1、    不同炮制方法對(duì)牡丹皮多糖和總黃酮含量的影響    沈莉+石秋霞+高曉忠+吳春雷+周玉波摘要：為了比較不同炮制方法對(duì)牡丹皮多糖和總黃酮含量的影響，本研究以牡丹皮生品、酒制品、炒黃制品、炒焦制品和炒炭制品為材料，分別測(cè)定了它們多糖和總黃酮的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牡丹皮生品多糖含量為9.31%，酒制品為10.86%，炒黃制品為10.62%，炒焦制品為9.96%，炒炭制品為8.78%；牡丹皮生品總黃酮含量為1.86%，酒制品為2.07%，炒黃制品為1.98%，炒焦制品為1.93%，炒炭制品為1.77%。牡丹皮經(jīng)過(guò)炮制后多糖和總黃酮的含量均發(fā)生變化，以酒制品中的

2、含量為最高。關(guān)鍵詞：牡丹皮；炮制；多糖；總黃酮：r284.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：a ：1002-1302（2014）11-0324-03牡丹皮為毛茛科芍藥屬植物牡丹（paeoniasuffruticosa）的干燥根皮，性微寒，味苦、辛，歸肝、心、腎經(jīng)，是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥之一。其功效為清熱涼血、活血化瘀等，主要用于熱入營(yíng)血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血、夜熱早涼、無(wú)汗骨蒸、經(jīng)閉痛經(jīng)、癰腫瘡毒等1-2。歷史上牡丹皮的炮制方法很多，主要有酒制、炒制、煮制、制炭等。生品長(zhǎng)于清熱涼血、活血化瘀，丹皮制炭后凝血作用增強(qiáng)，有涼血止血的作用3，用于吐血、衄血。目前臨床中最常用的是牡丹皮生品，“清炒”“酒炒”“炒炭”僅有少部分地區(qū)

3、沿用，研究也多集中于生品，而對(duì)其炮制品的研究較少4-5。本試驗(yàn)通過(guò)比較牡丹皮及其不同炮制品中多糖和總黃酮的含量，為深入研究牡丹皮成分提供數(shù)據(jù)支持。1材料1.1儀器fz102粉粹機(jī)（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；mettleral204型分析天平梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；80-2臺(tái)式低速離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）；hp8453型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（惠普公司）。1.2試劑與試藥牡丹皮產(chǎn)地為安徽，購(gòu)自浙江震元醫(yī)藥連鎖有限公司，經(jīng)鑒定為毛茛科芍藥屬植物牡丹p.suffruticosa的干燥根皮。蕓香苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100080-200707），d-無(wú)水葡萄糖（中國(guó)食品藥品檢定研

4、究院，批號(hào)：110833-200904），濃硫酸、乙醇、重蒸苯酚、氫氧化鈉、氯化鋁、亞硝酸鈉等試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1樣品的制備牡丹皮生品：取牡丹皮20g，純凈水洗3次后，晾干備用。牡丹皮酒制：取牡丹皮，照生品清洗法處理后晾干，每500g牡丹皮加黃酒60g，拌勻后悶透，放鍋內(nèi)用文火加熱炒干，取出放涼。牡丹皮炒黃：取牡丹皮，照生品清洗法處理后晾干，用文火微炒，取出放涼備用。牡丹皮炒焦：取牡丹皮，照生品清洗法處理，晾干，用文火炒至微焦，取出放涼備用。牡丹皮炒炭：取牡丹皮，照生品清洗法處理后晾干，用中火加熱炒至焦炭色，取出放涼。2.2牡丹皮多糖含量測(cè)定2.2.1牡丹皮精制多糖的制備稱取牡丹皮

5、生品粉末30g，加入80%乙醇（10倍量）后在90水浴中回流3次（2h/次），抽濾后取藥渣揮盡乙醇，再加水（10倍量）回流提取3次（2h/次），趁熱抽濾，合并濾液，減壓濃縮后，加95%乙醇至醇含量達(dá)80%，置4冰箱中靜置12h，充分沉淀后過(guò)濾，干燥后得到粗多糖。粗多糖水復(fù)溶后，用servage（三氯甲烷-正丁醇，41）法進(jìn)行除蛋白操作6，反復(fù)多次后用考馬斯亮藍(lán)法檢驗(yàn)至無(wú)蛋白7。取上清液，加入乙醇，使溶液中醇濃度達(dá)到80%，4靜置過(guò)夜后離心，沉淀用熱水復(fù)溶后抽濾，濾液再重復(fù)1次醇沉淀操作，離心后的沉淀分別用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，烘干至恒重，得到精制的牡丹皮多糖。2.2.2供試品溶液的制備取牡

