1、第四章第四章 生物化學與分子生生物化學與分子生物學技術實際物學技術實際第一節第一節 生物成分的分別與測生物成分的分別與測定技術定技術蛋白質的分別與純化蛋白質的分別與純化一、蛋白質的性質一、蛋白質的性質 蛋白質與多肽一樣，可以發生兩性離解，蛋白質與多肽一樣，可以發生兩性離解，也有等電點。在等電點時，蛋白質的溶也有等電點。在等電點時，蛋白質的溶解度最小，在電場中不挪動。解度最小，在電場中不挪動。 在不同的在不同的pHpH環境下，蛋白質的電學性質環境下，蛋白質的電學性質不同。在等電點偏酸性溶液中，蛋白質不同。在等電點偏酸性溶液中，蛋白質粒子帶負電荷，在電場中向正極挪動；粒子帶負電荷，在電場中向正極挪

2、動；在等電點偏堿性溶液中，蛋白質粒子帶在等電點偏堿性溶液中，蛋白質粒子帶正電荷，在電場中向負極挪動。這種景正電荷，在電場中向負極挪動。這種景象稱為蛋白質電泳。象稱為蛋白質電泳。 由于蛋白質的分子量很大，它在水中可由于蛋白質的分子量很大，它在水中可以構成膠體溶液。蛋白質溶液具有膠體以構成膠體溶液。蛋白質溶液具有膠體溶液的典型性質，如丁達爾景象、布郎溶液的典型性質，如丁達爾景象、布郎運動等。運動等。 由于膠體溶液中的蛋白質不能經過半透由于膠體溶液中的蛋白質不能經過半透膜，因此可以運用透析法將非蛋白的小膜，因此可以運用透析法將非蛋白的小分子雜質除去。分子雜質除去。 蛋白質膠體溶液的穩定性與它的分子量

3、蛋白質膠體溶液的穩定性與它的分子量大小、所帶的電荷和水化作用有關。大小、所帶的電荷和水化作用有關。 改動溶液的條件，將影響蛋白質的溶解改動溶液的條件，將影響蛋白質的溶解性質性質 在適當的條件下，蛋白質可以從溶液中在適當的條件下，蛋白質可以從溶液中沉淀出來。沉淀出來。 在溫暖條件下，經過改動溶液的在溫暖條件下，經過改動溶液的pHpH或電或電荷情況，使蛋白質從膠體溶液中沉淀分荷情況，使蛋白質從膠體溶液中沉淀分別。別。 在沉淀過程中，構造和性質都沒有發生在沉淀過程中，構造和性質都沒有發生變化，在適當的條件下，可以重新溶解變化，在適當的條件下，可以重新溶解構成溶液，所以這種沉淀又稱為非變性構成溶液，所

4、以這種沉淀又稱為非變性沉淀。沉淀。 可逆沉淀是分別和純化蛋白質的根本方可逆沉淀是分別和純化蛋白質的根本方法，如等電點沉淀法、鹽析法和有機溶法，如等電點沉淀法、鹽析法和有機溶劑沉淀法等。劑沉淀法等。 在劇烈沉淀條件下，不僅破壞了蛋白質在劇烈沉淀條件下，不僅破壞了蛋白質膠體溶液的穩定性，而且也破壞了蛋白膠體溶液的穩定性，而且也破壞了蛋白質的構造和性質，產生的蛋白質沉淀不質的構造和性質，產生的蛋白質沉淀不能夠再重新溶解于水。能夠再重新溶解于水。 由于沉淀過程發生了蛋白質的構造和性由于沉淀過程發生了蛋白質的構造和性質的變化，所以又稱為變性沉淀。質的變化，所以又稱為變性沉淀。 如加熱沉淀、強酸堿沉淀、重

