1、1.體外培養(yǎng)的細(xì)胞按生長方式可分為哪二種? 按細(xì)胞在體外生長的形態(tài)特征,可分為哪幾種常見類型? 按生長方式分為二型： 粘附型細(xì)胞:附著在某一固相支持物表面才能生長的細(xì)胞。 懸浮型細(xì)胞:不必附著于固相支持物表面，而在懸浮狀態(tài)下即可生長的細(xì)胞。（絕大多數(shù)有機體細(xì)胞屬粘附型細(xì)胞。）可分四型：(1)上皮型細(xì)胞 (2)成纖維型細(xì)胞 (3)游走型細(xì)胞 (4)多形型細(xì)胞2.簡述體外培養(yǎng)細(xì)胞的整個生命活動過程的分期及每代貼附生長細(xì)胞的生長過程通常，體外培養(yǎng)細(xì)胞的全部生命期大致可被分為以下三個階段：原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，是指從機體中取出細(xì)胞接種培養(yǎng)到第一次傳代之前的這一階段。此期的細(xì)胞呈現(xiàn)出活躍移動的特點，

2、可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。處于原代培養(yǎng)階段的細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上有很大的相似性。細(xì)胞群具有明顯的異質(zhì)性，細(xì)胞間的相互依存性強，在軟瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)時細(xì)胞集落形成率很低。傳代期 ：通常是培養(yǎng)細(xì)胞全生命期中持續(xù)時間最長的時期，原代培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)傳代后常被稱做細(xì)胞系。一般情況下，正常體細(xì)胞在傳代10-50次左右后，細(xì)胞分裂的能力就會逐漸減弱，甚至完全喪失，細(xì)胞便進入衰退期。衰退期：處于衰退期的培養(yǎng)細(xì)胞，增殖速率已經(jīng)變得很慢或不再增殖，直至最后衰退死亡。以上特點，主要是針對體外培養(yǎng)的機體正常細(xì)胞，對于體外發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞而言，永生性或惡型性的獲得使得這類細(xì)胞獲得持久性的增殖能力，這

3、樣的細(xì)胞群體常被稱為無限細(xì)胞系或連續(xù)細(xì)胞系。每代貼附生長細(xì)胞的生長過程：游離期：細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)，也稱懸浮期。此時細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。時間：10分鐘一4小時貼壁期：細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束。底物：玻璃、塑料、膠原、其它細(xì)胞等潛伏期：此時細(xì)胞有生長活動，而無細(xì)胞分裂。細(xì)胞株潛伏期一般為624小時。對數(shù)生長期：細(xì)胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究。停止期（平臺期）：細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂機制：接觸抑制、密度限制3.簡述體外培養(yǎng)細(xì)胞對生存環(huán)境的基本要求.細(xì)胞的營養(yǎng)需要：基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸（種谷氨酰胺）、維生素、葡萄糖、核糖、脫氧核糖等無機離

4、子。促細(xì)胞生長因子：多由血清提供細(xì)胞的生存環(huán)境：溫度條件對細(xì)胞生長的影響：不同生物來源的組織細(xì)胞培養(yǎng)溫度不同；體外培養(yǎng)動物細(xì)胞最常用的溫度是37，耐低溫不耐高溫。在生理溫度范圍內(nèi)，溫度與細(xì)胞生長率之間存在正相關(guān)關(guān)系。 氣相環(huán)境對細(xì)胞生長的影響：動物細(xì)胞培養(yǎng)的氣相環(huán)境都是采用5%CO2與95%空氣（提供氧）的混合氣體。2參與細(xì)胞的能量代謝過程，2用于維持培養(yǎng)液的酸堿度，一般多為開放式培養(yǎng) 培養(yǎng)液的酸堿度對細(xì)胞生長的影響：大多數(shù)的有機體細(xì)胞能在pH6.08.0的環(huán)境中生存。最適宜的pH值范圍是7.27.4。體外培養(yǎng)的正常細(xì)胞耐酸能力要強于耐堿能力無污染、無毒。4什么是細(xì)胞培養(yǎng)用液,主要分為哪幾類?

