1、2021-10-231一、目的1、觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū) 分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法，學(xué)習(xí)觀察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法；2、了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細(xì)菌鑒定中的 重要作用；3、了解吲哚、甲基紅、伏-普反應(yīng)的原理及其 在腸道菌鑒定中的意義和方法。第1頁/共14頁2021-10-232二、基本原理 酵母菌以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的分裂繁殖。美蘭是一種無毒性的染料，可用于鑒別細(xì)胞的死活。 糖分解試驗(yàn)是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓穷愇镔|(zhì)的能力上有很大的差異。發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨，指示劑，倒置的德漢氏

2、小管和不同的糖類。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，溴甲酚紫指示劑可由紫色（pH6.8）變?yōu)辄S色（pH5.2）。氣體的產(chǎn)生可由倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明。 吲哚、甲基紅、伏-普這三個(gè)試驗(yàn)主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌，多用于水的細(xì)菌學(xué)檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但在飲用水中若超過一定數(shù)量，則表示受糞便污染。產(chǎn)氣桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水時(shí)要將兩者分開。第2頁/共14頁2021-10-233三、器材1、菌種：釀酒酵母、熱帶假絲酵母培養(yǎng)約2d的培養(yǎng)物；大 腸桿菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌等。2、培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，PDA液體培養(yǎng)基、 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試 管、蛋白胨水培

3、養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基3、試劑：呂氏堿性美蘭染色液、中性紅染色液、碘液、甲 基紅指示劑，40KOH，5-萘酚，乙醚，吲 哚試劑等。4、儀器或其他用具： 顯微鏡、酒精燈、載玻片、 蓋玻片等。第3頁/共14頁2021-10-234四、操作步驟1、酵母菌的形態(tài)觀察：（1）酵母菌死活細(xì)胞的鑒別： 取菌液 滴加美蘭染色液 蓋上蓋玻片 鏡檢。（2）酵母菌液泡的觀察： 取菌液 滴加中性紅染色液 蓋上蓋玻片 鏡檢。（3）酵母菌細(xì)胞中肝糖粒的觀察： 取菌液 滴加碘液 蓋上蓋玻片 鏡檢。2、細(xì)菌的生理生化反應(yīng)： 將供試菌株分別接種在相應(yīng)的培養(yǎng)液中，置適宜的溫箱中恒溫培養(yǎng)。在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，選用相應(yīng)的指示劑測(cè)定和觀察試驗(yàn)結(jié)果。第4頁/共14頁2021-10-235第5頁/共14頁2021-10-236第6頁/共14頁2021-10-237第7頁/共14頁2021-10-238吲哚試驗(yàn)第8頁/共14頁2021-10-239第9頁/共14頁2021-10-2310乙酰甲基甲醇試驗(yàn)( (伏- -普) )第10頁/共14頁2021-10-2311第11頁/共14頁2021-10-2312五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、繪圖說明你所觀察到的酵母菌形態(tài)特征；并分別說明經(jīng)美蘭染色后，酵母菌的活細(xì)胞、死細(xì)胞和衰老細(xì)胞被染成何種顏色，為什么？2、列表說明各供試菌對(duì)糖類的分解利用情況和吲哚、甲基紅、伏-普試驗(yàn)結(jié)果。第12頁/共1