1、微生物限度方法適用性試驗報告第 10 頁 共 11 頁微生物限度方法適用性試驗報告 文件編號：XXX XXXX制藥有限公司 微生物限度方法適用性試驗報告起草人_ 部門_ 日期_審核人_ 部門_ 日期_批準人_ 日期_ _ 1、概述 本公司主要產品之一，本產品已進行批量生產并已進行工藝驗證,微生物檢驗相對穩定，由于中華人民共和國藥典2015年版對微生物限度檢查方法改變，其產品的微生物檢驗方法和培養基發生改變，可能影響檢驗結果的準確性。為確保檢測方法的準確性及適應性，測定方法的可靠性進行驗證，根據樣品特性制定檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進行試驗，根據驗證結果判斷是否符合驗證標準。2、驗證依據：

2、中華人民共和國藥典2015版 四部通則1105非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法、1106非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法、1107非無菌藥品微生物限度標準。3、驗證目的建立該產品的微生物限度檢查方法，并對其有效性進行評價，確保試驗方法的完整性，保證檢驗結果的可靠性。4 、驗證小組成員及職責 人 員姓 名職 位職責組 長質量部經理質量負責人負責驗證報告的審核、批準。副組長質量部QC主任1.負責對確認記錄、數據進行復核，確認報告的總結。2.負責對驗證及檢驗記錄、數據、結果進行分析和匯總。成 員檢驗人員1、負責驗證報告的起草2、負責檢驗數據的收集、記錄的填寫5、主要驗證用儀器儀表的校驗儀

3、器名稱規格型號檢定情況檢定部門立式壓力蒸汽滅菌器生化培養箱超凈工作臺結果：確認人： 日期：6、驗證用菌種及培養基菌種名稱編號（批號）來 源購進日期傳代日期傳代次數銅綠假單胞菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉培養基、緩沖液名稱批號配制批號有效期至胰酪大豆胨瓊脂培養基胰酪大豆胨液體培養基沙氏葡萄糖瓊脂培養基麥康凱液體培養基麥康凱瓊脂培養基pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液復核人日 期7、試驗菌懸液制備7.1 需氧菌總數計數方法適用性試驗、霉菌和酵母菌總數計數方法適用性試驗菌株培養接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌于胰酪大豆胨瓊脂培養基上，于30-35培養3天；接種白

4、色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨瓊脂培養基上，于30-35培養5天，用于需氧菌總數計數方法適用性試驗。接種白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖瓊脂培養基上，于20-25培養5天，用于霉菌和酵母菌總數計數方法適用性試驗。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮培養物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養物加人35ml含0.05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑

5、曲霉孢子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在28，可在24小時內使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28 ,在驗證過的貯存期內使用。7.2 大腸埃希菌檢查方法適用性實驗菌株培養將大腸埃細菌接種于胰酪大豆胨瓊脂培養基上，30-35培養18-24小時，取培養物適量，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在28，可在24小時內使用。8、供試液的制備取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，制成1：10的供試液。8.1需氧菌總數、霉菌及酵母菌總數計數方法適用性試驗8.1.1試驗組 取上述1

6、:10供試液1ml和不大于100cfu試驗菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉），分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。取上述1:10供試液1ml和不大于100cfu試驗菌（白色念珠菌、黑曲霉），分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。胰酪大豆胨瓊脂培養基用于需氧菌總數計數；沙氏葡萄糖瓊脂培養基用于霉菌和酵母菌總數計數。8.1.2供試品對照組 取規定量供試液，按平皿法測定供試品本底菌數。8.1.3菌液對照組：測定所加的菌液數。8.1.4陰性對照組：

7、取試驗用的稀釋液1ml，置無菌平皿中，注入培養基，凝固，倒置培養。每種計數用的培養基各制備2個平板，均不得有菌生長。8.1.5培養：需氧菌總數計數平板倒置于3035培養箱中培養3天，霉菌、酵母菌總數計數平板倒置于2025培養箱中培養5天。8.1.6回收率計算：8.1.7結果判斷：試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數減去供試品對照組的平均菌落數的值占菌液對照組的平均落數的百分率）應在0.52范圍內。8.2控制菌檢驗方法驗證8.2.1大腸埃希菌：8.2.1.1試驗組：取1：10的供試液10ml和不大于100cfu的大腸埃希菌菌液1ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養基中，混勻，3035培養18

8、小時。8.2.1.2供試品對照組：取1：10的供試液10ml接種至100ml胰酪大豆胨液體培養基中，混勻，3035培養18小時。8.2.1.3陽性對照組：取不大于100cfu的大腸埃希菌菌液1ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養基中，混勻，3035培養18小時。 8.2.1.4 陰性對照組：取試驗用的稀釋液10ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養基中，混勻，3035培養18小時。取上述培養物1ml接種100ml麥康凱液體培養基中，4244培養24小時。取麥康凱液體培養物劃線接種于麥康凱瓊脂培養基平板上，3035培養 18小時。若麥康凱瓊脂培養基平板上有菌落生長，應進行分離、純化適宜的鑒

9、定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。8.2.1.6結果判斷：在麥康凱瓊脂培養基平板上，陰性對照組與供試品對照組應無菌生長，其他各試驗組應有菌落生長，并且經鑒定，顯MUG與靛基質陽性。9、需氧菌總數計數方法適用性試驗記錄菌種產品批號試驗組（cfu）供試品對照組（cfu）菌液組（cfu）陰性對照組（cfu）回收率皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉結論檢驗人日期復核人日期10、霉菌及酵母菌總數計數方法適用性試驗記錄菌種產品批號試驗組（cfu）供試品對照組（cfu）菌液組（cfu）陰性對照組（cfu）回收率皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均白色念珠菌黑曲霉結論檢驗人日期復核人日期11、大腸埃希菌檢查方法適用性試驗記錄產 品 批 號試驗組麥康凱瓊脂培養基BL（ ml） MUG靛基質供試品對照組試 驗 組陽性對照組陰性對照組供試品對照組試 驗 組陽性對照組陰性對照組供試品對照組試 驗 組陽性對照組陰性對照組結論檢驗員日期復核人日期 備注：“+”為有菌生長或呈陽性，“-”為無菌落生長或呈陰性 。12、結論：本品按中國