1、NPN的鑒別方法飼料原料中非蛋白氮(NPN)的鑒別NPN的鑒別方法一.目前NPN的種類A 銨鹽 (NH4HCO3 、 (NH4)2SO4、NH4Cl)、尿素B 尿素的衍生物:縮二脲、磷酸脲、淀粉糊化尿素、 脲醛聚合物(蛋白精)、 糠醛尿素、 糖基化尿素C 疊氮化鈣CaN6D 三聚氰胺C3N6H6脲醛聚合物和三聚氰胺是目前最常用的NPN脲醛聚合物(蛋白精)(CP=10元),三聚氰胺(CP=20元)NPN的鑒別方法二.NPN的鑒別(1)-尿素n試劑:1.生黃豆粉。將大豆磨成粉末（注意；切勿加熱升溫)2.酚紅：g/L。 稱取酚紅（苯酚紅）0.1g溶于100ml乙醇中。n步驟：取約0.5-2g樣品，于

2、50ml比色管內，再加約0.1-0.2g生黃豆粉，35滴酚紅，40ml水，塞好塞子，搖動30秒，靜止，如溶液變成紅色，則樣品中摻入尿素 NPN的鑒別方法二.NPN的鑒別(1)-尿素n定量分析:n稱樣1-3g于碘量瓶內,加生豆粉約1克,準確加入100ml水,在30C搖動1h,過濾,取濾液50ml于蛋白儀內,加NaOH(30%)10ml,用硼酸吸收, 再用鹽酸滴定,同時做樣品和生豆粉空白.nCP=(V-V0-V01)xCx0.014x6.25mx50/100 x100NPN的鑒別方法二.NPN的鑒別(2)-銨鹽 試劑n氫氧化鈉溶液,g氫氧化鈉加ml水。nPH 試紙 步驟：取樣品3-5g于100ml

3、 燒杯內，表皿內側沾一條濕的PH試紙，向燒杯內加約5-10ml 氫氧化鈉，將表皿迅速蓋上，如試紙迅速變藍，打開表皿有很濃的氨味則含銨鹽。 NPN的鑒別方法二. NPN的鑒別(3)-脲醛聚合物 ( 蛋白精 試劑 ：變色酸 2g/L硫酸溶液 稱取0.2g變色酸于干燥的燒杯內，加入100 ml濃硫酸，電爐上加熱到約70-80，待溶解后，降溫，移入120 ml棕色的滴瓶內。 步驟：將可疑物從顯微鏡下夾出數粒于干燥的小燒杯內，滴加約1 ml變色酸，電爐上加熱到剛剛產生微煙，取下，加入約30 ml水，若溶液變成穩定的紫色，則樣品中有蛋白精。 NPN的鑒別方法二. NPN的鑒別(3)-脲醛聚合物 ( 蛋白精

4、1. 魚粉肉骨粉除去偽裝方法： 任何摻假的魚粉均要做一番偽裝，如直接將經偽裝過魚粉放在顯微鏡下看很難發現真實情況，因此鏡檢前應首先要除去偽裝，最有效的方法就是脫脂，具體做法如下：NPN的鑒別方法魚粉肉骨粉除去偽裝方法(1)n(1) 將少許魚粉（3-5g ）用定性濾紙包好，放入索氏脂肪抽提器內，以石油醚作提取劑，脫脂約30分鐘，至石油醚中看不到黃色為止，將紙包取出，水浴上烘干（70-80）。n(2) 將少許魚粉（3-5g ）放入燒杯內，加入50ml石油醚，攪拌2分鐘，過濾，將濾渣放回燒杯，加50ml石油醚，攪拌2分鐘，過濾。將濾渣烘干（70-80）。 NPN的鑒別方法魚粉肉骨粉除去偽裝方法(2)

5、n(3) 將少許魚粉（3-5g ）放入燒杯內，加丙酮50ml攪拌2分鐘，靜止5分鐘，將上清液棄去，再加50ml石油醚攪拌2分鐘，靜止5分鐘，棄去上清液，將下部分的魚粉烘干（70-80）。n(4) 將少許魚粉（約3g ）放入燒杯內,加3gKOH(NaOH),再150ml水攪拌后在放電爐煮沸2分鐘,靜止5分鐘,倒掉上清液,用水洗殘渣3-4次,再用丙酮50ml洗殘渣2-3次,殘渣用于蛋白精和含大量粗纖維類物質(如鋸末、稻草、麥芽根)的檢測NPN的鑒別方法魚粉肉骨粉除去偽裝方法(3)n(5) 將少許魚粉（約3-5g ）放入分液漏斗中,加四氯化碳50-80ml,輕輕搖動后靜止5分鐘,把分液漏斗活拴打開將

6、沉淀物放到一小燒杯內,之后將小燒杯內沉淀物過濾出來,此殘渣用于蛋白精的檢測.n 請注意：乙醚、丙酮、石油醚均為易燃品，請注意：乙醚、丙酮、石油醚均為易燃品，請在通風的條件下操作，嚴禁煙火。請在通風的條件下操作，嚴禁煙火。NPN的鑒別方法三.其它定性檢查的方法A . 摻入植物類物質（如小麥麩、稻谷殼、粉絲蛋白粉） 試劑： 碘-碘化鉀溶液 稱1g的碘及5g碘化鉀于燒杯內，加100ml水攪拌2分鐘，待溶解后將其移入120ml棕色的滴瓶內。 步驟：取約5g樣品放在燒杯內，加約70ml水，在電爐上煮沸，取下靜止2分鐘，滴加碘碘化鉀試劑-2ml，如溶液變成藍色則摻入植物性的物質 NPN的鑒別方法三.其它定

