1、碩士學(xué)位論文中期檢查報告論文題目： 趨化因子ccl5及其受體ccr5在川崎病中的表達及意義研究生姓名：學(xué)院：專業(yè)：導(dǎo)師姓名、職稱：三峽大學(xué)研究生處一、研究生論文小期報告的齊項內(nèi)容，要實事求是，表達要明確、嚴(yán)謹(jǐn)，字跡要 清晰易辨，外來語要同時用原文和中文表達。第一次出現(xiàn)縮寫詞，須注出全 稱。二、論文屮期報告由學(xué)生本人完成，完成后請導(dǎo)師簽署意見，評議小組簽署評議 意見，上述意見應(yīng)明確是否同意研究生繼續(xù)進行論文寫作工作。三、論文屮期報告應(yīng)包括以下內(nèi)容：(1)論文工作是否按開題報告預(yù)定的內(nèi)容及 進度安排進行；(2)目前已完成的研究工作及結(jié)果；(3)后期擬完成的研究 工作及進度安排；(4)存在的困難與問

2、題；(5)如期完成全部論文工作的可 能性。四、論文屮期報告內(nèi)容由研究生自附紙張完成，用a4紙張正反打印。五、本論文中期報告由學(xué)院留存一份。三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文中期報告（1）研究進度安排川崎病是一種急性、自限性的全身血管炎，好發(fā)于5歲以下嬰幼兒。1962年 在日木首次發(fā)現(xiàn)，1967年日木學(xué)者川崎富作首先報道，此后歐、亞、美、澳洲及 南非各地均冇報道。由于本病病因未明，臨床表現(xiàn)比較復(fù)雜，全身多系統(tǒng)均可受 累，尤以冠狀動脈為甚，在日本和美國已經(jīng)取代風(fēng)濕熱成為兒童獲得性心臟病的 最常見疾病，口前已成為最常見的小兒后天性心臟病之一，并可能為成人缺血性 心臟病的危險因素之一。近年來，kd無論在流行病學(xué)、病

3、因及發(fā)病機制的研究 以及臨床診療上均獲得了諸多進展。本論文根據(jù)預(yù)定的開題報告內(nèi)容以及進度合 理安排，目前已經(jīng)就相關(guān)文獻綜述以及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀進行了分析與總結(jié)，為本 文的研究奠定了理論基礎(chǔ)。（2）口前已完成的研究工作及結(jié)果木文已經(jīng)對相關(guān)案例進行了預(yù)定的選取。木文選取2013年10月-2014年7月 在三峽大學(xué)仁和醫(yī)院、宜昌市中心醫(yī)院及宜昌市二醫(yī)院就診的川崎病患兒20例， 年齡波動于6月8歲，平均年齡（2. 10±1.83）歲,男：女=2:lo受檢對象按入選 順序編號，如第1個入選對象編號為k診斷標(biāo)準(zhǔn)選用美國心臟病協(xié)會制定的川崎 病診斷標(biāo)準(zhǔn)：1）發(fā)熱持續(xù)5天以上，抗生素治療無效，不能被其

4、他已知疾病所解釋；2）雙眼結(jié)膜充血（非滲出性）；3）口唇鮮紅、鞭裂，口唇點膜彌散性充血，楊梅舌；4）多形性紅斑、皮嫁；5）在急性期有手足碩腫，掌距紅斑；在恢復(fù)期指（趾）端甲床皮膚移行處有膜 狀脫皮；6）急性非化膿性頸淋巴結(jié)大，常為單側(cè)，其直徑1.5cm或更大。以上標(biāo)準(zhǔn)至少滿足5項，可確診為川崎病，其中1）為必備條件。若患兒不明原因 發(fā)熱超過5天，伴其他診斷標(biāo)準(zhǔn)屮的3項，并經(jīng)二維超聲心動圖或冠狀動脈造影 確診存在冠狀動脈擴張或冠狀動脈瘤，除外其他疾病，亦可確診。對于所有患者 的一般資料進行了充分的統(tǒng)計，同時在此基礎(chǔ)上對患者進行了隨機分組，從三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文中期報告而為后續(xù)的研究奠定基礎(chǔ)。（3

5、）后期擬完成的研究工作及進度安排后期，木文將首先就檢測kd患兒表達ccl5、ccr5的具體細胞。收集kd患兒 和正常對照組外周血3-4 ml, pbmc分離:無菌肝素鈉抗凝血3-4ml,經(jīng)ficoll 密度梯度離心法分離提取外周血單個核細胞（pbmcs）。同時在分析以及檢測的基 礎(chǔ)之上，對結(jié)果進行分析包括：1）明確ccl5、ccr5分別在外周血pbmc中的具休表達細胞；2）對于活化前后的t細胞，ccl5、ccr5的表達水平有何變化；3）找到ccl5、ccr5之間在川崎病患兒中表達的聯(lián)系。經(jīng)過上述比較，研究ccl5與ccr5在川崎病患兒外周血中的表達變化，從而 為川崎病發(fā)病機制和治療手段提供新的

