1、 吉林省通化振國藥業有限公司 文件編號：SMP·QA-JK-004內容：1 起草依據1.1 中華人民共和國國家標準醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子的測試方法（GB/T16292-2010）。1.2 中華人民共和國國家標準醫藥工業潔凈室（區）浮游菌的測試方法（GB/T16293-2010）。1.3 中華人民共和國國家標準醫藥工業潔凈室（區）沉降菌的測試方法（GB/T16294-2010）。1.4藥品生產質量管理規范（2010年修訂） 1.5 藥品GMP指南無菌藥品2術語和定義2.1沉降菌：用GB/T162942010標準提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養基，在適宜的生長條件

2、下繁殖到可見的菌落數。2.2沉降菌菌落數：規定時間內每個平板培養皿收集到空氣中沉降菌的數目，以個/皿表示。2.3潔凈室（區）：對塵粒及微生物污染規定需進行環境控制的房間或區域。其建筑結構，裝備及其使用均具有減少對該區域內污染源的介入、產生和滯留的功能。其他相關參數諸如：溫度、濕度、壓力也有必要控制。2.4局部空氣凈化：僅使室內工作區域或特定的局部空間的空氣中懸浮粒子濃度達到規定的空氣潔凈度級別的方式。2.5單向流：沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流，與水平面平行的叫水平單向流。2.6非單向流：具有多個通路循環特性或氣流方向不平行的氣流。2.

3、7懸浮粒子：用于空氣潔凈度分級的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1µm1000µm的固體和液體粒子。對于懸浮粒子計數測量儀，一個微粒球的面積或體積產生一個響應值，不同的響應值等價于不同的微粒直徑。2.8潔凈度：潔凈環境內單位體積空氣中含大于或等于某一粒子的統計數量來區分的潔凈程度。2.9置信上限：從正態分布抽樣得到的實際均值按給定的置信度（此處為95%）計算得到的估計上限將大于此實際均值，則稱計算得到的這一均值估計上限為置信上限。2.10空態：潔凈區（室）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產設備、原材料或人員的狀態。2.11靜態2.11.1靜態a:潔凈區（

4、室）在凈化空氣調節系統已安裝完畢且功能完備的情況下，生產工藝設備已安裝、潔凈區（室）內沒有生產人員怕狀態。2.11.2靜態b：潔凈區（室）在生產操作全部結束，生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后。2.12動態：潔凈區（室）已處于正常生產狀態，設備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規范操作。2.13潔凈工作臺：一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區。其特點是自身能夠供給經過過濾的空氣或氣體，按氣流形式分為垂直單向流工作臺、水平單向流工作臺等。3監測項目3.1潔凈室的壓差測定3.1.1 監測儀器：壓差計3.1.2監測人員：質量管理部監控員3.1.3 監測要求 （1）潔凈度級別要求高

5、的潔凈室（區）對相鄰的空氣潔凈度級別低的潔凈室（區）一般要求是相對正壓。（2）潔凈區與非潔凈區之間、不同等級潔凈區之間的正壓差大于10Pa；（3）相同等級不同功能的操作間之間應保持適當壓差梯度，以防止污染和交叉污染。（4）產生粉塵的操作間與相鄰房間之間保持相對負壓，壓差大于5Pa。3.1.4 監測頻次：在生產過程中每日監控二次，填寫“壓差檢查記錄”（SMP·SC-WS-001-02）。3.2 潔凈室內溫濕度的測定3.2.1. 監測儀器：溫濕度計3.2.2 監測人員：質量管理部監控員。3.2.3 監測要求：潔凈室（區）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝相適應，除有特殊規定外，溫度控制在1