5、金屬鹽沉如加熱沉淀、強酸堿沉淀、重金屬鹽沉淀和生物堿沉淀等都屬于不可逆沉淀。淀和生物堿沉淀等都屬于不可逆沉淀。 蛋白質的性質與它們的構造親密相關。蛋白質的性質與它們的構造親密相關。某些物理或化學要素，可以破壞蛋白質某些物理或化學要素，可以破壞蛋白質的構造形狀，引起蛋白質理化性質改動的構造形狀，引起蛋白質理化性質改動并導致其生理活性喪失。這種景象稱為并導致其生理活性喪失。這種景象稱為蛋白質的變性。蛋白質的變性。蛋白質的變性蛋白質的變性 變性蛋白質通常都是固體形狀物質，不溶于水和變性蛋白質通常都是固體形狀物質，不溶于水和其它溶劑，也不能夠恢復原有蛋白質所具有的性其它溶劑，也不能夠恢復原有蛋白質所具

6、有的性質。所以，蛋白質的變性通常都伴隨著不可逆沉質。所以，蛋白質的變性通常都伴隨著不可逆沉淀。引起變性的主要要素是熱、紫外光、猛烈的淀。引起變性的主要要素是熱、紫外光、猛烈的攪拌以及強酸和強堿等。攪拌以及強酸和強堿等。 大部分蛋白質均含有帶芳香環的苯丙氨大部分蛋白質均含有帶芳香環的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。酸、酪氨酸和色氨酸。 這三種氨基酸的在這三種氨基酸的在280nm 280nm 附近有最大吸附近有最大吸收。因此，大多數蛋白質在收。因此，大多數蛋白質在280nm 280nm 附近附近顯示強的吸收。顯示強的吸收。 利用這個性質，可以對蛋白質進展定性利用這個性質，可以對蛋白質進展定性鑒定。鑒定。

7、二、蛋白質分別和純化二、蛋白質分別和純化 研討蛋白質的構造、性質和功能，首先需研討蛋白質的構造、性質和功能，首先需求得到純的蛋白質樣品。求得到純的蛋白質樣品。 (1)(1)蛋白質來源：微生物細胞、動物細胞和蛋白質來源：微生物細胞、動物細胞和植物細胞；植物細胞； (2)(2)隨時測定蛋白質活性并檢測蛋白質含量。隨時測定蛋白質活性并檢測蛋白質含量。 (3)(3)分別和純化過程都必需在溫暖的條件下分別和純化過程都必需在溫暖的條件下進展。進展。 (1)(1)生物組織的機械破碎。常用的方法有研磨法、生物組織的機械破碎。常用的方法有研磨法、超聲波法和酶解法等。超聲波法和酶解法等。 (2)(2)根據蛋白質的

8、特性，選擇不同的溶劑進展抽提。根據蛋白質的特性，選擇不同的溶劑進展抽提。 水溶性蛋白用中性緩沖溶液透析液抽提，酸性水溶性蛋白用中性緩沖溶液透析液抽提，酸性蛋白用稀堿性溶液抽提，脂溶性蛋白用有機溶劑抽蛋白用稀堿性溶液抽提，脂溶性蛋白用有機溶劑抽提等。提等。 (3)(3)粗提粗提: : 離心除去固體雜質后，可經過沉淀法、離心除去固體雜質后，可經過沉淀法、超濾法、萃取法等處置，得到蛋白質粗制品。超濾法、萃取法等處置，得到蛋白質粗制品。 (4)(4)提純：可用層析法、電泳法等進展提純。提純：可用層析法、電泳法等進展提純。 (5)(5)廢品加工：測定蛋白質的性質并枯燥成廢品。廢品加工：測定蛋白質的性質并

9、枯燥成廢品。1蛋白質的分別步驟蛋白質的分別步驟血紅蛋白提取和分別步驟血紅蛋白提取和分別步驟詳詳細細操操作作步步驟驟一一二二三三四四血血液液血血 漿漿水水 分分固體物質固體物質血漿蛋白血漿蛋白無機鹽無機鹽磷磷 脂脂葡萄糖等葡萄糖等血細胞血細胞白細胞白細胞血小板血小板紅細胞紅細胞最多最多血紅蛋白血紅蛋白 9090血液組成成分血液組成成分1.洗滌紅細胞洗滌紅細胞1.1 洗滌的目的：洗去血液中血漿及血小板等中的洗滌的目的：洗去血液中血漿及血小板等中的雜蛋白雜蛋白1.2 洗滌過程：洗滌過程：血液血液100mL3g檸檬酸鈉檸檬酸鈉低速離心低速離心2 min紅細胞紅細胞血血 漿漿吸出血漿吸出血漿紅細胞紅細胞