5、培養(yǎng)用液是維護組織細(xì)胞生存、生長及進行細(xì)胞培養(yǎng)各項操作過程中所需的基本溶液。主要包括：平衡鹽溶液 ； 培養(yǎng)基； 其他培養(yǎng)用液 。5D-Hanks與Hanks的主要區(qū)別是什么?D-Hanks不含有Ca2+、Mg2+ ，常用于配制胰酶溶液。6簡述胰酶的常用濃度及配制時的注意事項。胰酶(trypsin)溶液： 濃度一般為0.10.25，配制時要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡鹽溶液 。7.細(xì)胞培養(yǎng)中血清的主要作用？ (1)提供基本營養(yǎng)物質(zhì) ； (2)提供貼壁和擴展因子 (3)提供激素及各種生長因子； (4)提供結(jié)合蛋白 (5)對培養(yǎng)中的細(xì)胞提供某些保護作用 8.血清的使用與儲存有哪些注意事項？（

6、1）使用前的處理：使用前通常在56加熱30分鐘，這一過程稱為滅活。熱滅活目的：滅活血清中的補體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新生牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。（2）儲存條件：血清一般儲存于20,同時應(yīng)避免反復(fù)凍融 。大包裝的血清，首先將血清滅活處理，然后分裝為小包裝，如10ml、20ml、50ml，儲存于-20，使用前融化。融化后的血清在4不宜長時間存放，應(yīng)盡快使用。9.簡述干粉培養(yǎng)基的配制過程。DMEM培養(yǎng)液的配制（舉例）： 900 mL ddH2O于1000 mL燒杯中，將DMEM粉1包倒入其中，盛粉袋用50 mL ddH2O分次沖洗，也倒入容器，磁力（或玻棒）攪拌溶解。用51

7、0的NaHCO3調(diào)pH至7.2。加青、鏈霉素至終濃度100u/mL 和100ug/mL 用0.22um的濾膜過濾除菌。分裝（200 mL左右）后4冰箱保存。 10.細(xì)胞培養(yǎng)工作室可分為那幾個部分，各有什么作用?一般包括：準(zhǔn)備室、培養(yǎng)室和緩沖室。作用：準(zhǔn)備室：用于進行培養(yǎng)器皿的清洗、包裝、培養(yǎng)物質(zhì)的準(zhǔn)備和消毒以及供應(yīng)物品的保藏等。培養(yǎng)室：用于進行細(xì)胞培養(yǎng)和各種無菌操作的實驗室。其基本條件是：清潔、無菌、干燥、不通風(fēng)，并具有適宜的光線。天花板不宜高過2.5M。緩沖室：（更衣室）11. CO2培養(yǎng)箱的作用及使用中的注意事項。用于維持適當(dāng)溫度、濕度與pH。注意事項：質(zhì)量關(guān)鍵在控溫裝置，溫度變化一般不應(yīng)

8、超過0.5度;培養(yǎng)箱的溫度設(shè)在3537，這是人和哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞的最適溫度。培養(yǎng)容器需與外界保持通氣狀態(tài)。箱內(nèi)空氣應(yīng)保持干凈，定期消毒（紫外燈、酒精）水槽:保持一定濕度12. 試述清潔液的配方組成及配制時的注意事項。清潔液 :重鉻酸鉀（g）濃硫酸（ml）蒸餾水（ml），強清潔液 631000200 ，次強清洗液 120 2001000 ，弱清潔液 100 1001000配制時應(yīng)注意安全，須穿戴耐酸手套和圍裙，并要保護好面部及身體裸露部分。配制過程中可使重鉻酸鉀溶于水中，然后慢慢加濃硫酸，并不停的用玻璃棒攪拌，使產(chǎn)生的熱量揮發(fā)，配制溶液應(yīng)選擇塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色13簡述消毒滅菌的常

