1、第十四章 免疫學檢測技術抗原和抗體可以發生高度專一性的結合 抗原和抗體可以發生高度專一性的結合抗原和抗體可以發生高度專一性的結合 抗原或抗體檢測原理：抗原或抗體檢測原理： 借助抗原和抗體在體外特異結合后抗原和抗體在體外特異結合后出現的各種現象，對標本中的抗原或抗體進行定性或定量的檢測。equivalence lattice formation抗原和抗體可以發生高度專一性的結合抗原或抗體檢測原理抗原或抗體檢測原理 免疫學免疫學（immunology）： 是研究抗原性物質、免疫系統、免疫應是研究抗原性物質、免疫系統、免疫應答的規律及免疫應答的調節的一門科學。答的規律及免疫應答的調節的一門科學。 免

2、疫的定義免疫的定義（immunity）：免疫是機體識免疫是機體識別自我與非自我的過程。排除異己，維護別自我與非自我的過程。排除異己，維護自身穩定的生理反應。自身穩定的生理反應。免疫的功能：免疫的功能： 1. 抵抗感染（抵抗感染（defense）：機體能抵抗病原微生物）：機體能抵抗病原微生物侵襲的能力。又稱免疫防御。侵襲的能力。又稱免疫防御。 抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲免疫抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲免疫2. 自身穩定（自身穩定（homeostasis）：機體在新陳代謝過）：機體在新陳代謝過程中，產生大量的衰老死亡細胞，免疫的第二個功能程中，產生大量的衰老死亡細胞，免疫的第二個功能就是清除

3、這些細胞，維持機體的生理平衡。就是清除這些細胞，維持機體的生理平衡。3. 免免 疫監視（疫監視（immunological surveillance）：機）：機體細胞會因物理、化學和病毒等生物因素的影響，使體細胞會因物理、化學和病毒等生物因素的影響，使細胞發生癌變，形成腫瘤等，機體可識別、清除這些細胞發生癌變，形成腫瘤等，機體可識別、清除這些細胞，這是免疫系統的第三個功能。當這一功能低下細胞，這是免疫系統的第三個功能。當這一功能低下或失調時，會導致腫瘤或癌癥。或失調時，會導致腫瘤或癌癥。抗原抗原 （antigen）抗原概念抗原概念 凡能刺激機體產生特異性抗體和致敏淋巴細胞，凡能刺激機體產生特異

4、性抗體和致敏淋巴細胞，并能與相應抗體或致敏淋巴細胞在體內或體外發生并能與相應抗體或致敏淋巴細胞在體內或體外發生反應的物質。反應的物質。抗原性抗原性（antigenicity）：包括免疫原性和反應原性）：包括免疫原性和反應原性二個方面二個方面 免疫原性免疫原性：抗原能：抗原能刺激機體產生抗體刺激機體產生抗體和致敏淋巴細和致敏淋巴細胞的性能。胞的性能。 反應原性反應原性：抗原與特異性抗體或致敏淋巴細胞在體：抗原與特異性抗體或致敏淋巴細胞在體內或體外發生反內或體外發生反 應的性能。應的性能。抗原抗原 （antigen）構成抗原的條件構成抗原的條件1. 異物性：機體免疫細胞能識別自身和異己物質，異物性

5、：機體免疫細胞能識別自身和異己物質，只只有外源性的物質才具有免疫原性，產生免疫反應。有外源性的物質才具有免疫原性，產生免疫反應。親緣關系越遠，差異越大，抗原性越強。親緣關系越遠，差異越大，抗原性越強。自身抗原：自身組織發生異常變異、免疫功能紊亂、眼球晶體自身抗原：自身組織發生異常變異、免疫功能紊亂、眼球晶體蛋白、精子蛋白、甲狀腺蛋白蛋白、精子蛋白、甲狀腺蛋白2. 大分子膠體：一般在大分子膠體：一般在10 kd以上以上 。 3. 具有復雜的立體結構或空間構象具有復雜的立體結構或空間構象. 如明膠分子量雖然為如明膠分子量雖然為100 kd，但結構簡單，免疫原性差。，但結構簡單，免疫原性差。抗原如何

