1、病毒的純化、檢測和病毒病的診斷方法病毒的純化 stanley 在1935年首次提純tmv 病毒純化對病毒學發展所起的作用十分巨大.病毒的純化前的預備工作 1.繁殖病毒自然感染病毒的生物體的器官組織或細胞的量往往難以滿足提純需求,需要用人工接種寄主來大量繁殖病毒.病毒的純化前的預備工作 首先要選擇最適合的寄主對植物病毒,長期以來都是接種整體植物一般說,用機械摩擦接種比昆蟲媒介或嫁接等方法簡便.病毒的純化前的預備工作 利用生物學方法純化病毒采集自然感染的生物體組織器官作原材料來提純某種病毒時,混合感染的概率很大生物學純化:病毒在很多植物或動物細胞上產生一個個單個病毒株體病毒的純化前的預備工作病毒純

2、化的基本原理 病毒的釋放和萃取病毒顆粒主要存在與寄主組織細胞內,因此提純的第一步是設法破碎寄主感病的細胞病毒純化的基本原理大多數病毒毒粒的等電點在ph4.0左右,而最穩定、溶解度最大是在ph7.0左右此時可用0.1mol/l磷酸緩沖液來處理一般破碎細胞、萃取以及以后各提純步驟都在4左右進行操作。病毒萃取液的分級純化 清除較大的細胞器去除較大的細胞組分如：細胞核、線粒體、葉綠體和細胞壁等病毒萃取液的分級純化 去除寄主蛋白質1、沉淀法用各種沉淀劑來沉淀，最常用的是硫酸胺，其溶解度高，更經濟。不同飽和度的硫酸胺可沉降水合化程度不同的病毒或蛋白質病毒萃取液的分級純化 范圍廣泛的有機化合物的親水性程度不

3、同，通過與蛋白質競爭水分，使蛋白質脫水而沉淀。最常用的是乙醇和丙酮。病毒萃取液的分級純化 離心法由于大多數病毒顆粒在某種介質內的沉降速度與寄主組分有差別，使用離心法可有效地純化病毒。病毒萃取液的分級純化 差速離心法差速離心即將低速離心所得澄清液進行超高速離心，使大部分可溶性蛋白質和小分子化合物留在上清液中，而病毒顆粒等則保留在沉降物中病毒萃取液的分級純化 密度梯度離心先在一個吊籃式離心管內由下而上鋪以濃度遞減的惰性致密介質，如蔗糖、甘油等病毒萃取液的分級純化 凝膠色譜法這是利用化合物分子大小和擴散速率來區分它們的方法病毒萃取液的分級純化 電泳一般較少用電泳方法制備病毒，因制備量少且繁雜。病毒的

4、檢測定性或定量的病毒檢測的理論依據是病毒的理化性質，不同的方法所依據的性質不同，因此，檢測結果也不一定完全相同。侵染力的測定 侵染力的測定是對病毒活性的測量，也就是病毒與寄主特異反應的測定。 定量測定病毒活性又稱滴定。與寄主產生某種反應所用最小病毒量叫侵染單位。侵染力的測定 某病毒制品的效價是指每單位體積中侵染單位的數量。 動物病毒的滴定方法是計量病毒在鋪滿的菌落層或動物單層細胞上產生的噬斑或濁斑數。侵染力的測定 一個病毒懸浮液的效價是以單位體積內的侵染單位來表示，在一定條件下即相當于毒粒數目。病毒的培養1、原代細胞猴腎細胞、兔腎細胞、人胚胎腎細胞2、二倍體細胞纖維原細胞3、連續細胞系rd、m

5、dck、llc-mk2血清學方法 病毒顆粒產生免疫原性的活性部分主要是外殼蛋白表面上的抗原決定簇.1、免疫沉淀法抗原和抗體在有電解質存在下可以特異地結合形成沉淀血清學方法 中和試驗此法常用于測知人、畜體內是否有中和抗體存在，及其該中和抗體的效價。血清學方法 補體結合試驗此法主要利用補體的兩個特性：一是可與任何抗原抗體復合物結合；二是免疫裂解反應必須有它的參與。血清學方法 凝膠擴散法在瓊脂凝膠中擴散的病毒或其抗原與其抗體相遇形成沉降帶血清學方法 酶聯免疫吸附測定法酶標記的抗原或抗體間的特異性反應，并通過檢測酶的顏色反應而定性定量檢測抗原或抗體的方法。病毒核酸檢測 這類診斷方法針對的目標是病毒的基