10、5倍體積生理鹽水倍體積生理鹽水緩慢攪拌緩慢攪拌10min反復洗滌反復洗滌3次，直至上清液沒有次，直至上清液沒有防止破壞紅防止破壞紅細胞，使血細胞，使血紅蛋白流失紅蛋白流失一樣品處置一樣品處置黃色黃色2. 血紅蛋白的釋放血紅蛋白的釋放原理：紅細胞浸透作用吸水漲破，釋放血紅蛋白原理：紅細胞浸透作用吸水漲破，釋放血紅蛋白3.分別血紅蛋白溶液分別血紅蛋白溶液分別過程：分別過程：紅細胞紅細胞混合液混合液離心管離心管甲苯層甲苯層脂類物質脂類物質血紅蛋白層血紅蛋白層破碎物沉淀層破碎物沉淀層高速離心高速離心10min 濾紙濾紙過濾過濾脂類物質脂類物質沉淀物沉淀物燒杯燒杯分液分液漏斗漏斗20mmol/L磷酸緩沖

11、液磷酸緩沖液透析的目的是什么？透析的目的是什么？1mL1mL1mL去除血紅蛋白中的小分子雜質去除血紅蛋白中的小分子雜質二粗分別二粗分別透析血紅蛋白透析血紅蛋白本卷須知本卷須知1生理鹽水作用？生理鹽水作用？3兩次離心的差別？兩次離心的差別？4透析袋的作用機理？透析袋的作用機理？模擬紅細胞生存環境，堅持紅細胞構造完好。模擬紅細胞生存環境，堅持紅細胞構造完好。破碎紅細胞；溶解細胞膜破碎紅細胞；溶解細胞膜釋放血紅蛋白。釋放血紅蛋白。前慢后快，前短后長。前慢后快，前短后長。浸透作用浸透作用2蒸餾水和甲苯的作用？蒸餾水和甲苯的作用？ 離心沉降法離心沉降法 凝膠色譜法凝膠色譜法 萃取法萃取法 層析法層析法

12、電泳法電泳法三純化三純化1.1.凝膠色譜法凝膠色譜法 1 1原理：原理：2 2資料：凝膠資料：凝膠大分子經過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；大分子經過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；小分子穿過多孔凝膠顆粒的內部，路程長，流動慢。小分子穿過多孔凝膠顆粒的內部，路程長，流動慢。凝膠是微小的多孔性球體，如葡聚糖或瓊脂糖。凝膠是微小的多孔性球體，如葡聚糖或瓊脂糖。內部有許多貫穿的通道內部有許多貫穿的通道.根據相對分子質量的大小分別蛋白質的方法根據相對分子質量的大小分別蛋白質的方法概念：概念：凝膠色譜法純化蛋白質凝膠色譜法純化蛋白質洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液， 促使蛋白質分子的差速流動。混

13、合物混合物上上 柱柱洗洗脫脫大分子流動快大分子流動快小分子流動慢小分子流動慢收收 集集大分子大分子收收 集集小分子小分子 1原理：原理：不同蛋白質的帶電性質正電荷或負電荷、電量、不同蛋白質的帶電性質正電荷或負電荷、電量、外形和大小不同，在電場中遭到的作用力大小、方向、外形和大小不同，在電場中遭到的作用力大小、方向、阻力不同，導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運阻力不同，導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運動速度不同。動速度不同。電泳：帶電粒子在電場的作用下發生遷移的過程電泳：帶電粒子在電場的作用下發生遷移的過程四純度鑒定四純度鑒定電泳電泳2電泳結果分析電泳結果分析假設出現一個條帶：樣品中含有一

