1、肝外膽管癌中p73蛋白的表達(dá)及與p53蛋白的相關(guān)性 作者：張智勇，竇科峰，劉正才 【關(guān)鍵詞】 免疫組織化學(xué), 關(guān)鍵詞: 蛋白質(zhì)p73，蛋白質(zhì)p53;膽管癌;免疫組織化學(xué) 摘 要:目的 探討基因p73和p53在肝外膽管癌（ECHC）中的表達(dá)情況、相互關(guān)系及其臨床病理意義. 方法 采用免疫組織化學(xué)（SABC法）對(duì)41例肝外膽管癌及10例膽總管囊腫病例p73和p53表達(dá)進(jìn)行研究. 結(jié)果 p73基因陽性表達(dá)率為41%（17/41），p53基因陽性表達(dá)率為34%（14/41），14例中10例p73表達(dá)亦為陽性，其余27例中未發(fā)現(xiàn)p53基因突變，但其中7例表達(dá)p73.膽總管囊腫均為陰性.經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析p73

2、的表達(dá)與ECHC的臨床病理分級(jí)、分期無關(guān)（P>0.05）;而p73和p53表達(dá)顯著相關(guān)（r=0.52，P<0.05）. 結(jié)論 p73，p53基因在肝外膽管癌的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，二者的表達(dá)有一定的相關(guān)性. Keywords:protein p73;protein p53;cholangiocarcinoma;immunohistochemistry Abstract:AIM To study p73and p53gene expressions in extrahepatic cholangiocarcinoma（ECHC）and their clinico-

3、pathological significance.METHODS Immunohistochemical method（SABC）was used to detect the p73and p53gene ex-pressions in41cases of ECHC and10cases of choledo2 / 10chocyst.RESULTS Positive rates of p73and p53gene were41%（17/41），34%（14/41）resepectively.10of the14caseswere also stained positive for p73.

4、In contrast，in the rest of the patients（27）without any detectable p53mutation，7ex-hibited p73immunostaining.Neither p73nor p53was detect-ed in choledochocyst.There was no significant difference in expression of p73between tumor grade and heson stage.But expression of p73was significantly correlated

5、to that of p53（r=0.52，P<0.05）.CONCLUSION Both p73and p53genes play an important role in the development of ECHC.The expressions of p73and p53in ECHC are significantly correlated. 0 引言 肝外膽管癌（extrahepatic cholangiocarcinoma，ECHC）不很常見，惡性度很高，療效很差.p73基因是近年發(fā)現(xiàn)的p53家族的新成員，我們檢測(cè)了ECHC中p73和p53基因的表達(dá)，探討ECHC

6、中二者間的關(guān)系及其臨床病理意義. 1 材料和方法 1.1 材料 ECHC41例和膽總管囊腫標(biāo)本10例均取自西京醫(yī)院病理科手術(shù)標(biāo)本.HE染色復(fù)查診斷并按WHO病理學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和Heson分期標(biāo)準(zhǔn):高分化癌20例，中分化癌14例，低分化癌7例.其中期18例，期13例，期8例，期2例.羊抗人p73多克隆抗體，Santa Cruz公司出品.鼠抗人p53mAb，Sigma公司產(chǎn)品.SABC免疫組化試劑盒為武漢博士德公司產(chǎn)品.DAB為Sigma公司產(chǎn)品. 1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)40g・L-1 甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，均作4m連續(xù)切片.按SABC免疫組化染色步驟進(jìn)行，其間行3mol&

7、;#12539;L-1 尿素溶液消化30min，0.01moL・L-1 枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）中微波修復(fù)抗原15min，一抗150稀釋，4過夜.顯色后蘇木精襯染，設(shè)空白對(duì)照，PBS代替一抗的陰性對(duì)照，及已知的陽性對(duì)照.結(jié)果判斷:細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性.按陽性細(xì)胞所占的比例及顯色深度分為:陽性細(xì)胞>50%，顯色深，顆粒粗;:陽性細(xì)胞數(shù)30%50%，顯色較深;+:陽性細(xì)胞數(shù)<30%，顯色淺，顆粒細(xì).細(xì)胞質(zhì)、核未見染色為陰性. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:2 檢驗(yàn)和非參數(shù)相關(guān)性分析（Nosa統(tǒng)計(jì)軟件包處理）. 2 結(jié)果 2.1 p73基因的表達(dá) 陽性