6、因組核酸病毒核酸檢測 雜交法關鍵原理是在已知病毒基因組全序列或部分序列基礎上，針對某段特定序列設計一段與該序列互補的核酸序列，又稱為探針。進行檢測時，必須對探針進行標記。病毒核酸檢測 聚合酶鏈反應是一種對特定的dna片段在體外進行快速擴增的方法。病毒核酸檢測 反轉錄pcr技術核心是在逆轉錄酶的催化作用下，將rna病毒的基因組通過隨機引物逆轉錄為cdna后，再經過pcr過程將cdna進行擴增。病毒核酸檢測 依賴核酸系列的擴增 支鏈核酸信號放大系統 信號檢測技術和即時pcr 其他衍生pcr技術 微陣列技術病毒病核酸分子檢測的優化和質量控制 實驗室內的區域設置 尿苷酶防污染技術 檢測對照的設置 核酸

7、擴增檢測系統的優化 核酸樣品的分離純化sara 傳染性非典型肺炎是一種急性的呼吸系統感染，世界衛生組織(who)將其名稱公布為嚴重急性呼吸道癥候群(sars)。sars是由一種新病原引起的，臨床主要表現為肺炎，在家庭和醫院有顯著的聚集現象。 非典型肺炎是什么病？ “非典型肺炎”發生，其英文名為atypical pneumonias ,系指一組具有肺火表現，如發熱、頭痛、咳嗽、咳痰等癥狀，肺部x線片有浸潤陰影等肺炎體征，而病原體并不明確或由非細菌性病原體引發的肺炎，總稱為非典型肺炎。 非典型肺炎是什么病非典型肺炎是什么病？ 既往有因為肺炎支原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體、軍團菌、立克次體等分別引

8、發非典型肺炎流行的記載。1976年美國、西班牙、瑞典、荷蘭、英國等先后均有過因軍團非典型肺炎暴發流行的報道。因其他病原體引發非典型肺炎流行也曾發生過。 非典型肺炎的病因是什么？ 在2003年4月16日世界衛生組織宣布，經過全球科研人員的通力合作，終于正式確認冠狀病毒的一個變種是引起此次非典型肺炎的病原體。 非典型肺炎的病因是什么？ 冠狀病毒直徑為80160nm，為有包膜的單股rna病毒，屬冠狀病毒科，至少有4株可引起人類呼吸道感染，oc43株在成人中能引起發熱、胰腺炎、心包炎等。冠狀病毒感染在人群中很普遍， 冠狀病毒非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎與一般肺炎（如同細菌引起的大葉性肺

9、炎或支氣管肺炎）有相似的地方，其癥狀可為發熱、咳嗽、胸痛全身酸痛、肺部陰影等，總體表現與一般肺炎主要癥狀很相似。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 它們也有不同之處： 非典型肺炎常表現不同程度的傳染性，短期內形成不同范圍、不同程度的流行；一般肺炎不形成流行傳播，傳染性小。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 由于非典型肺炎病原體的相對不確定性，使其表現總有極其特殊的部分，特別是全身中毒癥狀重而突出，呼吸變化多而明顯，易出現呼吸衰竭；一般肺炎的病原體常為細菌，可以很快查明，表現相對規律，易于預測和把握。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎有一部分在治療和預防上目前沒有十分有效的治療藥物，

10、特別是病毒引發的非典型肺炎；一般肺炎對抗生素等藥物敏感，治療有良好效果。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 一般肺炎可因細菌毒力極強而引發死亡，如金黃色葡萄球菌肺炎、鏈球菌肺炎等，但其主要發生在體質或抵抗力較差的人群，其嚴重程度也也人體體質關系密切；非典型肺炎同樣也存在相似誘在，發病也也體質密切相關，但并沒有一般肺炎那么突出。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎可出現突發的大量內霉素血癥引發患者死亡，并且不易被控制；一般肺炎的病情變化較容易預測，預后也較易預測。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 在科學研究中，一般肺炎比非典型肺炎在各方面的研究都清楚得多，這也與非典型肺炎的不確定性有

