1、抗菌藥物最小抑菌濃度的測定一、概念：最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration, mic）：在特定環境下孵育24小時，可抑制某種微生物出現明顯增長的最低藥物濃度即最小抑菌濃度，用于定量測定體外抗菌活性。二、實驗目的：通過采用常量稀釋法, 檢測幾種抗菌藥物對-菌株的最小抑菌濃度( mic) , 對臨床診斷用藥有指導作用。三、儀器和試劑：mh液體培養基無菌試管分光光度計0.5麥氏標準比濁管mh瓊脂微量加樣器蒸餾水吸頭0.1mol磷酸緩沖液（ph6.0）接種環無菌生理鹽水無菌平板無菌濾膜0.22無菌針筒金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌抗菌藥物四、檢驗方法：

2、液體稀釋法、瓊脂稀釋法、e試驗（e test）液體稀釋法操作步驟：抗菌藥物原液配置mh液體試管中抗菌藥物梯度稀釋待測菌和質控標準菌觀察結果1.抗菌藥物原液制備 抗菌藥物貯存液濃度不應低于1000g/ml(如1280g/ml)或10倍于最高測定濃度。溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進行計算。例如：需配制100 ml濃度為1280g/ml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為750g/mg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為182.6 mg。根據公式計算所需稀釋劑用量為：（182.6 mg750g/ml）/1280g/ml=107.0ml，然后將18

3、2.6 mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表1。配制好的抗菌藥物貯存液應貯存于-20環境，并注意抗菌藥物的保存期限。表1 稀釋法中常用的抗菌藥物容積稀釋法藥物濃度 （ug/ml） 取藥液量 （ml） 加稀釋劑量 （ml） 藥物稀釋濃度 （ug/ml） 瓊脂或肉湯中最后含藥濃度（ug/ml） 藥物：瓊脂（或肉湯）=1：95120512051201280128012801601601602020202.52.52.51111111111111110131371371371375120256012806403201608040201052.51.250

4、.60.351225612864321684210.50.250.1250.060.032.藥敏試驗用抗菌藥物濃度范圍 根據nccls抗菌藥物敏感性試驗操作標準，藥物濃度范圍應包含耐藥、中介和敏感分界點值，特殊情況例外。3.培養基 nccls推薦使用mueller-hinton（mh）肉湯，ph7.27.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養基中生長良好。在測試葡萄球菌對苯唑西林的敏感性時，應在肉湯中加入2%（w/v）氯化鈉，按制造廠家的要求配制需要量的mh肉湯。嗜血桿菌屬菌使用htm肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%5%溶解馬血的mh肉湯。4.接種物的制備 有2種方法配制接種物，一是細菌生長方法

5、，用接種環挑取形態相似待檢菌落3-5個，接種于4-5ml的水解酪蛋白（mh）肉湯中，35孵育2-6h。增菌后的對數生長期菌液用生理鹽水或mh肉湯校正濃度至0.5麥氏比濁標準，約含12108cfu/ml。二是直接菌落懸液配制法，對某些苛養菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養1824h的菌落調配成0.5麥氏比濁標準的菌懸液。用mh肉湯將上述菌懸液進行1100稀釋后備用。注意應在15分鐘內接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養，以檢查接種物純度。5.稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種 取無菌試管（13100mm）13支，排成一排，除

6、第1管加入1.6mlmh肉湯外，其余每管加入mh肉湯1ml，在第1管加入抗菌藥物原液（如1280g/ml） 0.4ml混勻，然后吸取1ml至第2管，混勻后再吸取1ml至第3管，如此連續倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含藥物的生長對照。此時各管藥物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25g/ml。然后在每管內加入上述制備好的接種物各1ml，使每管最終菌液濃度約為5105cfu/ml。第1管至第11管藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125g/ml。另外設對照3支，別為肉湯對照、質控菌對照和

7、待測菌生長對照。6.孵育 將接種好的稀釋管塞好塞子，置35普通空氣孵箱中孵育1620h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育2024h；對可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬古霉素腸球菌應持續孵育滿24h。7.結果判斷與解釋 在讀取和報告所測試菌株的mic前，應檢查生長對照管的細菌生長情況是否良好，同時還應檢查接種物的傳代培養情況以確定其是否污染，質控菌株的mic值是否處于質控范圍。以肉眼觀察，藥物最低濃度管無細菌生長者，即為受試菌的mic。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點判斷，與陽性生長對照管比較抑制80%細菌生長管藥物濃度為受試菌mic。【mic參考范圍】表2稀釋法質控標準菌株mic預期值

8、范圍（ug/ml）抗菌藥物 金黃色葡萄球菌 （atcc29213） 糞腸球菌 （atcc29212） 大腸埃希菌 （atcc25922） 銅綠假單胞菌 （atcc27853） 青霉素g苯唑西林 甲氧西林 氨芐西林 哌拉西林 頭孢噻吩 頭孢唑啉 頭孢呋辛 頭孢他啶 頭孢唑肟 氨曲南 慶大霉素 阿米卡星 克林霉素 紅霉素 萬古霉素 環丙沙星 0.251.00.120.50.52.0-0.120.50.251.0-0.121.0-0.060.250.120.50.52.00.120.51.04.0-0.52.0-1.04.01.04.00.252.0-2.08.01.04.04.0161.04.02