8、物質(zhì)位于胞核中，色棕黃，顆粒細(xì)，分布均勻.強(qiáng)表達(dá)顆粒粗，陽性率41%，胞質(zhì)偶見染色（Fig1）.在整個(gè)腫瘤中，著色強(qiáng)度是均勻的未出現(xiàn)局限的強(qiáng)表達(dá)，在膽總管囊腫中未見陽性表達(dá)，二者相比具有顯著性差別（P<0.05）.未發(fā)現(xiàn)p73的表達(dá)與其他組織病理參數(shù)有關(guān)，與腫瘤的大小、細(xì)胞分化程度及腫瘤分期均無關(guān)（Tab1）. 圖1 略 2.2 p53基因的表達(dá) p53陽性物質(zhì)位于胞核中，色棕黃，顆粒細(xì)，分布均勻（Fig1），陽性率34%.同樣在膽總管囊腫中未見陽性表達(dá)，二者相比具有顯著差別（P<0.05）.p53的表達(dá)與細(xì)胞分化程度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），高分化E

9、CHC陽性率為15%（3/20），中分化為50%（7/14），低分化為57%（4/7）.沒有發(fā)現(xiàn)和其他組織病理參數(shù)有關(guān). 2.3 p73與p53的相互關(guān)系 我們對(duì)p73免疫組化染色的標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行了p53的染色，41例ECHC標(biāo) 本中p73陽性率為41%，p53陽性率為34%，其中有10例共同表達(dá)，經(jīng)2×2交叉分類資料檢驗(yàn)及非參數(shù)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，p73和p53在ECHC中的表達(dá)呈相關(guān)（r=0.52，P<0.05）. 表1 p73表達(dá)與ECHC臨床病理特征的關(guān)系略 3 討論 p73基因與腫瘤發(fā)生關(guān)系密切1，2 .在膽管癌的研究方面報(bào)道甚少.我們發(fā)現(xiàn)部分腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)

10、及部分胞質(zhì)中均可見表達(dá)p73蛋白.細(xì)胞核表達(dá)表明p73蛋白作為核內(nèi)蛋白可以參與腫瘤細(xì)胞核內(nèi)基因調(diào)控過程，而細(xì)胞質(zhì)表達(dá)則提示p73蛋白在細(xì)胞質(zhì)核蛋白體合成.在肝外膽管癌中，p73的表達(dá)率為41%，而在良性的膽總管腫瘤中未見表達(dá)，二者具有顯著差異（P<0.05），而p73基因的表達(dá)與ECHC的臨床病理特征未見相關(guān)性（P>0.05）p73基因在人類ECHC的發(fā)生、發(fā)展中有較為重要的作用.但具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究3，4 . p53作為公認(rèn)的腫瘤抑制基因，在很多腫瘤均有異常表達(dá)5-7 ，我們發(fā)現(xiàn)在ECHE中，p53的表達(dá)率為34%，而在良性膽總管腫瘤中未見表達(dá)，二者之間

11、具有顯著差異（P<0.05）.而在不同的病理分級(jí)中p53表達(dá)具有顯著性差異（P<0.05），腫瘤惡性程度越高p53表達(dá)越低，反之亦然.在本組41例腫瘤的研究中，p73與p53基因同時(shí)表達(dá)10例，共同表達(dá)缺失21例，經(jīng)配對(duì) 檢驗(yàn)及非參數(shù)相關(guān)性分析表明（r=0.52，P<0.05），表明p73和p53的表達(dá)具有相關(guān)性. 參考文獻(xiàn): 1Ichimiya S，Nakagawara A，Sakuma Y，Kimura S，Ikeda T，Satoh M，Takahashi M，Sato N，Mori M.P73:structure and function J.

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