1、第1頁共 15 頁竭誠為您提供優質文檔 /雙擊可除per 實習自我鑒定篇一：實驗實習總結在這兩年半的碩士研究生生涯里，從各位老師尤其是我 的導師喻紅教授和各位師兄師姐、師弟師妹那里學到了很多， 這里面不僅有科研技術和理論知識，還包括很多為人處事的 道理。總之，兩年多的時間里我成長了很多，懂得了很多， 學到了很多，我明白這些對于我今后的人生都是一筆寶貴的 財富。還記得剛一進實驗室的那段時間，本就好奇心重的我對 什么都有興趣。師兄師姐們做實驗時我都會從一邊看著，不 時的還會問很多問題。有時我的問題很淺薄幼稚，但是師兄 師姐們都一一詳細地給我解答。有時因為自己的知識積累不 足，一時還聽不明白，翻看文

2、獻的效率又是非常的慢，自己 很是沮喪。這時，導師和師兄師姐們就會開導并引導我一步 一步來。讓我以最快的速度融入科研生活中來。通過這兩年半的磨練，我從一個剛入門的菜鳥逐漸成長為一個能單獨完成各種實驗的科研小能手。比如：基因組 DnA總 RnA 的提取，引物設計，RT-pcR 技術、熒光定量 pcR 技術，免疫組化技術，轉基因小鼠的飼養與管理，動物取材與處理，第 2 頁共 15 頁細胞培養及 w-bloting 技術等。尤其是熒光定量pcR 技術，整板復孔之間誤差基本能控制在絕對cT 值 0.2 以下，得到了老師和師兄師姐的肯定和認可。在這兩年多的時間里，我 也曾遇到過很多困難，面對不理想的實驗數

3、據和結果也曾沮 喪懊惱過。有段時間還一度懷疑自己的科研能力。比如剛一 上手引物設計的時候，有很多不懂的地方，設計出來的引物 擴增效率不高，bLAsT 方面的知識很多不會，不會摸退火溫 度條件等。后來通過一步一步努力和別人的幫助，這些很快 都能做的得心應手。總之，一路走來讓我成長了許多，學會了許多。更是導 師和同學幫我打開了科研世界的大門，面對這個有很多未知 的世界我不知道我能走多遠登多高，但是我想我不會輕言放 棄。在這里我要感謝我的導師喻紅教授及其它亦師亦友的老 師，還有這些朝夕相處的師兄師姐師弟師妹們。*老師您好：我叫謝光輝，是武漢大學基礎醫學院生物化學與分子生 物學專業的一名碩士三年級學生

4、，本科是武漢大學醫學檢驗 專業（5 年制）。意向報考 16 年上海交通大學的博士研究生。 之前了解到上海交大的招生制度是一個導師每年只能招一 個博士生。所以想咨詢一下您16 年還有沒有博士研究生的指標，本人可否報考您的博士生。百忙打擾，望見諒！另附個人簡歷一份。篇二：20XX 年分子生物學組實習小結分子生物學室實習報告刖言分子診斷學作為一門新興的學科，在疾病的診斷、療效 監測等多方面都逐第3頁共 15 頁漸扮演起了重要的角色，但真正能很好的 將分子生物學診斷信息運用好的醫務工作者還只是少數，不 少醫生目前仍對傳統的檢驗項目的臨床意義和可信度仍然 懷有質疑的態度，更不用說一些剛發展起來的檢驗項目

5、。因 此檢驗專業的實習生不僅要掌握分子診斷學常用檢驗項目 的原理、方法，更應該孰知其臨床意義，更好的與臨床進行 溝通，才能更好的運用先進的檢驗診斷技術為患者服務。實 習目的：熟悉分子室常規的檢查項目，掌握標本的簽收和處理，掌握 pcR 的原理，核酸（DnA 和 RnA 的提取，pcR 儀的使用， 熟悉核酸雜交的原理和操作方法及雜交儀的使用。了解各檢 測項目的臨床意義。實習內容：1. hbVDnA 檢測（定性和定量）、hcVRnA 檢測（定量）：核酸提取是擴增前最主要的步驟，每個環節都要注意防止交 叉污染。主要步驟：每個 ep 管加 100 微升 DnA 濃縮液，再加 100 微升待測血清，震蕩

6、混勻，離心12000rpmx10min，用加樣槍棄上清，加 30 微升 DnA 提取液，震蕩，金屬浴（100C）10min，離心12000rpmx5min。提取后，配試劑，加樣，擴增 1h45min，擴增儀型號為 7300。分析結果。注意，金屬浴過 程中，金屬浴箱要蓋上，每個ep 管要蓋嚴，防止加熱過程中發生爆管，造成實驗室的污染。若發生爆管，詳細記錄好 發生爆管的標本編號，爆管發生的原因，時間等情況。hsV-ll 型病毒 DnA 檢測（定量）、hpV 病毒（6、11 型和 16、18 型） DnA 檢測（定量）的標本均為分泌物，標本加生理鹽第4頁共 15 頁水，震 蕩，取 1ml 至 ep

7、管，離心 12000rpmx5min，棄上清，注意沉 淀易漂起，不要講沉淀棄掉，加 50 微升 DnA 提取液，震蕩， 金屬浴（100C）10min。然后配試劑，加樣，擴增 1h20min , pcR 儀為 7600。檢驗結果需要與患者的病史、臨床信息綜合 分析，絕對不可僅僅只憑pcR 結果進行疾病的診斷。2. 核酸雜交主要是指 hpV21 型檢測，標本多為女性的陰道分泌物，首先提取 DnA,進行核酸體外擴增，得到擴增 產物，然后金屬浴煮沸，淬火，得到大量單鏈的DnA 片段，將單鏈 DnA 片段加入到 500 微升雜交液中（之前的 DnA 提取 及淬火等操作在標本處理間進行，擴增在核酸擴增間進