6、丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入80%乙醇50ml于90水浴中回流2次，每次2h，過(guò)濾后取濾渣揮盡乙醇，再加50ml水回流提取3次，每次2h，抽濾后合并濾液，濃縮后轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容即得。2.2.3對(duì)照品溶液的制備取無(wú)水葡萄糖（干燥至恒重）0.0499g于50ml容量瓶中，加水溶解后定容，得濃度為0.998mg/ml的葡萄糖對(duì)照品溶液。2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別量取葡萄糖對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于50ml容量瓶中，加水至刻度。量取上述各標(biāo)準(zhǔn)液1.0ml于20ml具塞試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，搖勻后再加入5.0ml濃硫酸，蓋上試管塞，搖勻

7、后置沸水浴中加熱反應(yīng)30min，取出后放置冰水浴中冷卻至室溫。以相應(yīng)試劑作空白參比，在488nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度d。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程y=8.079x-0.0514（r=0.9995），表明葡萄糖濃度在0.019960.09980mg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。2.2.5換算因子的測(cè)定取牡丹皮精制多糖0.0155g于50ml量瓶中，加水溶解后定容，得濃度為0.31mg/ml的牡丹皮精制多糖溶液。精確量取上述多糖溶液1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，通過(guò)回歸方程求出精制多糖溶液中的葡萄糖濃度，并計(jì)算其

8、中含量。按下式計(jì)算換算因子：f=w/（c×d），式中w為多糖質(zhì)量（mg），c為多糖中葡萄糖濃度（mg/ml），d為稀釋倍數(shù)。測(cè)得換算因子f=3.58（n=6）。2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試液1.0ml，置10ml量瓶中加水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔15min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定2h，結(jié)果吸光度值的rsd為1.71%，表明供試液室溫下2h內(nèi)穩(wěn)定性良好。endprint2.2.7精密度試驗(yàn)精確吸取濃度為0.03992mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0ml，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定，平行測(cè)定6份，rsd為2.61%，表明儀器具有

9、良好的精密度。2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次的牡丹皮生品6份，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0ml，置10ml量瓶中加水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，rsd為2.17%，表明本試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取牡丹皮生品6份各0.5g，分別加入葡萄糖對(duì)照品10mg，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0ml于10ml量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算后得葡萄糖平均回收率為100.73%，rsd為2.80%（n=6），見(jiàn)表1。2.2.10樣

10、品含量測(cè)定精確量取“2.2.2”節(jié)下牡丹皮及其炮制品供試液各1.0ml于10ml量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定吸光度，通過(guò)上述回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖濃度，再按下列公式計(jì)算供試品中多糖的含量：含量=（c×d×f/w）×100%，其中c為供試液中葡萄糖的濃度，d為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，w為供試品干品質(zhì)量。得到的結(jié)果見(jiàn)表2。2.3牡丹皮總黃酮含量測(cè)定2.3.1供試品溶液的制備取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入50ml的75%乙醇加熱回流提取3次（2h/次），過(guò)濾，將濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，用同體積乙

11、醚萃取除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇定容至50ml，得到總黃酮樣品溶液。2.3.2對(duì)照品溶液的制備取蕓香苷對(duì)照品0.0252g，用60%乙醇溶解，再定容至50ml即得。2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置10ml容量瓶中，依次加入0.3ml的5%亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置6min；然后加0.3ml的10%氯化鋁溶液搖勻后放置6min，再加4ml的4%氫氧化鈉溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置15min后，以相應(yīng)試劑作空白參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蕓香苷濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y

12、=9.846x-0.010（r=0.9997），表明蕓香苷濃度在0.02520.1260mg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)精確量取供試液1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定1h，結(jié)果rsd為2.56%，表明供試液室溫下1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.3.5精密度試驗(yàn)取蕓香苷對(duì)照品溶液2.0ml于10ml容量瓶中，按“2.3.3”節(jié)操作平行測(cè)定6份，rsd為1.97%，表明儀器具有良好的精密度。2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次牡丹皮生品6份，按“2.3.1”節(jié)方法制備供試液，精確量取1.0ml于10ml容量瓶中，按