14、個分子質量級別多肽；假設出現一個條帶：樣品中含有一個分子質量級別多肽； 假設出現兩個條帶：樣品中含有兩個分子質量級別多肽。假設出現兩個條帶：樣品中含有兩個分子質量級別多肽。 由弱酸和相應的強堿弱酸鹽溶解于水中。由弱酸和相應的強堿弱酸鹽溶解于水中。如如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等等3緩沖溶液洗脫劑緩沖溶液洗脫劑 作用：作用： 配制：配制：調理酸和鹽的用量，可配制不同調理酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。的緩沖液。抵抗外界酸堿對溶液抵抗外界酸堿對溶液pH的干擾而堅持的干擾而堅持 pH穩定。穩定。 思索：如何配制不同PH值不同的緩沖液？實驗四實驗四 血清蛋白醋酸血清

15、蛋白醋酸纖維薄膜電泳纖維薄膜電泳【目的要求】【目的要求】1、掌握電泳技術的普通原理和根本操作過程。、掌握電泳技術的普通原理和根本操作過程。2、熟習血清中蛋白分類以及電泳分別操作。、熟習血清中蛋白分類以及電泳分別操作。【實驗原理】【實驗原理】1.1.電泳：是指帶電粒子在電場中向本身所帶電電泳：是指帶電粒子在電場中向本身所帶電荷相反的電極挪動的景象。荷相反的電極挪動的景象。 在一定在一定pHpH條件下，不同的蛋白質由于具條件下，不同的蛋白質由于具有不同的等電點而帶不同性質的電荷，因此有不同的等電點而帶不同性質的電荷，因此在一定的電場中它們的挪動方向和挪動速度在一定的電場中它們的挪動方向和挪動速度也

16、不同，它們的電泳遷移率不同。也不同，它們的電泳遷移率不同。V=EQ/(6r)M=V/E=Q/(6r)V V：電泳速度：電泳速度 M M：遷移率：遷移率E E：電場強度：電場強度 Q Q：顆粒帶電荷量：顆粒帶電荷量r r：球形分子半徑：球形分子半徑 ：介質粘度：介質粘度【實驗原理】【實驗原理】2. 2. 影響電泳的要素：影響電泳的要素： 內在要素：蛋白所帶凈電荷的量、蛋白內在要素：蛋白所帶凈電荷的量、蛋白的大小和外形的大小和外形 外界要素：電場強度、溶液的外界要素：電場強度、溶液的pHpH值、溶值、溶液的離子強度和電滲景象液的離子強度和電滲景象影響蛋白質分子運動速度的要素影響蛋白質分子運動速度的

17、要素 決議決議運動方向運動方向電場電場作用力作用力構成構成阻力阻力決議決議運動速率運動速率電荷性質電荷性質電荷量電荷量分子外形分子外形分子大小分子大小3.3.醋酸纖維素溶于有機溶劑如：丙酮、氯仿、氯醋酸纖維素溶于有機溶劑如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等后，涂抹成均勻的薄膜那么乙烯、乙酸乙酯等后，涂抹成均勻的薄膜那么成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的構造，厚度約為構造，厚度約為120m120m，有很強的通透性，對分，有很強的通透性，對分子挪動阻力很小。該薄膜電泳具有微量、快速、子挪動阻力很小。該薄膜電泳具有微量、快速、簡便、分辨力高，對樣品無拖

18、尾和吸附景象等優簡便、分辨力高，對樣品無拖尾和吸附景象等優點點血清蛋白參考值血清蛋白參考值等電點分子量kDa占總蛋白的百分數(%)清蛋白4.646961711球蛋白5.06200342球蛋白5.06300610球蛋白5.1290150711球蛋白6.851569509184. 4. 經醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白按電泳速度經醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白按電泳速度分為分為5 5條區帶，從正極端依次為清蛋白、條區帶，從正極端依次為清蛋白、11球蛋球蛋白、白、22球蛋白、球蛋白、球蛋白及球蛋白及球蛋白，經染色可球蛋白，經染色可計算出各蛋白質的百分含量。計算出各蛋白質的百分含量。【實驗器材】【實驗