9、用方法、要求條件及主要應(yīng)用范圍。物理消毒滅菌法紫外線：用于空氣，操作臺表面和不能使用其它法進行消毒的培養(yǎng)器皿。消毒時間：30min（至少）； 紫外殺菌功能除了紫外本身以外，還可以由產(chǎn)生的臭氧來完成。紫外滅菌以后，最好過一個小時再進去。過濾：0.22m（適用于液體）濕熱（高壓蒸氣滅菌法）15磅,121，20min各種物品有效消毒壓力和時間不同，一般要求如下： 培養(yǎng)用液、橡膠制品 l0磅l0分鐘 布類、玻璃制品、金屬器械等 15磅20分鐘干烤：160, 2 小時（適用于玻璃器皿等）注意：消毒后不要立即打開箱門，以防冷空氣驟然進入引起玻璃炸裂，影響消毒效果。化學(xué)消毒滅菌法：7%酒精 主要用于操作者的

10、皮膚，操作臺表面及無菌室內(nèi)的壁面處理。1新潔爾滅 主要用于器械的浸泡及皮膚和操作室壁面的擦試消毒。抗生素 主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染。細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素是青霉素（常用濃度是100u/ml）與鏈霉素（100g/ml）。不要在原代培養(yǎng)中加入抗生素 。14. 如何對玻璃器皿進行有效清洗？玻璃器皿的清洗：浸泡刷洗(+烘干)浸酸沖洗；清洗后的玻璃器皿：干凈透明無油跡。浸泡： 初次使用和培養(yǎng)使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附著物軟化或被溶掉。新的初次使用的玻璃器皿，在生產(chǎn)及運輸過程中，玻璃表面帶有大量的干固的灰塵，且玻璃表面常呈堿性及帶有一些對細(xì)胞有害的物質(zhì)等。先用自來水簡單刷洗，然

11、后用5稀鹽酸液浸泡過夜，以中和其中的堿性物質(zhì)。再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過的殘留蛋白質(zhì)，干固后不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有氣泡或浮在液面上。刷洗：用毛刷（特制的羊毛刷）沾洗滌劑刷洗，以除去器皿表面附著較牢的雜質(zhì)。刷洗要適度，過度會損害器皿表面光澤度。自然晾干或烘干后泡酸。浸酸：玻璃器皿浸泡到清潔液（洗液）中。清潔液對玻璃器皿無腐蝕作用，而其強氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質(zhì)。浸泡時器皿要充滿清潔液，勿留氣泡或器皿露出清潔液面。浸泡時間：一般為過夜，不應(yīng)少于6 小時。沖洗：在使用后，刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗,使之盡量不留污染或清潔液的殘跡。最好用洗滌裝置。如

12、用手工操作，需流水沖洗十次以上，每次水須灌滿及倒干凈，然后用蒸餾水清洗3-5 次，晾干（或烘干）備用15細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素及使用濃度是什么?青霉素（常用濃度是100u/ml）與鏈霉素（100g/ml）。16什么是原代培養(yǎng)？簡述原代培養(yǎng)方法的分類及主要操作步驟。原代培養(yǎng)：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)方法分類：貼塊法和消化法。消化法又分為冷消化與熱消化；一次性消化與分次消化。主要步驟：貼塊法：將取得洗凈并剔去多余成分的組織切成約1mm3大小的植塊，用于植塊培養(yǎng)。消化法：將取得洗凈并剔去多余成分的組織剪碎蛋白酶溶液消化機械方吹打組織塊對濾過液離心（&

13、lt;1000r/min, <10min）用培養(yǎng)液懸浮成細(xì)胞懸液計數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞密度用于分離細(xì)胞培養(yǎng)17何謂傳代培養(yǎng)？簡述貼壁細(xì)胞的傳代操作步驟。傳代培養(yǎng)是指細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)： 選取生長良好的細(xì)胞，在超凈工作臺的酒精燈旁，倒去瓶中的舊培養(yǎng)液，加入23ml的D- Hanks液，輕輕振蕩漂洗細(xì)胞，以除去懸浮在細(xì)胞表面的碎片。加入適量0. 0.25胰蛋白酶消化液，室溫消化，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞單層收縮突起出現(xiàn)空隙時，倒去酶液。用Hanks液洗滌1次，加入適量培養(yǎng)液，反復(fù)吹打細(xì)胞，使其成細(xì)胞懸液。以1：2或1：3進行分裝，并在培養(yǎng)

