1、tie2在鼠急性肺損傷中的表達及意義【摘要】目的探討tie?2在急性肺損傷 (acutelunginjury, ali)中的表達及意義。方法24只 wistar大鼠隨機分為對照組與模型組，每組各12只，對照 組采用假手術處理，模型組采用盲腸結扎穿孔術 (cecalligationandpuncture, clp)制作 ali 模型，分別于假手術及clp術后12h處死全部大識，取右肺石蠟包埋， 行he染色，采用免疫組織化學法檢測tie?2在鼠肺組織中 的表達分布。結果對照組在支氣管上皮細胞、平滑肌細胞 及內皮細胞表達tie?2。模型組在肺泡間隔及肺泡腔內中 性粒細胞及巨噬細胞均有強陽性的表達，在

2、tie?2陽性的 炎癥細胞附壁區域，內皮細胞tie?2表達亦增強，支氣管 上皮細胞表達相對減弱，平滑肌細胞表達未見明顯差別。 結論ali模型鼠肺組織中中性粒細胞及巨噬細胞表達tie?2, 同時內皮細胞ti e?2表達增強?！娟P鍵詞】急性肺損傷；tie?2；盲腸結扎穿孔術 【a bstract】obj ectivetoexp loreexpres sionandsig ni ficanceo fan dtie?2r ecep torina ratmo delof acutel ungi njury. m eth odsthera tm odelofacu t elunginjur y(ali)w

3、asma debycecalli gationandp u ncture(cl p). wistarr ats weredev ided intoco ntrol group andmod elgr oup, and wer ekilledl 2h oursafter shamingorcl p. rightlung swereembedd edinexpres s ionanddis tr ibutiono fti e?2rece ptor sinlun gwaso bserv edbylm muno histoch emi stry. res ul tstie?2re c eptorswe

4、re expressedin bronchialep ithelialce 1 is, smooth mu sclecell san dendoth elia lcells incon trolw erehig here xpressi ons onneutro ph ilsandmac r ophagesinl ungintersti tialandalve olarspace. i nadhesion lo cationof tie ?2recep tors positi veinf lamma toryce 11s, therewa shi gherstai ni nginendot h

5、 elialcells , whereasthe rewererelat ivelydecre a sedexpres si onsonbro nch ialepit heli alcell s. therewer enodis tine tdiffer enc eonsmoot hm usclecell s betweentwo neutrophils andmacropha gesexpress t ie?2recep to rs, andme anw hileend othe lialce llsha vehig herexp ress ionsint hel ungofthe ra t

6、modelofa c utelunginj ury.keyw ords acute 1 unginjury , t ie?2, cec all igation andp unctur e急性肺損傷(acutelu ngl njury, al i)常是嚴重感染 中毒癥(severeseps is)的嚴重并發癥，病理上表現為肺部 大量炎性細胞的浸潤，肺水腫的形成。tie?2為血管生成素 (angio poi etin, an g)家族受體，研究發現tie?2在炎癥反應中起重要作用，在鼠ali模型中存在ti e?2表達下降 及磷酸化受阻現象1，但其具體表達分布不明。本研究 通過盲腸結扎穿孔術（cec

7、alliga tionandpun c ture, clp） 誘導sepsis制作鼠al i模型，檢測t ie?2在ali鼠肺臟中 的表達分布并探討其在ali中的意義。1材料與方法實驗主要試劑濃縮型t i e?2兔抗鼠多克隆抗體、sabc 試劑盒及d ab顯色試劑盒均購自中杉金橋生物技術有限公 司。實驗分組健康清潔級成年雄性wi star大鼠24只（山 東大學實驗動物中心提供），隨機分為兩組，對照組12只 模型組12只。ali大鼠模型制備及標本處理ali大鼠模型制備：術前大鼠禁食12h，禁水8h, 3% 水合氯醛行腹腔麻醉，75 %乙醇消毒腹部，沿腹白線中段作 一長cm的切口，剪開皮膚和肌層，

8、探查腹腔分離盲腸，在 距盲腸末端1 cm處用3?0絲線結扎盲腸，注意避免結扎盲 腸動脈及引起腸梗阻，用1 6g穿刺針在盲腸游離面（腸系 膜對面）上貫穿3次，針孔間距約3mm，并擠出少許內容 物，還納腸管。術畢逐層關腹，并于腹壁皮下注射林格液 3 ml/100 g抗休克處理。術后自由進食飲水。對照組僅做無 菌開腹與盲腸翻動。標本處理：分別于假手術及clp術后12h處死全部大鼠，剪取右肺組織，常規石蠟包埋，he染色觀察肺部病理 變化，免疫組化sabc法觀察tie?2表達分布，具體步驟按 試劑盒說明操作。2結果2. 1肺組織病理學變化對照組大鼠肺臟光鏡下肺組織結 構清楚，肺間質有僅有少許炎性細胞，肺