19、器材】1. DYY-6C1. DYY-6C型型 雙穩定時電泳儀和雙穩定時電泳儀和DYY-DYY-型電泳槽型電泳槽2.2.醋酸纖維薄膜醋酸纖維薄膜2 cm2 cm8cm8cm：1 1片片/ /人。人。 3.3.培育皿：一排桌子公用培育皿：一排桌子公用5 5套，包括平衡、染色各套，包括平衡、染色各用一套，漂洗用用一套，漂洗用3 3套。套。 4.4.點樣器：載玻片。點樣器：載玻片。 5.5.濾紙：公用。濾紙：公用。 6.6.鑷子：一個鑷子：一個/ /組。組。 【實驗試劑】【實驗試劑】1 1、巴比妥、巴比妥- -巴比妥鈉緩沖液巴比妥鈉緩沖液(pH8.6(pH8.6，0.07 0.07 mol/Lmol

20、/L，離子強度，離子強度0.06)0.06)2 2、0.5% 0.5% 氨基黑氨基黑10B10B染色液染色液3 3、漂洗液、漂洗液1.1.浸泡浸泡 將將2 28 cm8 cm醋酸纖維薄膜置于電醋酸纖維薄膜置于電泳緩沖液中，浸泡泳緩沖液中，浸泡15 min15 min左右，至左右，至完全浸透，方可用于點樣。完全浸透，方可用于點樣。【實驗操作】【實驗操作】 2. 2.點樣點樣 用鑷子取出浸透的薄膜，夾在兩層粗濾紙內吸用鑷子取出浸透的薄膜，夾在兩層粗濾紙內吸干多余的緩沖液，迎光判別光面與無光澤面。用邊干多余的緩沖液，迎光判別光面與無光澤面。用邊緣整齊的玻片沾取少量無溶血血清，垂直按壓于醋緣整齊的玻片

21、沾取少量無溶血血清，垂直按壓于醋纖膜標號一端約纖膜標號一端約1.5-21.5-2處處( (約約2 23l)3l)3.3.電電 泳泳 將點樣端的薄膜平貼在陰極濾紙橋上點樣將點樣端的薄膜平貼在陰極濾紙橋上點樣面朝下，另一端平貼在陽極濾紙橋上面朝下，另一端平貼在陽極濾紙橋上( (見以下見以下圖圖) )。要求薄膜緊貼濾紙橋并繃直，中間不能下。要求薄膜緊貼濾紙橋并繃直，中間不能下垂。垂。 平衡片刻平衡片刻(2-3min)(2-3min)；使其自然充溢緩沖液；使其自然充溢緩沖液；而后電壓而后電壓120V120V，電流，電流0.40.40.6mA/0.6mA/，通電，通電4545分分鐘。鐘。 4.4.染色：

22、染色： 電泳終了后將薄膜取下電泳終了后將薄膜取下, , 放在含氨基黑放在含氨基黑10B10B染色染色液的培育皿中浸泡液的培育皿中浸泡3-5 min3-5 min5.5.漂洗：漂洗： 將薄膜從染色液中取出后移置漂洗液中漂洗數次將薄膜從染色液中取出后移置漂洗液中漂洗數次(3-4(3-4次次) )，直至條帶明晰為止，可得到色帶明晰的，直至條帶明晰為止，可得到色帶明晰的電泳圖譜電泳圖譜 。6. 6. 記錄和分析實驗結果記錄和分析實驗結果漂洗終了后將薄膜取出漂洗終了后將薄膜取出, , 放在濾紙上。將薄膜放在濾紙上。將薄膜上的上的5 5條色帶根據其顏色深淺、外形、大小及相條色帶根據其顏色深淺、外形、大小及