14、瓶上做好標(biāo)記，注明代號、日期，輕輕搖勻， 37 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。觀察：細(xì)胞培養(yǎng)24h后，即可觀察培養(yǎng)液的顏色及細(xì)胞的生長情況。18收集細(xì)胞時一般常用的轉(zhuǎn)速和時間是多少？轉(zhuǎn)速：1000r/min；時間：5min19. 什么是冷凍保存？影響細(xì)胞冷凍保存效果的因素有哪些？冷凍保存(cryopreservation)：將體外培養(yǎng)物懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，以一定的冷凍速率降至零下某一溫度(一般是低于-70的超低溫條件)，并在此溫度下對其長期保存的過程。冷凍速率當(dāng)冷凍速度過慢時，細(xì)胞脫水嚴(yán)重，細(xì)胞體積嚴(yán)重收縮，超過一定程度時即失去活性。冷凍速度過慢，還會引起細(xì)胞外溶液部分結(jié)冰，從而使細(xì)胞外未結(jié)冰的

15、溶液中溶質(zhì)濃度增高，產(chǎn)生溶質(zhì)損傷。當(dāng)冷凍速度過快時，細(xì)胞內(nèi)水分來不及外滲，會形成較大冰晶,造成細(xì)胞膜及細(xì)胞器的破壞，產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷。 冷凍保存溫度：液氮溫度(-196)是目前最佳冷凍保存溫度。應(yīng)用-70-80條件冷凍保存細(xì)胞，短期內(nèi)對細(xì)胞活性無明顯影響，但隨著凍存時間延長，細(xì)胞存活率明顯下降。復(fù)溫速率 指在細(xì)胞復(fù)蘇時溫度升高的速度。一般來說復(fù)溫速度越快越好。常規(guī)的做法是，在37水浴中，于12min內(nèi)完成復(fù)溫。 在冷凍復(fù)蘇中遵循：慢凍速溶原則。冷凍保護劑：是指可以保護細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。分為：滲透性： 常用甘油、DMSO 非滲透性甘油或二甲基亞砜這兩種物質(zhì)分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞，

16、可以使冰點下降，提高細(xì)胞膜對水的通透性，且對細(xì)胞無明顯毒性。 保護機制：是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前，滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷；同時，細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細(xì)胞過分脫水皺縮。甘油和DMSO并不能防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。在使用該類冷凍保護劑時，需要一定的時間進行預(yù)冷，讓甘油或DMSO等充分滲到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外達(dá)到平衡以起到充分的保護作用。目前，DMSO的應(yīng)用比甘油更為廣泛。非滲透性冷凍保護劑不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是些大分子物質(zhì)。20凍存的細(xì)胞一般如何復(fù)蘇？1)將恒溫水浴箱的溫度調(diào)至3740。2)從液氮

17、中取出凍存小管，立即投入3740溫水中快速晃動，直至凍存液完全融解。要在12min內(nèi)完成復(fù)溫。3)將細(xì)胞凍存懸液移入離心管，加入約5m1培養(yǎng)液，輕輕吹勻。 4)將細(xì)胞懸液經(jīng)8001000 r/min離心5min。棄上清液。5)給細(xì)胞沉淀物加入完全培養(yǎng)液，輕輕吹吸均勻。將細(xì)胞懸液移入培養(yǎng)瓶內(nèi)，加足培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。21簡述培養(yǎng)細(xì)胞的非玻璃化凍存過程。非玻璃化凍存是利用各種溫級的冰箱分階段降溫至-70-80，然后投入液氮進行保存；該種方法凍結(jié)的細(xì)胞懸液或多或少都有冰晶的形成。 凍存過程：(1)待凍存細(xì)胞懸液的準(zhǔn)備 ：按常規(guī)方法消化處于對數(shù)生長期的細(xì)胞培養(yǎng)物,制備成單細(xì)胞懸液,計算細(xì)胞總數(shù)。將細(xì)胞懸液