6、被識別抗原如何被識別抗原的特異性抗原的特異性 抗原決定簇：抗原分子表面具有免疫活抗原決定簇：抗原分子表面具有免疫活性的化學基因性的化學基因,是抗原與抗體結合的部位。是抗原與抗體結合的部位。 抗原分子中抗原的特異性由抗原分子中抗原的特異性由抗原決定簇抗原決定簇決定。決定。 一種細菌可以刺激多少種抗體產生？抗原抗原一種細菌可以刺激多少種抗體產生？根據抗原的化學性質分：根據抗原的化學性質分： 天然抗原：微生物及其產物抗原如天然抗原：微生物及其產物抗原如 菌體抗原（菌體抗原（o 抗原）抗原） 鞭毛抗原（鞭毛抗原（h 抗原）抗原） 表面抗原（如大腸桿菌的表面抗原（如大腸桿菌的k 抗原）抗原） 細菌的毒素

7、抗原細菌的毒素抗原 病毒抗原（病毒抗原（v 抗原）抗原） 人工抗原：人工合成多肽、蛋白等人工抗原：人工合成多肽、蛋白等抗體（抗體（antibody)一、概念一、概念 是抗原刺激是抗原刺激b淋巴細胞淋巴細胞, 使之增殖分化成使之增殖分化成漿細胞而產生的能與抗原發生特異性反應漿細胞而產生的能與抗原發生特異性反應的的免疫球蛋白免疫球蛋白(immunoglobulin, ig)抗體（抗體（antibody)一、概念一、概念二、免疫球蛋白的基本結構二、免疫球蛋白的基本結構免疫球蛋白：在人和動物血液、組織液及其免疫球蛋白：在人和動物血液、組織液及其他分泌液中的一類結構相似的球蛋白。他分泌液中的一類結構相似

8、的球蛋白。1. 由由4 條肽鏈組成：條肽鏈組成： 2 條重鏈，條重鏈， 2 條輕鏈條輕鏈2. 一個抗體單分子：一個抗體單分子： 2 個抗原結合位點個抗原結合位點抗體（抗體（antibody)抗體（抗體（antibody，ab) 免疫球蛋白的雙重性免疫球蛋白的雙重性 免疫球蛋白是一種蛋白質，是抗體免疫球蛋白是一種蛋白質，是抗體( ab1 )；同時又可引起機體產生抗體（抗抗；同時又可引起機體產生抗體（抗抗體體,ab2 ），所以既是），所以既是抗體又是抗原抗體又是抗原。 ag ab1 ab2 抗體（抗體（antibody，ab) 免疫球蛋白的雙重性免疫球蛋白的雙重性 免疫球蛋白的功能免疫球蛋白的功能

9、 1. 與抗原結合與抗原結合 2. 激活補體激活補體 3. 組織結合組織結合 4. 調理作用調理作用 5. 抗體依賴細胞介導的細胞毒作用抗體依賴細胞介導的細胞毒作用(adcc）免疫球蛋白的功能免疫球蛋白的功能抗體（抗體（antibody) 的產生與功能的產生與功能抗體產生的主要過程 抗體的制備抗體的制備抗體的制備抗體的制備 抗血清：指抗原人工免疫實驗動物，獲得含抗血清：指抗原人工免疫實驗動物，獲得含 特異性抗體的血清。特異性抗體的血清。 多克隆抗體多克隆抗體 ( (pabpab) )： 多個抗原決定簇免疫機體多個抗原決定簇免疫機體 所產生的多種抗體的混合物。所產生的多種抗體的混合物。 單克隆抗