6、826，相對濕度控制在45%65%之間為宜。 3.2.4 監測頻次：在生產過程中每日監控二次，填寫“溫度、濕度檢查記錄”（SMP·SC-WS-001-01）。3.3 懸浮粒子監控3.3.1 監測儀器：塵埃粒子計數器3.3.2 監測人員：化驗室化驗員、設備動力部管理員3.3.3 測試條件：在測試之前，要對潔凈區（室）相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環境條件，例如：這種預先測試或可包括：3.3.3.1溫度和濕度的測試。潔凈區（室）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在1826，相對濕度在45%65%為宜），同時應滿足測試儀器的使用范圍。3.3

7、.3.2室內送風量或風速的測試，或壓差的測試。3.3.3.3高效過濾器的泄漏測試。3.3.4 測試狀態3.3.4.1空態、靜態和動態三種狀態均可進行測試。3.3.4.2 空態或靜態測試時，室內測試人員不得多于2人。3.3.4.3 測試報告中應標明測試時所采用的狀態和室內的測試人員數。3.3.5 測試時間3.3.5.1 在空態或靜態a測試時，對單向流潔凈室（區）而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區），測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于30min后開始。在靜態b時測試時，對單向流潔凈室（區）而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于1

8、0min后開始。對非單項流潔凈室（區），測試宜在生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后開始。3.3.5.2在動態測試時，則須記錄生產開始時間以及測試時間。3.3.6 懸浮粒子計數3.3.6.1采樣點數目及其布置 在空態或靜態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其布置應力求均勻，并不得少于最少采樣點數目，采樣點布置規則如下圖：· · · ·  注：·為采樣點在動態測試時，懸浮粒子采樣點數目及其布置應根據產品的生產及工藝關鍵操作區設置。3.3.6.1.1最少采樣點數目方法一測試采樣點數目： NL= A式中: NL-最少采樣點（四舍五

9、入為整數）; A-潔凈室或被控潔凈區的面積,單位為平方米(m2)A級區動態測試按風險分析確定關鍵監測點。3.3.6.1.2采樣點的位置采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置，采樣點多于5點時，也可以在離地面0.81.5m高度的區域內分層布置，但每層不少于5點。3.3.6.2 采樣點的限定對任何小潔凈室（區）或局部空氣凈化區域，采樣點的數目不得少于2個，總采樣次數不得少于5次。每個采樣點的采樣次數可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數可以不同。3.3.6.3 每次采樣量：每個采樣點每次采集的空氣量，保證最大粒徑的粒子能檢測出至少20個粒子。每個采樣點的每次采樣量VS用下式確定： 20 V

10、S ×100 Cn·m 式中： VS每個采樣點每次最少采樣量，用升表示。 Cn·m為相關等級規定的最大被考慮粒徑之等級限值 20當粒子濃度處于該等級限值時，可被檢測到的粒子數。 確認A/B級時，每個采樣點的采樣量不少于1立方米，C、D級每個采樣點的采樣量至少為2升。 3.3.7 具體方法見“塵埃粒子測試操作規程”（SOP·QC-JT-005）3.3.8 監控要求：含塵量見表1各級別空氣懸浮粒子的標準規定潔凈度級別懸浮粒子最大允許數/立方米靜態動態0.5m5.0m0.5m5.0mA352020352020B352029352 0002 900 C352 0

11、002 9003 520 00029 000 D3 520 00029 000不作規定不作規定表1：各級別空氣懸浮粒子的標準規定3.3.9采樣注意事項3.3.9.1對于單項流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口宜向上。3.3.9.2布置采樣點時，應盡量避開回風口。3.3.9.3采樣時，測試人員應在采樣口的下風側，并盡量少活動。3.3.9.4采樣完畢后，宜對塵埃粒子計數器進行自凈。3.3.9.5應采取一切措施防止采樣過程的污染。3.3.10 監測頻次：a)A、C級潔凈室（區）每生產周期前進行靜態監測，生產時，A級區在線監測動態，C級潔凈