18、以8001000rmin離心5min，棄上清液。向沉淀物中加入冷凍液。輕輕吹吸均勻，使細(xì)胞密度達(dá)1×1061×107個/ml。按每管11.5ml的量，分裝于凍存小管內(nèi)。擰緊管蓋。在凍存小管上做標(biāo)記，包括細(xì)胞代號及凍存日期。(2)分級冷凍：先將凍存小管放人普通冰箱冷藏層(48)，約40min。接著置于普通冰箱冷凍層(-10-20)，3060min。再于-30放置30min左右（可省略）。然后在-70-80下過夜。最后將凍存小管投入液氮保存。還有一種簡單的方法，就是將凍存小管先懸掛在液氮罐口20 min，再直接投入液氮中保存。第三種方法是，用4預(yù)冷的冷凍保護液懸浮細(xì)胞，分裝凍存

19、小管后，將凍存小管放在4下30min；然后置于壁厚1 cm以上的泡沫塑料小盒內(nèi)封好，立刻將小盒放置在-70-80冰箱中24h以上至1周；再將凍存小管投入液氮中保存。 (3)記錄：做好凍存記錄。記錄內(nèi)容包括凍存日期、細(xì)胞代號、凍存管數(shù)、凍存過程中降溫的情況、凍存位置以及凍存經(jīng)手人。22DMSO使用時應(yīng)注意哪些事項？在使用DMSO前，不需要對其進行高壓滅菌，因其本身有滅菌作用。 在常溫下，DMSO對人體有毒，故在配制冷凍保護劑時最好帶手套。由于許多冷凍保護劑(如DMSO)在低溫條件下能保護細(xì)胞，但在常溫下卻對細(xì)胞有害，故在細(xì)胞復(fù)溫融解后要及時洗除冷凍保護劑。23. 細(xì)胞培養(yǎng)中常見有哪些微生物污染，

20、有何主要特征？真菌污染：真菌種類多，形態(tài)各異，但污染后均不難發(fā)現(xiàn)，大多呈白色或淺黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面，肉眼可見；有的散在生長，鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹枝狀菌絲，縱橫交錯穿行于細(xì)胞之間。念珠菌和酵母菌呈卵圓形態(tài)，散在于細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長。細(xì)菌污染：污染后大多能改變培養(yǎng)液pH培養(yǎng)液變混濁，毒性大的細(xì)菌很快導(dǎo)致細(xì)胞崩解死亡。加用抗生素的培養(yǎng)用液一般可預(yù)防和排除個別少量細(xì)菌的污染。支原體污染：支原體是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見、不易被察覺和干擾實驗結(jié)果的一種污染。24運送細(xì)胞的比較簡便的方法是哪一種，簡述其過程。一是用液氮或干冰保存運輸，效果較好，但需用特制容器如小液氮罐等，又因液氮和干冰蒸發(fā)均較快，適

21、于空運，比較麻煩;二是充液法運輸，比較簡便。充液法運輸操作如下： 選生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，待達(dá)80%或90%匯合時，去掉舊培養(yǎng)液換入新培養(yǎng)液，量要達(dá)到培養(yǎng)瓶的頸部(過滿易污染)，保留少許空間，塞緊瓶塞，空氣過多運輸中氣泡運動易使細(xì)胞脫落; 妥善包裝和運送；一般在不超過四五天到達(dá)目的地的情況下，對細(xì)胞活力無嚴(yán)重影響; 到達(dá)后，倒出大部分培養(yǎng)液，保留正常量，置37培養(yǎng)，次日傳代。25. 簡述細(xì)胞污染的概念及種類.細(xì)胞污染: 凡混入培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物，都視為污染。組織培養(yǎng)污染: 微生物：真菌、細(xì)菌、支原體和病毒；化學(xué)物質(zhì)：影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需的化學(xué)成分；細(xì)胞：不同細(xì)

