到最頂峰.A550隨培育時刻的 延長而增加，在培育016h之間，A550增加較快，16h以后增加緩慢 （圖2）.酸度隨培育時刻的延長而增加， 在培育020h呈

7、上升趨勢，20h達頂峰，20h后開始緩慢下降.pH值隨培育時刻的延長而下降，在 培育012h之間，pH值下降較快，12h以后下降緩慢（圖3） . 3討 論在短肽型腸內營養制劑百普素營養液中接種兩歧雙歧桿菌后，感官性狀未發生明顯轉變，雙歧桿菌的形態和菌落形成都比較正常，沒 有使百普素凝固.凝乳時刻與制酸奶的凝乳時刻大體相同，說明雙歧桿 菌在百普素營養液中能夠存活.百普素中含有人體需要的各類營養物 質，尤其是含有水解乳清蛋白、維生素 B1, B2, B6, C,尼克酸，泛 酸和葉酸和鹽類，雙歧桿菌之因此能在其中生長，可能與此有關.益生 菌制品在飲用之前，其益生菌含量必需達到 Ixi09cfu/L以

8、上才能達 到保健功效，而新鮮的益生菌制品活菌數要求不得低于1 x 1010cfu/L才能補償益生菌在通過人體胃腸道時活菌數的損失5,咱們發覺，雙歧桿菌在百普素營養液中培育 24hA550直一直處于上升趨勢，且16h 時活菌數達到x 1012cfu/L ,達到了益生菌含量的要求.百普素屬于中性要素飲食，其pH是雙歧桿菌存活的重要條件之一 雙歧桿菌不耐酸，在pH在以下生長緩慢6.咱們發覺，雙歧桿菌在 培育進程中，細菌總數一直在增加，活菌數在016h之間繁衍較快，16h后活菌數下降.營養液中的酸度也隨著時刻的延長而增加，20h后酸度下降.pH隨著時刻的延長而下降，12h后下降緩慢，可能是由于雙 歧桿

9、菌對糖的分解而產生大量的醋酸、乳酸和其他有機酸所致.盡管在 16h時營養液中活菌數最多，但現在pH已下降到了，無益于雙歧桿菌 的進一步的存活和繁衍，16h后活菌數下降，在1214h時pH值在以 上，而此期間活菌含量大于1X1011cfu/L數量級，能起到保健功能. 臨床要求配制好的營養液給患者利歷時，營養液要新鮮，不得超過24h 7.因此接種了雙歧桿菌的百普素營養液在培育1214h時可停止發酵且在24h之前利用.另外，雙歧桿菌不耐酸和膽鹽，僅適用于鼻空腸和空腸造口患者的腸內營養支持.【參考文獻】1黃海濤.腸內營養研究進展J.廣西醫科大學學 報,2005,22:147-149.2鄭建勇，王為忠，管文賢，等.全胃切除患者術后初期免疫增強 型腸內營養的作用JL第四軍醫大學學報，2005,26 (18): 1688-1690.3趙秋玲，李曉明.飲食因素與腸道微生態的研究進展J. 西北國防醫學雜志,2006,27(5):368-370.4 SchneiderSM,GirardPipauF,FilippiJ,chainfattyacidsandmicroflorainpatientsonlong termtotalenteralnutritionJ .WorldJGastroenterol,2005,11(39):6165-6169.