12、室（區）灌封間、稀配間、稱量間每周1次進行動態監測，其它C級潔凈室（區）每月進行1次動態監測；并填寫“懸浮粒子監測檢驗記錄”(SOP·QC-JT-005-01)和“懸浮粒子監測檢驗報告單”(SOP·QC-JT-005-02)。b)生產操作全部結束，操作人員撤出生產現場并經1520分鐘自凈后，潔凈區的懸浮粒子應達到“靜態”標準。c)D級潔凈室（區）每月靜態監測一次，并填寫“懸浮粒子監測檢驗記錄”(SOP·QC-JT-005-01)和“懸浮粒子監測檢驗報告單”(SOP·QC-JT-005-02)。3.3.11 結果評定a) 每個采樣點的平均粒子濃度必須不大于

13、規定的級別界限。b) 全部采樣點的粒子濃度平均值的95%置信上限必須不大于規定的級別界限。3.4 沉降菌監測本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。3.4.1 監測儀器設備：高壓消毒鍋、電熱恒溫干燥箱、恒溫培養箱、培養皿、培養基。3.4.1.1培養皿：一般采用ø90mm×15mm規格的培養皿。3.4.1.2培養基：大豆酪蛋白瓊酯培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）3.4.1.3恒溫培養箱、高壓

14、消毒鍋、電熱恒溫干燥箱：必須定期進行校驗。3.4.2 監測人員：化驗室化驗員、車間監控員3.4.3 測試條件：在測試之前，要對潔凈區（室）相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試沉降菌的環境條件，例如：這種預先測試或可包括：3.4.3.1溫度和濕度的測試。潔凈區（室）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在1826，相對濕度在45%65%為宜），同時應滿足測試儀器的使用范圍。3.4.3.2室內送風量或風速的測試，或壓差的測試。3.4.3.3高效過濾器的泄漏測試。3.4.4 測試狀態3.4.4.1靜態和動態兩種狀態均可進行測試。3.4.4.2 靜態測試時，室內測試人員不

15、得多于2人。3.4.4.3 沉降菌測試前，被測潔凈室（區）由使用決定是否需要預先消毒。3.4.4.4 測試報告中應標明測試時所采用的狀態和室內的測試人員數。3.4.5 測試時間3.4.5.1 在空態或靜態a測試時，對單向流潔凈室（區）而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區），測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于30min后開始。在靜態b時測試時，對單向流潔凈室（區）而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區），測試宜在生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后開始。3.4.5.2在動態測試時，則須

16、記錄生產開始時間以及測試時間。 3.4.6 采樣點數目及其布置：采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。3.4.7最少培養皿數 在滿足最少采樣點數目的同時，還宜滿足最少培養皿數，見表2 表2：最少培養皿數潔凈度級別最少培養皿數（ø90mm）A14B14C2D23.4.8采樣次數每個采樣點一般采樣一次。3.4.9采樣注意事項3.4.9.1對于單項流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口宜向上。3.4.9.2布置采樣點時，應盡量避開回風口。3.4.9.3采樣時，測試人員應在采樣口的下風側，并盡量少活動。3.4.9.4應采取一切措施防止采

17、樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。3.4.9.5培養皿在用于檢測時，為避免培養皿運輸或搬運過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需要暴露采樣，然后與采樣后的培養皿（TSA或SDA）一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。3.4.10 采樣方法將已制備好的培養皿按采樣點的布置要求放置，打開培養皿蓋，可使用多個培養皿連續進行監測，使培養基表面暴露4h(灌裝時間不足4h，應與灌裝時間一致)，再將培養皿蓋蓋上后倒置。3.4.11 培養a) 全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。 b) 采用大豆酪蛋白瓊酯培養基（TSA）配制的培養皿經采樣后，在3