9、.08.00.060.50.030.120.060.250.251.00.54.0-0.0040.015-1.04.0-1.04.016642.08.01.04.02.08.0-0.251.0常用抗菌藥物稀釋和配制方法藥物溶媒配制方法青霉素n.s一次氨芐西林n.s一次氨芐西林氟氯西林n.s一次氨芐西林舒巴坦n.s一次阿莫西林氟氯西林n.s一次阿莫西林舒巴坦n.s一次阿莫西林克拉維酸n.s一次奈夫西林n.s一次阿洛西林5%gns，5-10%g.s二次，每g先用10ml注射用水溶解美洛西林5%gns，5-10%g.s一次美洛西林舒巴坦n.s,5%gns,5-10%g.s二次，先用適量注射用水或生理

10、鹽水溶解羧芐西林5%g.s一次替卡西林克拉維酸5%g.s二次，先用10ml注射用水溶解哌拉西林無一次哌拉西林他唑巴坦5%g.s，ns一次哌拉西林舒巴坦5%g.s，ns一次苯唑西林n.s，g.s一次頭孢唑啉n.s，g.s二次，先用注射用水溶解五水頭孢唑啉n.s，5%g.s二次，先用注射用水溶解頭孢硫脒n.s一次頭孢噻吩n.s，5%g.s二次先4g用20ml注射用水溶解頭孢呋辛無一次頭孢美唑n.s，g.s一次頭孢替安n.s，g.s一次頭孢替唑n.s，g.s一次頭孢尼西n.s，5-10%g.s一次頭孢西丁n.s，5-10%g.s一次頭孢孟多n.s，5%g.s一次頭孢他定n.s，5%g.s一次頭孢曲松

11、n.s，5%g.s二次，先用注射用水、n.s、g.s配成0.1g/ml頭孢哌酮g.n.s一次，終濃度為5-25mg/ml頭孢哌酮舒巴坦n.s，5%g.s二次，1g水溶后總量4ml，再用同一溶媒溶解。頭孢哌酮他唑巴坦n.s，5%g.s二次先用注射用水、n.s 5-10ml溶解拉氧頭孢n.s，5%g.s一次頭孢米諾n.s，5-10%g.s一次頭孢唑肟n.s，10%g.s一次頭孢地嗪n.s，林格，5%g.s一次頭孢甲肟n.s，g.s一次頭孢匹胺n.s，g.s一次頭孢吡肟n.s，g.s一次頭孢匹羅n.s，g.s一次亞胺培南西司他汀n.s，g.s一次美羅培南n.s，5-10%g.s二次，可先用合適液體配

12、制氨曲南n.s，5-10%g.s二次，1g先用至少3ml注射用水溶解，終濃度不超過2%阿奇霉素n.s，5%g.s二次先用注射用水稀釋成0.1mg/ml，再稀釋成終濃度為1-2mg/ml依替米星n.s，5%g.s一次多西環素n.s，5%g.s二次先用注射用水或其他溶液稀釋成10mg/ml，再溶解成0.1-1mg/ml克林霉素無一次萬古霉素n.s，5%g.s二次先用10ml注射用水溶解，再加入至少200ml溶液中。滴注1小時。去甲萬古霉素n.s，5%g.s二次先用注射用水溶解，再用至少200ml液體慢滴。替考拉寧n.s，5%g.s二次先用注射用水溶解，雙手滾動小瓶至藥粉全部溶解。如果出現泡沫，靜置

13、15分鐘。培氟沙星5%g.s一次氟羅沙星5%g.s一次洛美沙星n.s，5%g.s二次，先用5ml注射用水溶解左氧氟沙星n.s， g.s一次加替沙星n.s，5%g.s一次，終濃度為2mg/ml依諾沙星5%g.s一次帕珠沙星n.s一次利福霉素5%g.s一次氟康唑無一次兩性霉素b5%g.s（用ns有沉淀）二次5ml注射用水溶解25mg藥物，終濃度0.1mg/ml，避光慢滴6h以上阿昔洛韋n.s，5%g.s二次每0.1g用10ml注射用水溶解成50g/l。再用大瓶稀釋成至少100ml。終濃度不超過7g/l。慢滴。注意水化更昔洛韋n.s，5%g.s先用n.s或注射用水溶解，再用大瓶稀釋成100ml。濃度不超過10mg/ml，一次最大量6mg/kg聚安洛韋n.s，5%g.s一次膦甲酸鈉無一次注意水化（2.5l/d），可適當用利尿劑，慢滴阿糖腺苷無一次日劑量10mg/kg病毒唑n.s，5%g.s一次1mg/ml，慢滴磷霉素n.s，5%g.s先用注射用水溶解。慢滴1-2小時。總結：1. n.s溶解：青霉素、氨