23、相對位置進展描畫、記錄在預習本上，并判別分對位置進展描畫、記錄在預習本上，并判別分析其結果。析其結果。【本卷須知】【本卷須知】1 1、點樣前，應將薄膜外表多余的緩沖液用濾紙吸去，吸水量以不干不濕、點樣前，應將薄膜外表多余的緩沖液用濾紙吸去，吸水量以不干不濕為宜。為宜。2 2、薄膜的浸潤與選擇正確膜面是電泳成敗的關鍵之一。、薄膜的浸潤與選擇正確膜面是電泳成敗的關鍵之一。3 3、點樣應點在薄膜的毛面上，點樣量要適量，不宜過多或過少。、點樣應點在薄膜的毛面上，點樣量要適量，不宜過多或過少。4. 4. 手盡量不要觸及薄膜，用鑷子夾取。手盡量不要觸及薄膜，用鑷子夾取。5 5、點樣時，動作要輕、穩，用力不

24、能太大，以免損壞膜、點樣時，動作要輕、穩，用力不能太大，以免損壞膜 片或印出凹陷片或印出凹陷影響電泳區帶分別效果。垂直點樣。影響電泳區帶分別效果。垂直點樣。6 6、電泳時應將薄膜的點樣端置于電泳槽的負極端，且點樣面向下。、電泳時應將薄膜的點樣端置于電泳槽的負極端，且點樣面向下。7 7、電泳開場后，不能再取放薄膜，以防觸電。如必需進展，要先封鎖電、電泳開場后，不能再取放薄膜，以防觸電。如必需進展，要先封鎖電源。源。8 8、應控制染色時間。時間長，薄膜底色不易脫去；時間太短，著色不易、應控制染色時間。時間長，薄膜底色不易脫去；時間太短，著色不易區分，或呵斥條帶染色不均勻，必要時可進展復染。區分，或

25、呵斥條帶染色不均勻，必要時可進展復染。【思索題】【思索題】電泳圖譜明晰的關鍵是什么？如何正確操作？電泳圖譜明晰的關鍵是什么？如何正確操作？本節內容目的：血紅蛋白的分別和純化本節內容目的：血紅蛋白的分別和純化獲獲 取取紅細胞紅細胞離心離心破碎紅細胞，破碎紅細胞，釋放血紅蛋白釋放血紅蛋白從各紅細胞從各紅細胞的成分中獲的成分中獲取血紅蛋白取血紅蛋白 離心離心初步純化初步純化血紅蛋白血紅蛋白透析透析背景知識背景知識早在古代，人類就已發現芳香氣味早在古代，人類就已發現芳香氣味的植株或花卉能使人神清氣爽，將這些的植株或花卉能使人神清氣爽，將這些植物制成干品后，可當做藥物和香料運植物制成干品后，可當做藥物和

26、香料運用。但是，植物香料易揮發，不易儲存。用。但是，植物香料易揮發，不易儲存。歐洲中世紀香料貿易的開展，促成了植歐洲中世紀香料貿易的開展，促成了植物芳香油提取技術的誕生。物芳香油提取技術的誕生。1616世紀，制備植物芳香油的技術世紀，制備植物芳香油的技術已相當成熟。已相當成熟。1919世紀，有機化學迅速世紀，有機化學迅速開展，人們經過分析植物芳香油的化開展，人們經過分析植物芳香油的化學成分，找到了芳香的根源，進而合學成分，找到了芳香的根源，進而合成了人造香料。如今，植物芳香油廣成了人造香料。如今，植物芳香油廣泛地運用于輕工、化裝品、飲料和食泛地運用于輕工、化裝品、飲料和食品制造的方面。品制造的

27、方面。根底知識根底知識動物：動物：植物：植物：微生物：微生物：主要來源于麝、靈貓、主要來源于麝、靈貓、海貍和抹香鯨等海貍和抹香鯨等天然香料的來源天然香料的來源根、莖、葉、花、果實、根、莖、葉、花、果實、種子種子 真菌真菌 植物芳香油的物理性質植物芳香油的物理性質: :植物芳香油的化學本質植物芳香油的化學本質: :具有很強的揮發性具有很強的揮發性主要包括萜類化合物及其衍生物主要包括萜類化合物及其衍生物植物芳香油的提取方法：植物芳香油的提取方法：植物芳香油選擇方法的根據：植物芳香油選擇方法的根據：根據植物原料的特點來決議根據植物原料的特點來決議蒸餾、蒸餾、 壓榨壓榨 、 萃取萃取提取植物芳香油的常