18、035培養箱中培養，時間不少于48h。（非最終滅菌產品培養時間不少于72h。若長菌，需進行種屬鑒定。）采用沙氏培養基（SDA）配制的培養皿經采樣后，在2025培養箱中培養，時間不少于5天。c) 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。具體方法見“沉降菌測試檢驗操作規程”（SOP·QC-JT-006）3.4.12 菌落計數：具體方法見“沉降菌測試檢驗操作規程”（SOP·QC-JT-006） a) 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，有否遺漏。b) 若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2

19、個以上菌落計數。具體方法見“沉降菌測試檢驗操作規程”（SOP·QC-JT-006）3.4.13 注意事項3.4.13.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。3.4.13.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。3.4.13.3 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。3.4.13.4 由于細菌種類繁多，差別大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。3.4.13.5 采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。3.4.14沉降菌監控標準表3 潔凈區微生物

20、監測的標準（最大允許數）級別浮游菌cfu/m3沉降菌（f90mm）表面微生物（動態）接觸碟（f55mm）cfu /碟5指手套cfu /手套動態靜態動態cfu /4h靜態cfu /0.5hA級<1<1<1<1<1<1B級10-5155C級10010050325-D級2002001001050-3.4.15結果評定度 a) 潔凈室（區）內的每皿菌落數必須低于所選定的評定標準。b) 若某潔凈室（區）的任何一皿菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。3.4.16 監測頻次：3.4.16.1沉降菌A級區每批次監測，C級潔凈室（

21、區）（灌封間、稀配間、稱量間）每周1次動態監測，其它C級潔凈室（區）及D級潔凈室（區）每月1次動態監測。并填寫“沉降菌監測檢驗記錄”（SOP·QC-JT-006-01）和“沉降菌監測檢驗報告單”（SOP·QC-JT-006-02）。3.5 浮游菌監測本方法采用計數濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若干時間和適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以判定該潔凈室的微生物濃度。3.5.1 監測儀器設備： 浮游菌采樣器、培養皿、培養基、恒溫培養箱。3.5.1.1 浮游菌采樣器宜采用撞擊法機理的采樣器。3.5

22、.1.2 測試要點 a) 校驗：必須按照測試儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定。使用校驗合格，且在使用有效期內的儀器。 b) 測試儀器在未進入被測區域時，先清潔表面。c) 使用測試儀器時應嚴格按照儀器說明書操作。 儀器開機，預熱至穩定后，方可按儀器說明書的規定對儀器進行校正，同時檢查采樣量流量，并根據采樣量設定采樣時間。 采樣口必須用便于消毒及化學性能穩定的材料制造。 采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。 采樣管的長度應根據測點的高度定，盡量減少彎曲。3.5.1.3 培養皿 a) 狹縫式采樣器一般采用90mm×15mm規格的培養皿。可根據所選用的采樣器選擇合適的培養皿。b) 離心式采樣器采用專

23、用的固形培養條。3.5.1.4培養基 大豆酪蛋白瓊酯培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或其他用戶認可并經驗證了的培養基。3.5.1.5 恒溫培養箱 必須定期對恒溫培養箱進行校驗。3.5.2 監測人員：化驗室化驗員、車間監控員3.5.3 測試步驟3.5.3.1 測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。a) 采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于A級潔凈室的采樣器宜預先放在被測房間內。b) 用消毒劑擦凈培養皿的外表面。c) 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。d) 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管

24、的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。e) 采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒。3.5.3.2 狹縫式采樣器的采樣程序 a) 儀器經消毒后先不放入培養皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發，時間不少于5min，并調好流量、轉盤轉速。 b) 關閉真空泵，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采樣器縫隙高度。 c) 置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器，根據采樣量設定采樣時間。3.5.3.3 培養 a) 全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。 b) 采用大豆酪蛋白瓊酯培養基配制的培養皿經采樣后，在3035培養箱中

25、培養，時間不少于 2d。采用沙氏培養基配制的培養皿經采樣后，在2025培養箱中培養，時間不少于 5d。 c) 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。 d) 菌落計數：用肉眼直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，有否遺漏；若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。3.5.3.4 注意事項 a) 使用前應仔細檢查每個培養皿的質量，培養基及培養皿有變質、破損或污染的不能使用。 b) 采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。 c) 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。 d) 由于細菌種類繁