13、照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，rsd為2.38%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。2.3.7加樣回收率試驗(yàn)取6份牡丹皮生品，每份1.0g，分別加入蕓香苷對(duì)照品20mg，按照“2.3.1”節(jié)操作制備供試液，量取1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，計(jì)算蕓香苷平均回收率為99.61%，rsd為2.70%（n=6），見(jiàn)表3。2.3.8樣品含量測(cè)定精確量取“2.3.1”節(jié)中牡丹皮及其炮制品供試液各1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，再依據(jù)回歸方程求出供試品中總黃酮的濃度，結(jié)果見(jiàn)表4。3討論長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)牡丹皮的研究較多集中于酚及酚苷類、單萜及苷類等活性物質(zhì)，而對(duì)于丹皮多

14、糖的研究很少。然而丹皮多糖有明顯的降血糖、保護(hù)腎臟及提高免疫等功效，是頗具發(fā)展前景的一種天然活性物質(zhì)8-9。本研究通過(guò)計(jì)算葡萄糖和牡丹皮精制多糖之間的換算因子，并以此校正多糖含量的方法，測(cè)定了牡丹皮及其炮制品中多糖的含量，多糖含量按酒制品、炒黃制品、炒焦制品、生品、炒炭制品次序依次降低。近年來(lái)研究人員從牡丹皮中分離得到黃酮類化合物10，其中兒茶素、槲皮素、山柰素是清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼、o-2kg-*2·自由基，抑制酪氨酸酶、高級(jí)糖化物終產(chǎn)物（ages）產(chǎn)生的主要活性物質(zhì)11。試驗(yàn)表明，牡丹皮及其不同炮制品中黃酮的含量差異較大，從高到底依次為：酒制品>生品>炒

15、炭制品>炒焦制品>炒黃制品。由此可見(jiàn)，牡丹皮除酒制品外，其他方法炮制后的總黃酮含量均有降低。通過(guò)本試驗(yàn)研究可為牡丹皮的炮制研究提供參考，同時(shí)也為牡丹皮的綜合應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。參考文獻(xiàn)：1國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部m.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：160.2張虹，丁安偉，張麗.中藥牡丹皮的研究進(jìn)展j.江蘇中醫(yī)藥，2007，39（9）：75-77.3赫炎，王祝舉，唐力英.牡丹皮炮制歷史沿革研究j.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（11）：67-68.4丘志春，孫冬梅，張誠(chéng)光.不同炮制方法對(duì)牡丹皮中丹皮酚及芍藥苷含量的影響j.醫(yī)學(xué)研究雜志，2009，38（4）：13

16、1-133.5趙學(xué)龍，丁安偉，張麗，等.牡丹皮炮制歷史沿革的研究j.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（9）：1907-1910.6屠婕紅，黃佳.瓜蔞皮中水溶性多糖的提取及含量測(cè)定j.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（2）：281-282.7王文平，郭祀遠(yuǎn)，李琳，等.考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定野木瓜多糖中蛋白質(zhì)的含量j.食品研究與開發(fā)，2008，29（1）：115-117.8彭代銀，韓嵐，張叢芬，等.丹皮多糖一般藥理學(xué)研究j.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24（2）：30-32.9劉吉成，牛英才.多糖藥物學(xué)m.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.10丁安偉，張麗，趙學(xué)龍，等.不同炮制工藝丹皮炭中黃酮類成分的動(dòng)態(tài)變化j

17、.中國(guó)中藥雜志，2009，34（8）：965-968.11dinghy，linhc，changts.tyrosinaseinhibitorsisolatedfromtherootsofpaeoniasuffruticosaj.journalofcosmeticscience，2009，60（3）：347-352.endprint2.2.7精密度試驗(yàn)精確吸取濃度為0.03992mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0ml，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定，平行測(cè)定6份，rsd為2.61%，表明儀器具有良好的精密度。2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次的牡丹皮生品6份，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取

18、1.0ml，置10ml量瓶中加水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光度，rsd為2.17%，表明本試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取牡丹皮生品6份各0.5g，分別加入葡萄糖對(duì)照品10mg，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0ml于10ml量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算后得葡萄糖平均回收率為100.73%，rsd為2.80%（n=6），見(jiàn)表1。2.2.10樣品含量測(cè)定精確量取“2.2.2”節(jié)下牡丹皮及其炮制品供試液各1.0ml于10ml量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后