28、用方法：提取植物芳香油的常用方法：提取植物芳香油常用方法的原理：提取植物芳香油常用方法的原理：水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 ：水中蒸餾法、水上蒸餾法、水氣蒸餾水中蒸餾法、水上蒸餾法、水氣蒸餾法法利用水蒸氣將揮發性較強的植物芳香利用水蒸氣將揮發性較強的植物芳香油攜帶出來，構成油水混合物，冷卻后，油攜帶出來，構成油水混合物，冷卻后，油水混合物又重新分出油層和水層油水混合物又重新分出油層和水層水中蒸餾適于某些鮮花、破水中蒸餾適于某些鮮花、破碎果皮和不易粘結的原料。但水碎果皮和不易粘結的原料。但水中蒸餾精油中的酯類成分易水解，中蒸餾精油中的酯類成分易水解，所以含酯類高的香料植物不能采所以含酯類高的香料植物

29、不能采用這種方法。用這種方法。 1. 1. 水中蒸餾水中蒸餾又稱隔水蒸餾，是把原料置于蒸餾又稱隔水蒸餾，是把原料置于蒸餾鍋內的篩板上，篩板下盛放一定水量以鍋內的篩板上，篩板下盛放一定水量以滿足蒸餾操作所需的足夠的飽和蒸汽，滿足蒸餾操作所需的足夠的飽和蒸汽，水層高度以水沸騰時不濺濕原料底層為水層高度以水沸騰時不濺濕原料底層為原那么。原那么。 2. 2. 水上蒸餾水上蒸餾水上蒸餾運用較廣，大面積種植水上蒸餾運用較廣，大面積種植的芳香植物為薄荷、香茅、桉樹葉等的芳香植物為薄荷、香茅、桉樹葉等都用水上蒸餾提取精油；此法也適用都用水上蒸餾提取精油；此法也適用于粉碎后的枯燥原料包括某些干花。于粉碎后的枯燥

30、原料包括某些干花。是由外來的鍋爐蒸汽直接進展蒸餾。通是由外來的鍋爐蒸汽直接進展蒸餾。通常在篩板下鍋底部位裝有一條開小孔的環形常在篩板下鍋底部位裝有一條開小孔的環形管，鍋爐來的蒸汽經過小孔直接噴出。經過管，鍋爐來的蒸汽經過小孔直接噴出。經過篩板的篩孔進入原料層加熱原料。由鍋爐來篩板的篩孔進入原料層加熱原料。由鍋爐來的蒸汽是具有一定蒸汽壓力，溫度較高而含的蒸汽是具有一定蒸汽壓力，溫度較高而含濕量又較低的飽和蒸汽，能很快加熱料層，濕量又較低的飽和蒸汽，能很快加熱料層，因此，對干料加熱蒸餾時，干料必需在裝鍋因此，對干料加熱蒸餾時，干料必需在裝鍋前預先濕透。直接蒸汽蒸餾，其蒸餾速度快，前預先濕透。直接蒸

31、汽蒸餾，其蒸餾速度快，溫度高，可縮短蒸餾時間，高沸點的成分可溫度高，可縮短蒸餾時間，高沸點的成分可蒸出，出油率高。蒸出，出油率高。 3. 3. 直接蒸汽蒸餾直接蒸汽蒸餾 由于水中蒸餾會導致原料焦糊和由于水中蒸餾會導致原料焦糊和有效成分水解等問題有效成分水解等問題緣由：緣由：提取柑橘芳香油的方法：提取柑橘芳香油的方法：通常用壓榨法通常用壓榨法萃取法的原理：萃取法的原理：將粉碎、枯燥的植物原料用有機將粉碎、枯燥的植物原料用有機溶劑浸泡，使芳香油溶解在有機溶劑溶劑浸泡，使芳香油溶解在有機溶劑中的方法。芳香油溶解于有機溶劑后，中的方法。芳香油溶解于有機溶劑后，只需蒸發出有機溶劑，就可以獲得純只需蒸發出