10、體單克隆抗體（monoclonal antibodymonoclonal antibody，mabmab） ：只針對某一特定的抗原決定簇，純度高的抗體。只針對某一特定的抗原決定簇，純度高的抗體。多克隆抗體多克隆抗體與與單克隆抗體單克隆抗體多克隆抗體多克隆抗體與與單克隆抗體單克隆抗體的制備的制備單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞 脾臟淋巴細胞脾臟淋巴細胞 （ hgprt-tk- ) hgprt-tk- ) （hgprt+tk+hgprt+tk+） 在在hathat中不能生長中不能生長 體外培養過程中死亡體外培養過程中死亡 pegpeg 雜交瘤細胞雜交瘤細胞 (hgprt+(h

11、gprt+、tk+)tk+) 在在hathat中大量長期繁殖中大量長期繁殖 克隆化克隆化 產生單抗產生單抗 第一節 免疫學檢測技術原理 抗原或抗體檢測原理： 抗原抗體的結合具有高度專一性抗原抗體的結合具有高度專一性 借助抗原和抗體在體外特異結合后出現的各種現象，對標本中的抗原或抗體進行定性或定量的檢測。對抗原或抗體進行定性或定量的檢測的原理 ab excessag excessequivalence lattice formation對抗原或抗體進行定性或定量檢測的原理 根據抗原抗體形成的免疫復合物的濃度進行定量檢測。 p 312第一節 免疫學檢測技術原理可作為抗原進行檢查的物質：l 微生物及

12、其大分子產物l 人和動物細胞l 人和動物體內的各種大分子l 各種半抗原抗原或抗體檢測原理抗原或抗體檢測原理較早的抗原抗體反應檢測方法較早的抗原抗體反應檢測方法1、凝集反應、凝集反應 （agglutination)2、沉淀反應、沉淀反應 (precipitation)3、補體結合試驗、補體結合試驗 (complement fixation test )4、中和試驗、中和試驗 (neutralization test) 一、凝聚反應一、凝聚反應(agglutination)(agglutination) 二、沉淀反應二、沉淀反應 1 1、溶液中的沉淀反應、溶液中的沉淀反應 2 2、凝膠擴散沉淀、凝

13、膠擴散沉淀 3 3、免疫電泳、免疫電泳 血清免疫電泳血清免疫電泳 火箭電泳火箭電泳 對流免疫電泳對流免疫電泳 三、補體參與的反應三、補體參與的反應 四、免疫標記的抗原抗體技術四、免疫標記的抗原抗體技術 酶聯免疫吸附（酶聯免疫吸附（elisaelisa）一、凝集反應 凝集反應是指顆粒抗原與相應抗體結合反應出現的可見性現象。顆粒抗原如完整的細菌、紅細胞等與相應抗體相混合，在一定條件下出現凝集。凝集反應中抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。一、凝集反應 凝集反應是指顆粒抗原與相應抗體結合反應出現的可見性現象。顆粒抗原如完整的細菌、紅細胞等與相應抗體相混合，在一定條件下出現凝集。二、沉淀反應 當抗原是可溶

14、性分子時，與抗體結合則形成沉淀。1、絮狀沉淀反應 一系列試管中加入等量的抗體和遞增量的抗原，在中性條件下37度保溫1-2h，便可見到絮狀的蛋白質沉淀。可用于尋找抗原抗體反應的合適比例，檢測抗原抗體的分子比。2、環狀沉淀反應 在試管中加入抗體后，小心加入相應抗原，使抗原抗體步混合，37度保溫10-20min，在二者界面上出現環狀沉淀。不能用于定量測定。3、雙向擴散：又稱瓊脂擴散，是利用瓊脂凝膠作介質的一種沉淀反應。 瓊脂是多孔的網狀結構，可使大分子物質通過，分子的擴散作用使分別兩處的抗原抗體相遇，比例合適時形成沉淀。可觀測到沉淀弧。 沉淀弧的特征與位置取決于抗原分子的大小、結構、擴散系數和濃度等