6、思路。研究結(jié)果如下表所示：表1趨化因子ccl5對t細胞趨化性影響視野010205010030050021508857605233264582576036361244431432606140765569615766195563295343501455762340465317355941553030933476532384713142520303629合計171407538375423398405平均數(shù)/視野19.0±9.445.2±17.259. 8 ±20. 141.6±20.947.0±13.344.2±10.345.0±

7、13.6表2 ccr5阻斷劑對t細胞趨化性影響視野01050100200503018131038231312944191255722517577827979合計282124694240平均數(shù)/視野56.4±17. 6324.8 土 4 1513.8 土 3 708.4±3. 85&0 ±2.0lonomvcin491415min60504030231089090«a 1a 1a 1a 1a圖1各組細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化通過對趨化因子ccl5/ ccr5對t細胞趨化性影響，我們的實驗結(jié)論如下：1、趨化因了受體ccl5/ ccr5在川崎病患兒外周血中

8、高表達，提示他們可能 與川崎病患兒外周血的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，另外，受體ccrs可能是川崎病標(biāo)志 物之一。2、趨化因子受體ccl5在川崎病患兒外周細胞中有明確表達，ii為功能性受 體。3、在實驗組屮加入趨化因子ccls后sacc-83細胞內(nèi)的c押濃度呈現(xiàn)明顯的 瞬時上升現(xiàn)象(見圖1),而利用受體ccrs阻斷劑maraviroc和ccrsmab將細胞表 面的受體ccrs阻斷后，跟蹤監(jiān)測發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)的 仏十濃度無明顯的波動變化(見圖 1)。4、趨化因子ccls與其受體ccrs結(jié)合后，對川崎病患兒外周細胞的運動性、 侵襲性、趨化性和增殖效應(yīng)均產(chǎn)生了促進作用，其機理可能是ccl5/ ccr5生物軸 通過

9、引起細胞內(nèi)鈣離了濃度的改變，啟動了癌細胞內(nèi)鈣離了相關(guān)的信號。(4) 存在的困難與問題趨化因子(chemokines)是細胞因子超家族中的成員之一，是一類對細胞具 有定向趨化吸引作用的小分子蛋白質(zhì)，它可以定向吸引免疫細胞參與免疫應(yīng)答和 免疫病理過程12。到目前為止，至少有50種趨化因子被發(fā)現(xiàn)，其由70-125個 氨基酸組成，分了量在8-11ki)不等。大多數(shù)趨化因了含有4個保守的半胱氨酸形 成的兩個特征性的二硫鍵，故具冇很相似的高級結(jié)構(gòu)，c端為a螺旋，n端不規(guī)則, 有比較高的生物學(xué)活性，與受體相結(jié)合。趨化因子首先作為趨化性介質(zhì)被發(fā)現(xiàn)，但隨著對趨化因子研究的深入，現(xiàn)在 已經(jīng)認(rèn)識到趨化因子不但對白細

10、胞具有趨化作用，而h在免疫細胞和器官的發(fā)育、 免疫應(yīng)答過程、炎癥反應(yīng)、病原體感染、創(chuàng)傷修復(fù)及腫瘤形成和轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮 廣泛的生理和病理作用14-16。隨著近年來對趨化因子及其受體研究的深入， 國內(nèi)外眾多學(xué)者均己發(fā)現(xiàn)其二者結(jié)合在自身免疫性疾病中對t細胞的募集及趨化 進行作用，并將相應(yīng)t細胞聚集至靶器官發(fā)生組織器官損傷。wenzel等在研究系 統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)時發(fā)現(xiàn)cxcl10及其受體cxcr3的結(jié)合可定向招募細胞毒性t 細胞進入靶器官最終造成皮膚損害；barone等研究表明，干燥綜合征(ss)患者 淚腺角膜上皮細胞cxcl9、cxcl10、cxcl11及受體cxcr3表達均升高；goulv

11、estre 等通過對甲狀腺組織屮表達的細胞因子和相應(yīng)趨化因子研究，得出ccl21.cxcl12. cxcl13. ccl22在門身免疫性甲狀腺疾病(aitd)患者的甲狀腺組織中的表達增加, 其中自身免疫性疾病甲狀腺組織中冇異位二級淋巴濾泡形成的cxcl12、三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文中期報告cxcl13. ccl22的表達顯著增加。目而對于趨化因了及其受體的研究點在于趨 化因子在自身免疫性疾病屮所起的募集、趨化t細胞至靶器官的作用，但其在川 崎病中的具體作用研究尚不多，廿前的研究對于趨化因子ccl5及具受體ccr5在 川崎病屮的表達及意義研究較少，缺乏相關(guān)文獻的支持以及數(shù)據(jù)的保障，同吋木 文研究的內(nèi)容以及提取方法相對復(fù)朵。由此要求研究屮必須要花費更多的精力以 及時間以保證研究結(jié)果的合理性與準(zhǔn)確性，同時也需要進一步進行文獻的搜集與 整理，特別是對于國外文獻的搜集與調(diào)查，從而為木文的研究奠定基礎(chǔ)。（5）如期