26、多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。3.5.4測試狀態 a) 浮游菌測試前，被測試潔凈室（或潔凈區）的溫、濕度必須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。b) 浮游菌測試前，被測試潔凈室（潔凈區）已經過消毒。c) 測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，并應在報告中注明測試狀態。3.5.5 測試人員 a) 測試共員必須穿戴符合環境級別的工作服。 b) 靜態測試時，室內測試人員不得多于2人。3.5.6 測試時間 a) 在空態或靜態a測試時，對單

27、向流潔凈室（區）而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于10min后開始，對非單向流潔凈室（區），測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于30min后開始。在靜態b測試時，對單向流潔凈室（區），測試宜在生產操作人員撤離現場并經過10min自凈后開始，對非單向流潔凈室（區），測試宜在生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后開始，b) 在動態測試時，則須記錄生產開始的時間以及測試時間。3.5.7 浮游菌采樣點數量及其布置 a) 最少采樣點數目表4 浮游菌最少采樣點數目面積m2潔凈度級別A、BCD1010202040401001002002004004001000100020002000

28、2348164080160400800 2224102040100200222236133263注：對于A、B級單向流潔凈室（區），包括A、B級潔凈工作臺，面積指的是送風口表面積；對于C級以上的非單向流潔凈室（區），指的是房間面積。2)日常監測的采樣點數目由生產工藝的關鍵操作點來確定。 b) 采樣點的位置 采樣點位置同懸浮粒子測試點。 工作區測點位置離地0.8m1.5m左右（略高于工作面）。 送風口測點位置離開送風面30cm左右。 可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。3.5.8最小采樣量 采樣量根據日常檢測及環境驗證定，每次最小采樣量見表6。表5 浮游菌最小采樣量潔凈度級別采樣量L/次A

29、、B1000C500D1003.5.9 采樣次數每個采樣點一般采樣一次。 3.5.10 采樣注意事項 a) 對于單向流或送風口 ，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。 b) 布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。 c) 采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，并盡量少走動。 d）應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。 e）培養皿在用于檢測時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養皿一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。3.5.11 結果計算

30、3.5.11.1 用計數方法得出各個培養皿的菌落數。3.5.11.2 每個測點的浮游菌平均濃度的計算，見下式： 菌落數平均濃度（個/m3）= 采樣量3.5.12 結果評定 用浮游菌平均濃度判斷潔凈室（區）空氣中的微生物。a)每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定的評定標準中關于細菌濃度的界限。b) 若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新采樣兩次，兩次測試結果必須合格。3.5.13 監測頻次：A級區每批次監測，C級潔凈室（區）（灌封間、稀配間、稱量間）每周1次動態監測，其它C級潔凈室（區）及D級潔凈室（區）每月1次動態監測。并填寫“浮游菌監測檢驗記錄”（SOP&#

31、183;QC-JT-007-01）和“浮游菌監測檢驗報告單”（SOP·QC-JT-007-02）。3.6表面微生物3.6.1基本監測方法包括接觸碟、擦拭法及表面沖洗法。3.6.1.1接觸碟法適用于對平整的規則性表面進行取樣監測。通常碟子是50mm直徑的，取樣面積一般約252。3.6.1.1.1取樣：取樣時打開碟蓋，無菌培養基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣點表面均勻充分接觸，接觸約5秒鐘，再蓋上碟蓋。3.6.1.1.2取樣后，應立即用75%酒精噴灑被取樣表面，以除去殘留瓊脂。3.6.1.1.3培養：收好的營養瓊脂接觸碟在3035培養3天。3.6.1.2擦拭法用于對不規則表面（尤其是設備表面）進行取樣。拭子通常為棉簽，在取樣前