32、有機溶劑，就可以獲得純真的植物芳香油了。真的植物芳香油了。比較工程比較工程實驗原理實驗原理方法步驟方法步驟適用范圍適用范圍水蒸氣水蒸氣蒸餾法蒸餾法萃取法萃取法壓榨法壓榨法利用水蒸氣將揮利用水蒸氣將揮發性較強的植物發性較強的植物芳香油攜帶出來芳香油攜帶出來使芳香油溶解在使芳香油溶解在有機溶劑中，蒸有機溶劑中，蒸發后得到芳香油發后得到芳香油經過機械加壓，經過機械加壓，壓榨出果皮中壓榨出果皮中的芳香油的芳香油水蒸汽蒸餾水蒸汽蒸餾分別油層分別油層除水過濾除水過濾粉碎、枯燥粉碎、枯燥萃取、過濾萃取、過濾濃縮濃縮石灰水浸泡、石灰水浸泡、漂洗漂洗壓榨過濾靜置壓榨過濾靜置再次過濾再次過濾提取玫瑰油、提取玫瑰油

33、、薄荷油等揮發薄荷油等揮發性強的芳香油性強的芳香油原料顆粒盡能原料顆粒盡能夠細小，能充夠細小，能充分浸泡在有機分浸泡在有機溶劑中溶劑中適用于柑橘、適用于柑橘、檸檬等易焦糊檸檬等易焦糊原料的提取原料的提取植物芳香油提取三種方法的比較植物芳香油提取三種方法的比較1 1、提取方法：、提取方法： 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法一、玫瑰精油的提取：一、玫瑰精油的提取：實驗設計實驗設計2 2、實驗設計玫瑰精油的提取安裝：、實驗設計玫瑰精油的提取安裝：3 3、實驗步驟：、實驗步驟：采集玫瑰花：采集盛花期采集玫瑰花：采集盛花期5 5月上中旬月上中旬 的玫瑰花，清水清洗瀝干。的玫瑰花，清水清洗瀝干。裝入蒸餾原料：稱取

34、裝入蒸餾原料：稱取50g50g玫瑰花放入蒸玫瑰花放入蒸餾瓶，添加餾瓶，添加200mL200mL蒸餾水。蒸餾水。 安裝蒸餾安裝：一切儀器必需事先安裝蒸餾安裝：一切儀器必需事先枯燥，保證無水。枯燥，保證無水。加熱蒸餾加熱蒸餾裝配蒸餾安裝：裝配蒸餾安裝：分別油層：分別油層： 蒸餾終了，應先撤出熱源，然后停蒸餾終了，應先撤出熱源，然后停頓通水，最后裝配蒸餾安裝，裝配的順序與安裝時頓通水，最后裝配蒸餾安裝，裝配的順序與安裝時相反。相反。 搜集錐形瓶中的乳濁液，向錐形瓶中搜集錐形瓶中的乳濁液，向錐形瓶中參與質量濃度為參與質量濃度為0.1 g0.1 gmLmL的的NaClNaCl，然后將其倒入分，然后將其倒

35、入分液漏斗中，用分液漏斗將油層和水完全分開。放出液漏斗中，用分液漏斗將油層和水完全分開。放出玫瑰精油，用接納瓶搜集。玫瑰精油，用接納瓶搜集。除去水分：除去水分： 向接納瓶參與無水向接納瓶參與無水Na2S04Na2S04，24h24h后過濾，得到玫瑰油。后過濾，得到玫瑰油。本卷須知：蒸餾時間不能過短，溫度不能過高。本卷須知：蒸餾時間不能過短，溫度不能過高。鮮玫瑰花鮮玫瑰花+ +清水清水水蒸氣蒸水蒸氣蒸餾餾油水混合物油水混合物油水分別油水分別除水除水玫瑰油玫瑰油加無水加無水Na2SO4Na2SO4加加NaClNaCl氯化鈉：促使油水混合物乳濁液中油和水氯化鈉：促使油水混合物乳濁液中油和水 的分別。的分別。無水硫酸鈉：吸收油層中的水