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文檔簡介

1、L/O/G/O根瘤菌的分離與鑒定(1) 照相(2) 挖掘和根瘤保存根瘤選取：大個、新鮮、粉紅色、盡量多取。根瘤采集：1.主根上可以剝取少量根皮以保證根瘤完整。 2.側根上的可帶少許根。 采集采集農大豆2號保豆3號保存 每個單株植物的根瘤收集在一個衛生紙包中，每個采集點的多個植株放在一個裝有硅膠的自封袋中。分離及純化用無菌水浸泡干燥根瘤菌直至其復原。2 .用95%的酒精浸泡35分鐘，用5%的NaClO3 浸泡1分鐘， 用無菌水清洗 57次（換水）。（在超凈臺上操作，并且在酒精燈附近，防止染菌）分離及純化(1) 根瘤浸泡(2) 根瘤消毒分離及純化 3.用牙簽（滅菌時尖頭朝上，平頭朝下）的平頭端在滅

2、菌的玻璃平皿上將根瘤刺破（必要時可以滴加一滴無菌水）。用滅菌接種環蘸取菌液在YMA固體培養基上劃線。用滅菌接種環蘸取同種菌液，在載玻片上進行革蘭氏染色，鏡檢。分離及純化消毒刺破劃線分離及純化4.待平板出現菌落后，觀察，選取目的菌落再次劃線純化，鏡檢。5.純化后的菌劃線在試管斜面培養基上，供保菌。分離及純化挑菌，搖菌稀釋1萬倍稀釋2萬倍稀釋100萬倍保菌使用YMA液體+20%甘油，吹打斜面上的菌，吸取保存。使用YMA液體+20%甘油，吸取搖好的單個菌斑菌液。提取基因組DNA260/280:1.97260/230:2.02 濃度：570ng/鑒定 16S rDNA序列測定：方法同書。 其中：dNTP：2.5mm 引物：10m 測序后，在NCBI

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