9、泡壁結構完整，肺泡內未見水腫液及肺泡萎陷模型組光鏡下見肺泡間隔增厚，肺間質充血水腫，大量中性粒細胞及少量巨 噬細胞浸潤，部分肺泡萎縮塌陷（圖2）。免疫組化病理結果分析對照組tie?2主要表達于支氣管 上皮細胞（圖3 ）、內皮細胞（圖4），在支氣管及血管平 滑肌細胞亦有較弱的表達，肺泡腔未見有明顯陽性表達細 胞（圖5）。模型組支氣管上皮細胞表達相對減弱（圖6），在tie?2陽性的炎癥細胞附壁區域，內皮細胞tie?2表達增 強（圖7），在肺泡間隔及肺泡腔內中性粒細胞及巨噬細胞 均有強陽性的表達（圖8），平滑肌細胞表達未見明顯差別。 3討論眾多肺內外因素均可引起ali，其中sepsis是重要的 肺外

10、因素。cl p術由腸源性感染誘導sepsi s致ali，能較 好的模擬疾病的自然病理生理過程。本實驗大鼠在clp術后12h肺臟病理變化以肺泡中隔變化為主，表現肺間質充血 水腫，大量中性粒細胞及少量巨噬細胞浸潤，肺泡結構破 壞，與國外的模型報道相符2。tie?2廣泛表達于成人脈 管系統中3 ，對維持正常血管完整性有重要作用。tie?2 配體包括ang?l、ang ?2、ang?4 ,其中ang?l可以激動 tie?2,促進內皮細胞遷移，拮抗凋亡，募集血管周圍支持 細胞，穩定血管，防止滲漏，a n g?2作用較復雜，通常認 為可以抑制ti e?2，對血管起去穩定作用，但在體外實驗 中高濃度或長時間

11、刺激tie?2時也可激動受體4, 5， an g?4可以激動t ie ?2，但研究較少。最新的研究表 明，ang /tie?2系統在炎癥反應內皮細胞活化中起重要作用 6。lemieux等7 通過rt?pcr、免疫組化及共聚焦顯微 鏡首次發現tie?2表達于中性粒細胞，且ang?2可以較弱的 激動中性粒細胞t ie ?2。在內皮細胞t i e?2的活化可誘導 p選擇素的定位，導致中性粒細胞粘附能力的增加，而中性 粒細胞tie?2活化可以進一步增強其粘附能力。本研究亦 發現在tie?2陽性的中性粒細胞附壁區域，內皮細胞tie?2 亦染色增強，提示兩者tie?2可能同時存在活化現象。mu rd oc

12、h等8通過體外細胞實驗發現低氧血癥能上調單核 細胞？巨噬細胞較強強度表達tie ?2，其中組織巨噬細胞有 著最強的表達，推斷a ng?2可能趨化tie ?2陽性單核細胞的游走至炎癥區或腫瘤組織，易化血管新生。本研究亦發 現肺泡巨噬細胞高強度的表達t ie?2,在大血管及支氣管 粘膜下層亦有陽性表達tie?2的巨噬細胞，這些細胞作用 仍不清楚，是否與ali損傷后組織修復有關有待進一步研 究。綜上所述，本研究表明a li時肺組織中性粒細胞及巨 噬細胞表達ti e?2,同時內皮細胞tie?2表達增強，tie?2 參與了ali的病變過程?！緟⒖嘉墨I】1 ma hroom, tham i rn,salm

13、an q, etofangi opo ietinex pres sionby bacte riall ipopol ysac charidej . amjphys io llungcell m olphysiol,2017,294(5) : l955?963.2 oztur ke ,demirbi lek s,begez ,etl efluno midea ttenu atethe seps is?indu ced acutelun gi njuryj p ediatrsurg int, 2017, 24 :899?905.3 wongal，h aroonza, wer ners,et exp

14、r ession andph ospho rylati onin angioge nic andquies ce ntadultti s sues j ci rcrep，1997,81:567?74.4 korff t，kimminas，ma rtiny?b aron g, etve sselm atura tionin a3?d imensio nal spheroid a.lcoculture m odel:direc tcontactwit hsmoothmusclecellsreg u latesendo th elialcel lqu iescenc eand abroga tesv

15、e gfres ponsiv enes s j . fa seb j, 2001, 1 5(2) :447?45 7 .5 teic hert?kulisz ewskak, mai s onpierrep c, jonesn, e tac tionofa ngio poieti n?2in afibr inmatr ixmo delofan gio genesisi sa ssociated w ithactivat ionoftie2 j cardiovas cres，2001, 4 9:659?670 .6 fie dler u, reis sy, sc harpf enecke rm, e t?2sens iti zesendot he lialcells t otnf?alpha andhasacruc ialroleinth einduction o finflamma ti onj . na tme d, 2017, 12(2) : 1717172.7 lemieux cr, malibaj，fa vierjf, et c andirectly activateend oth