1、(131)I 核素標記 B7-H3 單抗靶向治療腎透明細胞癌實驗研究腎癌( renal cell carcinoma,RCC )是泌尿系統常見腫瘤 , 其最常見的病理 類型為腎透明細胞癌( clear cell renal cell carcinoma,cc RCC), 其所占腎癌比例超過 80%。腎根治性切除手術是早期腎癌的主要治療方式, 而腎癌術后及轉移性腎癌缺乏有效的治療手段。針對腫瘤新生血管的靶向治療被認為是最有可能成為晚期腎癌的有效治療 手段, 并且針對腫瘤血管開展靶向治療已成為腫瘤生物治療的熱點,其藥物從作用機制上主要分為兩類：抗血管內皮生長因子(VEGF /血管內皮生長因子受體

2、(VEGFR和抑制哺乳動物類雷帕霉素靶蛋白(mTOR途徑。目前靶向治療的臨 床治療效果并不顯著 , 加上其獨特的不良反應 , 限制了其在臨床的進一步應用。B7-H3在腫瘤的進展尤其是在腫瘤新生血管生成方面是近年來研究的熱點,B7-H3可作為腫瘤相關性抗原發揮重要作用，是腫瘤靶向治療的一個潛在靶 點。本研究首先從臨床收集腎透明細胞癌病例，檢測B7-H3在腎癌中的表達，結合 臨床資料,觀察B7-H3在腎癌的價值及臨床意義。然后我們采用核素¹³¹l進行B7-H3鼠抗人單克隆抗體4H7標記,¹³¹I-4H7的標

3、記率,放化純達到實驗要求,且在腎癌荷瘤鼠移植 瘤內具有較高的攝取率和較長的滯留時間 , 具有良好的靶向性 , 進而利用 ¹³¹I-4H7 對荷腎癌移植瘤裸鼠進行治療 , 觀察 ¹³¹I-4H7 對腎癌的治療效果 , 并初步探討其可能存在的機制及應用 價值。本研究分三個部分：第一部分B7-H3在腎透明細胞癌中的表達及臨床意義 目的：探討B7-H3在腎透明細胞癌患者血清水平及其臨床意義,及B7-H3在腎透明 細胞癌組織中表達的臨床意義方法: 收集臨床上確診為腎透明細胞癌病例資料 126 例, 對其臨床資料進

4、行 分析, 并留取患者術前血清 , 及術后腎腫瘤組織標本。運用酶聯免疫吸附法( enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA )法檢測腎透明細胞癌患者及健 康體檢者對照組血清可溶性 B7-H3, 結合患者臨床資料評估其對腎透明細胞癌患 者的臨床意義。運用免疫組織化學方法 (immunohistochemistry,IHC )檢測腎透明細胞癌組 織中B7-H3的表達,尤其是在血管上皮的表達,結合患者臨床資料,觀察B7-H3表 達陽性的臨床意義。結果：腎透明細胞癌患者血清中存在可溶性 B7-H3,與健康體 檢者相比 , 其水平顯著增高。腎透明細胞癌患者游離B7-H

5、3高水平與腎癌臨床分期、淋巴結有無轉移及遠 處臟器有無轉移有關。B7-H3在腎透明細胞癌組織中陽性表達高于在正常腎臟組 織中的表達。126例腎透明細胞癌標本中 , 有 102例(80.95%)腎透明細胞癌患者腫瘤組織血管中可見B7-H3陽性表達。結論：腎透明細胞患者血清可溶性B7-H3水平顯 著上調 , 與疾病進展相關。腎透明細胞癌組織中高表達B7-H3,尤其是在腫瘤血管中呈陽性表達，提示 B7-H3可能在腫瘤血管生成方面發揮重要作用。第二部分B7-H3單克隆抗體4H7的¹³¹l標記及體內生物分布研究目的：研究鼠抗人B7-H3單克隆抗 體4H7的&

6、lt;sup>131</sup>l標記方法,觀察標記抗體藥代動力學特點及其在腎透 明細胞癌皮下移植瘤模型中生物學分布與顯像研究。方法：采用氯胺T法進行標記，測定¹³¹I-4H7標記率、放化純和 穩定性。對 ¹³¹l-4H7 體內分布及藥物代謝動力學進行研究觀察 ¹³¹I-4H7 在荷腎透明細胞癌（ 786-0 細胞）裸鼠皮下移植 瘤模型中的生物學分布 , 并進行顯像研究。 結果 :¹³¹I-4H

7、7 標記率為 61.64%, 放化純為 98.4%。¹³¹l-4H7在ICR小鼠體內代謝過程符合一級血藥動力學二室模 型,t1/2 a為27.94min,t1/2 B為1634.74min,在體內主要通過肝和腎代謝。 ¹³¹I-4H7 在荷瘤小鼠實驗研究中顯示 ¹³¹I-4H7 在腫瘤 組織中停留時間較長，且皮下移植瘤攝取率較高，在24h達最高，為3.32%ID/g。荷瘤鼠體內丫顯像研究顯示,¹³¹I-4H7組在

8、各個時間點放射濃 聚高于Na¹³¹l組。結論:¹³¹I-4H7易于制備，放化純度 高,標記物的穩定性好 ,達到實驗要求。¹³¹I-4H7 在腎癌荷瘤鼠中具有較高的攝取率和較長的滯留時 間,具有良好的靶向性 ,對腎癌放免顯像和治療有潛在的應用前景。第三部分 ¹³¹I標記B7-H3單克隆抗體在腎透明細胞癌裸鼠移植瘤治療實驗研 究目的：觀察¹³¹I-4H7在腎透明細胞癌裸鼠

9、移植瘤中的治療作用， 并探討其可能存在的機制及應用價值。方法：在荷腎透明細胞癌786-0細胞裸鼠移植瘤直徑達8mm寸，將裸鼠模型分 為¹³¹I-4H7 組、¹³¹l-m Ig G 組、¹³¹l 組 及生理鹽水組，各組分別注射250卩Ci/100卩l的¹³¹l-4H7、 ¹³¹I-m Ig G 、 Na¹³¹I 或等體積生理

10、鹽水 , 通過腫瘤的 生長曲線進行傳統藥效學分析 , 及在第 0、 7、 14、 21 天分別注射 18氟-精氨酸- 甘氨酸-天冬氨酸（RGD肽（18F-RGD ,行小動物正電子發射計算機斷層顯像positron emission tomography-computed tomography,PET-CT ）實時監測腫 瘤體積變化及觀察移植瘤內組織放射性攝取率變化。 結果 :¹³¹I-4H7 組腫瘤生長明顯緩慢 ,治療21天后,腫瘤體積明顯小于 ¹³¹I 及生理 鹽水注射組 , 抑瘤率達 48.81%,

11、 差異具有統計學意義( P&lt;0.001 )。¹³¹I-m Ig G 組在 21 天時的抑瘤率為22.41%,<sup>131v/sup>l-4H7 抑瘤效果優于 ¹³¹l-m Ig G組,差異具 有統計學意義(P&lt;0.05 )。小動物PET-CT檢查提示，在第7天、14天及21 天,¹³¹I-4H7組腫瘤組織的18F-RGD攝取率明顯降低，與生理鹽水組、 ¹³¹I組及¹³¹I-m Ig G 組相比差異具有統計學意義(P&lt;0.001 )。結論:<sup>131</sup