22、胞類型的交叉污染。26. 細(xì)胞培養(yǎng)中污染主要通過哪些途徑，一般如何預(yù)防？空氣: 培養(yǎng)設(shè)施不宜置于通風(fēng)場所；定期清理凈化工作臺的過濾層，防止阻塞；操作中應(yīng)減少空氣流動；帶口罩；夏季潮濕季節(jié)空氣中含菌數(shù)量多，每立方米內(nèi)含菌數(shù)不應(yīng)超過15個。清洗消毒：培養(yǎng)器皿和容器洗刷不凈殘留污物、培養(yǎng)用液滅菌不徹底等，都可引入有害物。操作：實驗操作馬虎、動作不準(zhǔn)確、消毒觀念不強，使用的吸管、刀、剪沾染微生物等；或封瓶口時不嚴(yán)，都可發(fā)生污染。同時培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞，操作不慎使用同一吸管或培養(yǎng)用液，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。血清：血清也是污染細(xì)胞的來源，有的市售血清制備水平低、檢測不嚴(yán)，常已被支原體和病毒污染。組織：初代培

23、養(yǎng)組織常有污染；有的是在手術(shù)中污染，有的本身可能是被污染的組織(如已發(fā)生潰爛的腫瘤組織)；手術(shù)用碘酒消毒后，擦拭不凈可能混入碘污染 。27 細(xì)胞計數(shù)的操作要領(lǐng)及計算公式是什么？具體操作程序如下：取血細(xì)胞計數(shù)板和蓋玻片，用75%酒精擦凈。將蓋玻片放于計數(shù)板上。用滴管取混合均勻的細(xì)胞懸液，滴入計數(shù)室內(nèi)。要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。滴加細(xì)胞懸液后約靜置1分鐘后則可以進行計數(shù)。統(tǒng)計四個大格的細(xì)胞數(shù)：將血球計數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數(shù)板，分別數(shù)出四角的四個大格（每個大格含有16個中格）中的細(xì)胞數(shù)。對壓邊線細(xì)胞：計上不計下，計左不計右 計算：一般以每

24、毫升含細(xì)胞數(shù)來表示，大方格的面積為1mm2，室深為0.1mm，則體積為0.1mm3。推算得0.1mm3×104，才為1ml體積。所以計算公式為：細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml （ 四個大格子細(xì)胞數(shù)/4) ×104 ×稀釋倍數(shù)；計數(shù)中，如果細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度過高，必須稀釋后再計；如果細(xì)胞數(shù)太少,可離心濃縮后再計。每個細(xì)胞懸液至少滴樣兩次求平均值。 用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)時應(yīng)注意的事項:不要漏計，不要重復(fù)細(xì)胞懸液應(yīng)混合均勻濃度不可過高也不可過低。28. 簡述細(xì)胞生長曲線繪制過程及其應(yīng)用。細(xì)胞生長曲線(cell growth curve)是觀測細(xì)胞在一代生存期內(nèi)的增生過程的重要指標(biāo)，可根據(jù)細(xì)胞生長曲線分析細(xì)胞增殖速度，確定細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存或具體實驗的最佳時間。它以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)作坐標(biāo)圖。 制作方法：培養(yǎng)細(xì)胞：首先在2孔培養(yǎng)板內(nèi)分別接種相同數(shù)量的細(xì)胞。計數(shù)并記錄接種的細(xì)胞懸液之密度。計數(shù)細(xì)胞密度：從接種時間算起，每隔24h計數(shù)孔內(nèi)的細(xì)胞密度，算出平均值。為提高準(zhǔn)確率，對每孔細(xì)胞可計數(shù)23次。如此操作至第七天結(jié)束。繪制曲線：以培養(yǎng)時間為