19、取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定吸光度，通過(guò)上述回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖濃度，再按下列公式計(jì)算供試品中多糖的含量：含量=（c×d×f/w）×100%，其中c為供試液中葡萄糖的濃度，d為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，w為供試品干品質(zhì)量。得到的結(jié)果見(jiàn)表2。2.3牡丹皮總黃酮含量測(cè)定2.3.1供試品溶液的制備取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入50ml的75%乙醇加熱回流提取3次（2h/次），過(guò)濾，將濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，用同體積乙醚萃取除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇定容至50ml，得到總黃酮樣品溶液。2.3.2對(duì)照品溶液的制備取蕓

20、香苷對(duì)照品0.0252g，用60%乙醇溶解，再定容至50ml即得。2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置10ml容量瓶中，依次加入0.3ml的5%亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置6min；然后加0.3ml的10%氯化鋁溶液搖勻后放置6min，再加4ml的4%氫氧化鈉溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置15min后，以相應(yīng)試劑作空白參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蕓香苷濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y=9.846x-0.010（r=0.9997），表明蕓香苷濃度在0.02520.1260mg/ml范圍內(nèi)與吸

21、光度呈良好線性關(guān)系。2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)精確量取供試液1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作，測(cè)定吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定1h，結(jié)果rsd為2.56%，表明供試液室溫下1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.3.5精密度試驗(yàn)取蕓香苷對(duì)照品溶液2.0ml于10ml容量瓶中，按“2.3.3”節(jié)操作平行測(cè)定6份，rsd為1.97%，表明儀器具有良好的精密度。2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次牡丹皮生品6份，按“2.3.1”節(jié)方法制備供試液，精確量取1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，rsd為2.38%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。2.3.7加樣回收率試驗(yàn)取6份牡丹皮生

22、品，每份1.0g，分別加入蕓香苷對(duì)照品20mg，按照“2.3.1”節(jié)操作制備供試液，量取1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，計(jì)算蕓香苷平均回收率為99.61%，rsd為2.70%（n=6），見(jiàn)表3。2.3.8樣品含量測(cè)定精確量取“2.3.1”節(jié)中牡丹皮及其炮制品供試液各1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，再依據(jù)回歸方程求出供試品中總黃酮的濃度，結(jié)果見(jiàn)表4。3討論長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)牡丹皮的研究較多集中于酚及酚苷類、單萜及苷類等活性物質(zhì)，而對(duì)于丹皮多糖的研究很少。然而丹皮多糖有明顯的降血糖、保護(hù)腎臟及提高免疫等功效，是頗具發(fā)展前景的一種天然活性物質(zhì)8-9。

23、本研究通過(guò)計(jì)算葡萄糖和牡丹皮精制多糖之間的換算因子，并以此校正多糖含量的方法，測(cè)定了牡丹皮及其炮制品中多糖的含量，多糖含量按酒制品、炒黃制品、炒焦制品、生品、炒炭制品次序依次降低。近年來(lái)研究人員從牡丹皮中分離得到黃酮類化合物10，其中兒茶素、槲皮素、山柰素是清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼、o-2kg-*2·自由基，抑制酪氨酸酶、高級(jí)糖化物終產(chǎn)物（ages）產(chǎn)生的主要活性物質(zhì)11。試驗(yàn)表明，牡丹皮及其不同炮制品中黃酮的含量差異較大，從高到底依次為：酒制品>生品>炒炭制品>炒焦制品>炒黃制品。由此可見(jiàn)，牡丹皮除酒制品外，其他方法炮制后的總黃酮含量均有降低。通過(guò)

24、本試驗(yàn)研究可為牡丹皮的炮制研究提供參考，同時(shí)也為牡丹皮的綜合應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。參考文獻(xiàn)：1國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部m.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：160.2張虹，丁安偉，張麗.中藥牡丹皮的研究進(jìn)展j.江蘇中醫(yī)藥，2007，39（9）：75-77.3赫炎，王祝舉，唐力英.牡丹皮炮制歷史沿革研究j.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（11）：67-68.4丘志春，孫冬梅，張誠(chéng)光.不同炮制方法對(duì)牡丹皮中丹皮酚及芍藥苷含量的影響j.醫(yī)學(xué)研究雜志，2009，38（4）：131-133.5趙學(xué)龍，丁安偉，張麗，等.牡丹皮炮制歷史沿革的研究j.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（9）：1

