1、分子生物學平臺上的食品微生物快速檢測及鑒定技術在分子生物學技術上引領前行在分子生物學技術上引領前行212/14/2021Life Technologies Profile美國生命技術公司營業收入$3.2B產品種類50,000國家160員工數量9,600客戶數量75,000專利許可3,600Note: LTM revenue as of September 30, 2009; does not include Mass Spec JV revenue3臨臨床床分子診斷基因治療藥物再生醫學工工業業生物制藥法醫食品安全動物健康科研科研PCR技術測序技術細胞(分離, 操作，分析)“Tools Prov

2、ider” 提供工具“Solutions Provider”提供解決方案Applied Biosystems 分子生物學技術的領導者分子生物學技術的領導者 超過超過2525年的分子生物學產品開發歷程年的分子生物學產品開發歷程 19821982年年, , 全球第一臺蛋白質測序儀；全球第一臺蛋白質測序儀；19861986年，全球第一臺核酸測序儀年，全球第一臺核酸測序儀 19861986年，全球第一個實時熒光定量技術和年，全球第一個實時熒光定量技術和TaqManTaqMan技術技術 全球全球30,00030,000 個實驗室的個實驗室的220,000 220,000 儀器正在被使用儀器正在被使用41

3、2/14/2021Life Technology 食品微生物系統解決方案樣品前處理Dynabead磁珠富集MagMAX Express核酸自動提取快速檢測RapidFinder常規qPCR檢測超高通量的篩查OpenArray芯片芯片鑒定與分型MicroSEQ ID 基因分析靈活的組合方案，滿足不同層次的應用需求512/14/2021病原微生物樣品制備PrepSEQPrepSEQ 快速離心核酸提取試劑盒快速離心核酸提取試劑盒 AB專利的離心柱材料 較化學法，更加有效去除PCR抑制劑 步驟少、操作簡單 可處理多達750uL的樣品 無需額外的設備適合少量適合少量樣樣品品采用采用PrepSEQPrep

4、SEQ快速離心試劑盒，結果明顯優于普通直接裂解；尤其對于存在快速離心試劑盒，結果明顯優于普通直接裂解；尤其對于存在PCRPCR抑制劑的樣品，抑制劑的樣品，普通裂解法可能無法檢出，普通裂解法可能無法檢出， 而而PrepSEQPrepSEQ快速離心法可以得到一致的結果快速離心法可以得到一致的結果樣品：巧克力檢測項目：沙門氏菌樣品：布里奶酪檢測項目：李斯特菌*標注的是因PCR抑制劑的存在導致樣品中待測菌無法檢出612/14/2021SamplePCR compatibleNA solutionLysisMagnetic Particles +BindingSolutionWash2XMagnetic

5、SeparationMagneticSeparationElutionMME-96 核酸提取核酸提取儀儀 自動化 高通量自自動動化的理想化的理想選擇選擇PrepSEQ 核酸提取核酸提取試劑試劑盒盒 提高核酸回收率 有效去除抑制劑 食品，環境及臨床樣品病原微生物樣品制備+自自動動化的核酸提取流程，一次最多化的核酸提取流程，一次最多處處理理96個個樣樣品品712/14/2021樣品制備軟件 RapidFinder Express 軟軟件件PrepSEQ RapidSpin樣樣品制品制備備系系統統檢測試劑MicroSEQ 食品致病菌食品致病菌檢測試劑檢測試劑盒盒儀器7500 快速快速實時熒實時熒光定

6、量光定量PCR儀儀器器PrepSEQ NA Extraction 樣樣品制品制備備系系統統食品致病菌檢測解決方案食品致病菌檢測解決方案812/14/2021食品及環境病原微生物檢測致病菌系列致病菌系列沙門氏菌 （AOAC certificated）單增李斯特菌（AOAC certificated）李斯特菌屬 （AOAC certificated）大腸桿菌O157:H7 （AOAC certificated）阪崎腸桿菌空腸彎曲桿菌銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌彎曲桿菌多重檢測：空腸/大腸/紅嘴鷗金黃色葡萄球菌創傷、霍亂和副溶血性弧菌的多重檢測定制設計環環境和生物安全系列境和生物安全系列軍團菌屬定量檢

7、測試劑盒嗜肺軍團菌定量檢測試劑盒土拉弗朗西斯菌檢測試劑盒炭疽芽孢桿菌檢測試劑盒布魯氏菌屬檢測試劑盒鼠疫耶爾森菌檢測試劑盒912/14/2021最新O157:H7檢測試劑盒：提升特異性 引物、探針設計：基于 SOLiD 測序技術分析結果 新的設計，針對O157:H7特有的序列，避免O55:H7被測出- 雙重目標基因設計，提高特異性- 將O55 全基因組測序，并與 O157相比較ORFs(both strands)GC content per 1000 bpO157:H7 (EDL933) reference sequenceO157:H7 SOLiDcoverageO55:H7 SOLiDcov