7、性檢查的方法B.摻入植物性物質（含大量粗纖維類物質：如鋸末、稻草、麥芽根含大量粗纖維類物質：如鋸末、稻草、麥芽根）試劑：1.間苯三酚20g/L 稱間苯三酚2g加100ml 95%乙醇，溶解后放入棕色滴瓶 2.濃鹽酸 36% 分析純n步驟：稱1-2g魚粉于培養皿內，滴加間苯三酚使樣品濕潤，放置5-10分鐘后，滴加濃鹽酸約0.5ml，放置2-3分鐘，如樣品顯現深紅色，則樣品中含木質素，在顯微鏡下進一步確認為何物。 NPN的鑒別方法三.其它定性檢查的方法C.摻入皮革粉試劑: 1 .稀硫酸2mol/L 將取10ml濃硫酸慢慢加入到90ml水中。2 .二苯基卡巴腙2g/L 稱0.2g二苯基卡巴腙，加入1

8、00ml95%乙醇，溶解后，移入棕色滴瓶內。n步驟：取1-3 g魚粉于坩堝內，在電爐上炭化，再放在馬弗爐內于550-600下灰化2小時，取出，降溫后，加入稀硫酸10ml攪拌，加二苯基卡巴腙5-10滴，如溶液顯紫紅色則樣品中含皮革粉。 NPN的鑒別方法四.目前真蛋白測定中的問題1.真蛋白的測定方法 水洗法 三氯乙酸法 堿性硫酸銅法 重金屬鹽沉淀法NPN的鑒別方法四.目前真蛋白測定中的問題2. 這類方法的特點 能查出水溶性的NPN 如:銨鹽、尿素、磷酸脲 對水不溶性的NPN查不出。 如:脲醛聚合物(蛋白精)、糠醛尿素、淀粉糊化尿素、縮二脲、糖基尿素、三聚氰胺 花生粕等本身就有3-7個CP是水溶的.

9、檢測數據匯總花生粕水溶性蛋白試驗.xls NPN的鑒別方法四.目前真蛋白測定中的問題 不論摻什么NPN都盲目的測真蛋白將會錯檢、誤檢、漏檢NPN的鑒別方法四.目前真蛋白測定中的問題3.賴氨酸復合飼料的真蛋白?玉米用亞硫酸浸12-48h粗粉碎胚芽 玉米皮分離離心分離膜過濾淀粉玉米胚芽 玉米皮 玉米蛋白粉葡萄糖 淀粉酶賴氨酸Lys渣Lys高蛋白Lys98%,65%Lys復合飼料Lys蛋白玉米皮稻谷殼含NH3廢水Lys菌種及雜菌賴氨酸菌種NH3NPN的鑒別方法1#2# 3#4#1#2#3#4#5#Lys4.954.66 5.823.70NH33.013.003.183.30Met0.360.32 0

10、.320.27CPNH315.515.416.417.0Thr0.470.48 0.410.45CP39.837.436.436.1Cys0.350.27 0.280.31CF8.4810.4510.449.07Glu1.701.88 1.441.80EE2.43Ile0.490.44 0.330.40 總能Cal/g382639423916Leu1.201.12 0.841.15 AFB1ppb18.26Ala0.991.00 0.790.94 DONppm4.10.93.0His0.180.35 0.280.36F-2ppm16271552賴氨酸復合飼料的質量情況匯總NPN的鑒別方法賴氨酸

11、復合飼料的質量特點 游離氨NH3高 3% CPNH3=15-17% ,AA=14-16%,CP=36-39% CPNH3 CP 組成:玉米皮+賴氨酸生產過程的含氨廢水 霉菌毒素的殘留高 F-2=1500-5000ppb DON=1-3ppm AFB1=15-50ppb40%四.目前真蛋白測定中的問題NPN的鑒別方法賴氨酸蛋白(外觀:褐色或黑色小球)2種賴氨酸菌體蛋白的對比NPN的鑒別方法3.如何測真蛋白? 判斷是否摻假(NPN)-鏡檢、定性分析。 根據NPN的種類決定采用什么方法 AA總和最有效的方法 三氯乙酸法、堿性硫酸銅法、重金屬鹽沉 淀法、水洗法 四.目前真蛋白測定中的問題NPN的鑒別方

12、法3.如何測真蛋白? 摻微量的NPN(調蛋白15個百分點),氨基酸分析也難查出,只有用其它方法檢測 如:鏡檢、過篩測定CP 、定性分析 測真蛋白要根據具體情況定方法,決不能教條主義四.目前真蛋白測定中的問題NPN的鑒別方法n3.如何測真蛋白nAA法-最有效四.目前真蛋白的測定中的問題NPN的鑒別方法五.魚粉(1) 魚粉和魚排粉有下面2個問題 真假的問題 好壞的問題(2) 解決問題的方法 真假 鏡檢 、AA 、N I R、 定性和常規檢測分析 上述這些方法已能解決真假的問題NPN的鑒別方法五.魚粉好壞-是現在碰到最多的問題 魚粉的好壞與魚粉的種類有關 白魚粉蒸汽魚粉直火魚粉蒸干魚粉 (下雜魚粉,魚干粉) 直火魚粉常含少部分(10-20%)過熱成分 質量差的直火魚粉有時含40-50%的燒焦魚粉,也可能是摻入的自燃魚粉.NPN的鑒別方法直火干燥魚粉。樣品經脫脂處理。可見很多顆粒被火燎焦糊了直火干燥魚粉。樣品經脫脂處理。可見被火燎焦糊的顆粒 NPN的鑒別方法五.魚粉魚粉的好壞與魚粉的新鮮度有關 新鮮度指標: 感觀、氣味、 VBN、組胺 、酸價、過氧化