11、直接的關系。 非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎死亡率明顯高于一般肺炎的死亡率。非典型肺炎是如何傳播的？ 本次流行的非典型肺炎病原體已經確定為冠狀病毒的變異體，主要通過呼吸道飛沫傳播。 非典型肺炎是如何傳播的？ 推斷非典型肺炎流行特點及方式可能是近距離飛沫傳播，而飛沫接觸粘膜可能是主要傳播途徑，開放的粘膜包括鼻腔、口腔、眼結膜等。 非典型肺炎是如何傳播的？ 常規通風條件好的環境下非典型肺炎不易傳播；天氣變熱，溫度高時，不利于病原體傳播，一般病毒或衣原體等在寒冷天氣下存活時間較長，而氣溫較高時病原體存活時間卻較短，不利其傳播，有利于對非典型肺炎的預防。 非典型肺炎是如何傳播的？ 冠狀病

12、毒對理代因子的耐受力較差，56，10分鐘、37數小時即可使感染性喪失。乙醚、氯仿、吐溫、乙醇（70%）、甲醛、胰酶及紫外線等均可滅活病毒。非典型肺炎的癥狀 1首先病人高燒、干咳，并沒有一般流感的流涕、咽痛等癥狀，也沒有通常感冒常見的白色或黃色痰液，偶有病人痰中帶血絲，病人出現呼吸急促的現象，個別病人出現呼吸窘迫綜合癥。 非典型肺炎的癥狀 2非典型肺炎病人白細胞正常或下降。 非典型肺炎的癥狀 3x光胸片特點與臨床狀況分離，一般的肺炎先有很重的臨床表現，后在x光胸片上可以看到肺部有陰影變化；但此次則是在臨床癥狀還不嚴重時，x光片中已顯示病人肺部有絮狀陰影，并呈快速發展趨勢。 非典型肺炎的癥狀 4通

13、常時高燒患者應用抗生素都會有明顯效果，但此病用抗生素大多無效。大多數非典型肺炎病人可自愈，個別病情惡化兇險，約有7%的病人需做人工呼吸。 非典型肺炎的癥狀 5男女之間發病無差別，從年齡看青壯年占70%，與既往的呼吸道傳染病患者老少較多不同。 非典型肺炎的癥狀 6因最初起病時防護措施不夠，醫務人員屬非典型肺炎高發人群，在家庭和醫院有聚集現象。 非典型肺炎的癥狀 7非典型肺炎第一代的傳播潛伏期在4天-5天，第二代在10天左右，其病原傳染力在傳播過程中逐漸下降。教你如何防范“非典”1. 避絕非典型肺炎病避絕非典型肺炎病毒毒 戴上口罩，以保護自己及保護其他人； 避免前往人煙稠密的地方； 打開窗戶，保持

14、空氣流通； 如無必要，應儘量避免到醫院。如有需要到醫院探病及與病人接觸，應戴上口罩，先洗手洗面才接觸其他人； 有意外遊人士，如有呼吸道感染病徵，最好不要繼續旅程，並馬上見醫生； 若發現子女染病，不要讓他們上學或託兒所。 2. 加強個人衛生加強個人衛生 保持良好個人衛生習慣，打噴嚏、咳嗽和清潔鼻子後要徹底洗手； 勤洗手及洗澡，以保持雙手及身體清潔； 勤洗衣服，以徹底清潔可能沾染在衣服上的病毒。 3. 加強抵抗力加強抵抗力 均衡飲食； 多喝開水：成人每人每日6-8杯開水，幫助排除毒素； 定時運動； 有足夠休息； 減輕壓力； 不要吸煙。 教你如何防范“非典” 教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典”教你如何防范“非典” l. 加強個人衛生，勤洗手。 教你如何防范“非典” 2. 室內經常通風換氣，保持生活、工作環境的空氣流通。搞好環境衛生，勤曬衣服和被褥等，經常