25、907-1910.6屠婕紅，黃佳.瓜蔞皮中水溶性多糖的提取及含量測(cè)定j.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（2）：281-282.7王文平，郭祀遠(yuǎn)，李琳，等.考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定野木瓜多糖中蛋白質(zhì)的含量j.食品研究與開發(fā)，2008，29（1）：115-117.8彭代銀，韓嵐，張叢芬，等.丹皮多糖一般藥理學(xué)研究j.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24（2）：30-32.9劉吉成，牛英才.多糖藥物學(xué)m.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.10丁安偉，張麗，趙學(xué)龍，等.不同炮制工藝丹皮炭中黃酮類成分的動(dòng)態(tài)變化j.中國(guó)中藥雜志，2009，34（8）：965-968.11dinghy，linhc，changts.tyro

26、sinaseinhibitorsisolatedfromtherootsofpaeoniasuffruticosaj.journalofcosmeticscience，2009，60（3）：347-352.endprint2.2.7精密度試驗(yàn)精確吸取濃度為0.03992mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0ml，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定，平行測(cè)定6份，rsd為2.61%，表明儀器具有良好的精密度。2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次的牡丹皮生品6份，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0ml，置10ml量瓶中加水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)操作測(cè)定吸光

27、度，rsd為2.17%，表明本試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取牡丹皮生品6份各0.5g，分別加入葡萄糖對(duì)照品10mg，按“2.2.2”節(jié)方法制備供試品溶液，精確量取1.0ml于10ml量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算后得葡萄糖平均回收率為100.73%，rsd為2.80%（n=6），見(jiàn)表1。2.2.10樣品含量測(cè)定精確量取“2.2.2”節(jié)下牡丹皮及其炮制品供試液各1.0ml于10ml量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻后取1.0ml于20ml具塞試管中，按“2.2.4”節(jié)方法測(cè)定吸光度，通過(guò)上述回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖濃度

28、，再按下列公式計(jì)算供試品中多糖的含量：含量=（c×d×f/w）×100%，其中c為供試液中葡萄糖的濃度，d為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，w為供試品干品質(zhì)量。得到的結(jié)果見(jiàn)表2。2.3牡丹皮總黃酮含量測(cè)定2.3.1供試品溶液的制備取牡丹皮生品及其炮制品粉末各1.0g，加入50ml的75%乙醇加熱回流提取3次（2h/次），過(guò)濾，將濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，用同體積乙醚萃取除去葉綠素及蠟質(zhì)等，最后用75%乙醇定容至50ml，得到總黃酮樣品溶液。2.3.2對(duì)照品溶液的制備取蕓香苷對(duì)照品0.0252g，用60%乙醇溶解，再定容至50ml即得。2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確量取對(duì)照品溶液

29、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置10ml容量瓶中，依次加入0.3ml的5%亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置6min；然后加0.3ml的10%氯化鋁溶液搖勻后放置6min，再加4ml的4%氫氧化鈉溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置15min后，以相應(yīng)試劑作空白參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蕓香苷濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y=9.846x-0.010（r=0.9997），表明蕓香苷濃度在0.02520.1260mg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)精確量取供試液1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作

30、，測(cè)定吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定1h，結(jié)果rsd為2.56%，表明供試液室溫下1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.3.5精密度試驗(yàn)取蕓香苷對(duì)照品溶液2.0ml于10ml容量瓶中，按“2.3.3”節(jié)操作平行測(cè)定6份，rsd為1.97%，表明儀器具有良好的精密度。2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次牡丹皮生品6份，按“2.3.1”節(jié)方法制備供試液，精確量取1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，rsd為2.38%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。2.3.7加樣回收率試驗(yàn)取6份牡丹皮生品，每份1.0g，分別加入蕓香苷對(duì)照品20mg，按照“2.3.1”節(jié)操作制備供試液，量取1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，計(jì)算蕓香苷平均回收率為99.61%，rsd為2.70%（n=6），見(jiàn)表3。2.3.8樣品含量測(cè)定精確量取“2.3.1”節(jié)中牡丹皮及其炮制品供試液各1.0ml于10ml容量瓶中，按照“2.3.3”節(jié)操作測(cè)定，再依據(jù)回歸方程求出供試品中總黃酮的濃度，結(jié)果見(jiàn)表4。3討論長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)牡丹皮的研究較多集中于酚及酚苷類、單萜及苷類等活性物質(zhì)，而對(duì)于丹皮多糖的研究很少。然而丹皮多糖有明顯的降血糖、保護(hù)腎臟及提高免疫等功效，是頗具發(fā)展前景的一種天然活性物質(zhì)8