8、行）,并到產物分析間進行核酸的雜交，每臺雜交儀可一次做15個標本，應注意防止漏液和交叉污染。3. 其他流式細胞術等，但由于標本量較少，平時多的不多。實習存在的問題和不足分子生物學室的實習感覺還是太過短暫，再加之實習人 數多，操作的機會少，特別是標本少的項目，基本還是處于 見習的狀態，而且相比其他組的實習，缺乏主動思考的的動 力，也許事理論知識學習不夠扎實，也許是跟老師交流太少，在以后的學習和工作中，應加強相關學習，真正掌握好這這 一門新興的學科，為今后的學習、該工作或者科研服務實習感想：一個月的實習很快結束了，每天其實都在做著大量的重 復工作，但是我并第5頁共 15 頁沒有因此而感到厭煩，相反

9、我覺得這是一 門藝術，因為沒有誰能保證 2 次加樣的量是完全一樣的，而 我們能做的就是是通過不斷的練習，規范我們的操作，使每 次加樣量盡可能的減小誤差，會做不代表能做好，真正的快 樂就在于，將別人認為枯燥無聊的工作做的完美無瑕。分子診斷學是一門有力的科研武器，不僅可以運用于臨 床診斷，在今后的工作中我們也可以運用這一門學科，在學 術上進行更深入的探索在實習結束之際，我要感謝分子生物學室每一位老師， 感謝他們耐心、親切的教導，是他們嚴謹、一絲不茍的工作 態度教育了我，是他們團結協作、融洽的工作氣氛感染了我。 他們循循善誘給我講解，他們耐心規范了我的操作，他們給 予我很大的信任與鼓勵，。而我能做的

10、是在今后的學習和工 作中帶著一顆感恩的心認真負責地工作，培養高尚的職業道 德、嚴肅的科學態度和一絲不茍的工作作風，使自己成為一 名合格的檢驗專業的的優秀人員。祝福分子生物學室每一位老師工作順利、闔家幸福篇三：關于 pcR 總結pcR 總結若模板為環狀質粒，最好先用酶將其切開成線性分子。酵母、細菌及質粒基因組，每次反應的模板最大加入量 分別為 10ng，1ng和 1pg。引物的設計原則1.引物的長度應適宜，一般要求 1825bp, 對引物中兩個引物之間的長度差異應小于3bp。第6頁共 15 頁2 .基本成分：g+c 的含量一般為 40%60%四種堿基應隨機的分布，避免堿基堆積的現象。尤其引物的3

11、端，不應有連續的 3 個 g 或 c,否則會使引物與核酸的 g 或 c 富集 區互補從而影響 pcR的特異性。3. 引物自身：引物自身不應有反向重復序列或者大于 3bp 的自身互補序列，否則引物自身會折疊形成發夾結構， 將影響引物與待增 DnA 中的靶序列的雜交結合。4. 引物之間：引物之間不應存在互補序列，尤其應避免 3端的互補重疊以免形成引物二聚體。由于pcR 反應體系中含有高濃度的引物，即使引物之間存在極為微弱的互補作用也會使引物相互雜交，最終得到引物二聚體的擴增產物。若引物二聚體在 pcR 反應的早期形成，它們將通過競爭DnA聚合酶、引物及四種單核苷酸從而抑制待增DnA 的擴增。通過精

12、心設計引物、應用熱啟動pcR(hotstartpcR) 或者降落pcR(touchdownpcR)及特制的 DnA 聚合酶，可以減少引物二 聚體的生成。5.3末端：引物的 3端(羥基端)是引發延伸的起 點，因此一定要與模板準確配對，應盡量避免在引物3端 的第一位堿基是 A。引物 3端最佳堿基的選擇是 g 和 c,因 為他們形成的堿基配對比較穩定。6. 溶解溫度：3端引物和 5端引物應有相似的 Tm 值第7頁共 15 頁(不同序列的 DnA Tm 值不同。DnA 中 g-c 含量越高，Tm 值 越高，成正比關系。),其差別不應大于 5C。擴增產物與引 物的 Tm 值的差別應小于 10C,以確保

13、pcR 循環中的擴增產 物有效的變性。8. 引物的特異性：引物與非特異擴增序列的同源性不要 超過 70%或有連續8 個堿基同源。9. 引物的簡并性：引物的 3端應為保守的氨基酸序列，即采用簡并密碼較少的氨基酸如met、Trp ,且要避免三聯體密碼第三個堿基的擺動位置位于引物的3端。設計引物時保證在最后 5 個核苷中含有 3 個 A 或 To引物的用量在 pcR 反應體系中，引物的濃度一般要求在 0.10.5 卩 m之間，這一引物濃度足以使1kb 的 DnA 片段在 pcR 反應體系中循環擴增 30 次。引物濃度過低，則產物量低；引物濃度 過高則會促進引物二聚體的形成以及非特異性產物的形成。反應緩沖系統反應緩沖系統提供 pcR 反應所必需的合適的酸堿度和某些離子。目前最常用的緩沖液是1050mmol/L 的Tris-hcl(ph8.38.8, 20C)，在 72C時，其 ph 值為 7.2 左右。反應緩沖系統中還含有Kcl , 50mm 以內的 Kcl 有利于引物的退火，而 50mn 以上的 Kcl 則抑制 TaqDnA 聚合酶的活性。然而，也有人認為含有 50mmKcl 的緩沖系統有利于大于 500bp第8頁共 15 頁的 DnA 片段的擴增，然而將緩沖系統中的Kcl 濃度提高到70100mm 則有利于提高較小的 DnA 片段的擴增產量。mg