8、erageO157:H7 unique sequences1012/14/2021 TaqMan 實驗數據驗證：包括低濃度的O157:H7/HM 不同菌株包括對非O157:H7的大腸桿菌菌株的檢測不含O157的真實牛肉樣品Strain IDSerotypeAssay CtPE30O157:H736.21+PE677O157:H731.16+PE678O157:H731.61+PE679O157:H733.97+PE700O157:H736.46+PE701O157:H733.7+PE702O157:H735.66+PE703O157:H736.57+PE40O157:NM31.4+PE674O

9、55:H7Undetermined -PE704O55:H7Undetermined -PE705O55:H7Undetermined -PE706O55:H7Undetermined -PE31O26:H11Undetermined -PE37O145:NMUndetermined -PE38O78:K80:H12 Undetermined -PE39O103:H2Undetermined -PE673O5:NMUndetermined -PE684O137:H41Undetermined -PE687O18:H21Undetermined -PE688O28:H35Undetermined

10、 -PE731O26:H32Undetermined -PE735O55:H9Undetermined -PE826O154:H25Undetermined -PE827O156:H8Undetermined -Beef (17 samples)n/aUndetermined -最新O157:H7檢測試劑盒：提升特異性1112/14/2021O157:H7檢測試劑盒：8小時內獲得結果6小時小時 BHI增菌增菌60分鐘分鐘 DNA 提取提取40分鐘分鐘PCR25g 牛肉手工操作手工操作時間時間 1小小時時10 分分鐘鐘10 分分鐘鐘整個流程整個流程 8小小時時MicroSEQ 大大腸腸桿菌桿菌

11、O157:H7 工作流程工作流程10分鐘樣品分鐘樣品制備設置制備設置10 分分鐘鐘10分鐘分鐘 PCR 設置設置市市場場上最快的上最快的檢測檢測方法方法已已經獲經獲得得 AOAC 及及 AFNOR 的的認認可可1212/14/2021MicroSEQ 沙門氏菌檢測操作流程 快速獲得結果，最少的手工操作時間 MLST片段分析片段分析 AFLP MLVA 微生物耐微生物耐藥藥機理的研究機理的研究SNaPshot MultiplexSSCP3112/14/2021遺傳分析儀在MLVA研究中的應用多重多重 PCRPCR 選擇正確的擴增引物是取得成功的關選擇正確的擴增引物是取得成功的關鍵鍵 16 16

12、個甚至更多的個甚至更多的 STR STR 位點同時被擴位點同時被擴增增7 repeats8 repeatsSTR STR 位點位點 由特定引物延伸的旁側序列具有保守由特定引物延伸的旁側序列具有保守性性 不同菌株的串聯重復序列拷貝數存在不同菌株的串聯重復序列拷貝數存在差異差異AMELD3TH01TPOXPenta DPenta EFGAD21D18CSFD16D7D13D5VWAD8由遺傳分析儀電泳分離由遺傳分析儀電泳分離PCRPCR擴增產物擴增產物/ /片段片段 結合不同的熒光染料標記和遷移率的修飾結合不同的熒光染料標記和遷移率的修飾技術，實現多重分析技術，實現多重分析3212/14/2021

13、STEC O157/ Salmonella Typhimurium ProtocolMLVA 是食源性微生物分型國際組織是食源性微生物分型國際組織Pulsenet推薦的食品微生物分型方法，推薦的食品微生物分型方法，中國中國CDC及各省級及各省級CDC均設立相關機構參與其中均設立相關機構參與其中. 3312/14/2021大腸桿菌7個位點的 MLVA， 實現對O157:H7 的分型Lindstedt, et al. (2003) Ann. Clin. Microbiol. Antimicr., 2, 12.Seven locus MLVA scheme in a single dye chann

14、elIdentified 47 distinct MLVA patterns among 73 O157:H7 strainsSequence alignment of the Vhec4 VNTR loci from isolates G5300 and IHE5344. The results from the sequencing show that the electrophoretic mobility shift between isolates IHE5344 (upper strand) and G5300 (lower strand) is caused by differe

15、nt numbers of AAATAG repeat units alone Escherichia coli O157 MLVA Fragment patterns generated from seven VNTR loci showing two identical and one different profile. Comparison of the MLVA profiles of three O157:H7 STEC cattle isolates. These isolates were all identical by previous XbaI PFGE and AFLP

16、 typing. The MLVA assay confirmed that isolates 126/97 (upper panel) and 131/97 (middlepanel) were identical, but displayed a clearly distinct profile for isolate 127/97 (lower panel).3412/14/2021Applied Biosystems 遺傳分析儀在食品工業的應用 微生物快速鑒定微生物快速鑒定-技術技術:測序技術測序技術+數據庫數據庫-用途用途:食品污染檢測及分析食品污染檢測及分析轉基因食品判定轉基因食品判定-技術技術:測序技術測序技術-用途用途:準確鑒別、最終判定準確鑒