15、。當抗原、抗體存在多種體系時，會出現多條沉淀弧。二、沉淀反應雙向擴散法的操作：生理鹽水配制1%-5%的瓊脂，取4ml倒在普通載玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗體用于測定抗體效價，中心孔滴入抗體，外周孔滴入抗原，用于檢測抗原的存在和定性抗原。二、沉淀反應 抗原抗體為單一體系時，抗原濃度不同，沉淀弧的特征不同： 抗原抗體為多體系時，出現的沉淀弧有多條，彼此互不干擾。4、單向免疫擴散：又稱單向瓊脂擴散，是定量抗原的一種檢測方法。與雙向擴散不同的是在瓊脂中含有一定量的抗體，孔內加入未知量的相應抗原。在37度保溫過程中，孔內的抗原向周圍擴散，與抗體形成沉淀圈。根據沉淀圈的大小確定抗原的含

16、量 二、沉淀反應二、沉淀反應 另外還有其他眾多的免疫檢測技術和手段，其機理都利用了抗原抗體的沉淀反應。 例如微量免疫電泳、對流免疫電泳、微量免疫電泳、對流免疫電泳、火箭電泳火箭電泳等。免疫電泳二、抗原或抗體檢測的現代方法： p3121. 免疫熒光技術2. 酶聯免疫分析法3. 放射免疫分析法第一節免疫學檢測技術原理二、抗原或抗體檢測的方法： 1. 免疫熒光技術 將結合有熒光素的熒光抗體進行抗原抗體反應的技術將結合有熒光素的熒光抗體進行抗原抗體反應的技術 常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate, fitc)和羅丹明（和羅丹明

17、（rhodamine b200,rb200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結合，在藍紫光激發下，可分別出現鮮明的氨基結合，在藍紫光激發下，可分別出現鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。的黃綠色及玫瑰紅色。第一節 免疫學檢測技術原理二、抗原或抗體檢測的方法： 1. 免疫熒光技術n 直接熒光法n 間接熒光法 第一節 免疫學檢測技術原理二、抗原或抗體檢測的現代方法： p3132. 酶聯免疫分析法3. 放射免疫分析法第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用 一、基本原理： 將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術

18、，稱為免疫熒光素技術免疫熒光素技術。第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用 一、基本原理：免疫熒光素技術免疫熒光素技術第二節免疫熒光技術在食品檢測中的應用二、抗體的熒光標記 p315（一）熒光抗體的制備 攪拌法 透析法（二）熒光抗體的鑒定 鑒定指標：效價、 熒光素與蛋白質的結合比率第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用三、標本的制作 p316 食品衛生檢驗中，熒光標記抗體檢測標本的制作方法是將樣品增菌液涂在載玻片上，涂片應薄而均勻，干燥后用化學方法固定，然后進行熒光染色。第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用五、熒光顯微鏡檢查 染色當天即作鏡檢 通風良好的暗室內進行 選擇好光源或濾光片第二節

19、免疫熒光技術在食品檢測中的應用五、熒光顯微鏡檢查 染色當天即作鏡檢 通風良好的暗室內進行 選擇好光源或濾光片第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用四、熒光抗體染色方法 直接法 間接法第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用四、熒光抗體染色方法 直接法直接法 間接法間接法 使用了兩種抗體：一抗、二抗一抗、二抗 二抗如何獲得？二抗如何獲得？第二節 免疫熒光技術在食品檢測中的應用六、在食品檢驗中的應用 p317 免疫熒光檢測技術已經廣泛應用于醫藥衛生領域，可檢測細菌、病毒、寄生蟲等，在食品衛生領域也應用的越來越多。第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用 一、基本原理 p319 利用酶催化底物反應的生物放

20、大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學反應的檢測敏感性的一種標記免疫技術。酶聯免疫吸附劑測定 enzyme linked immunosorbent assay，elisa第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用elisa 基本原理 使抗原或抗體結合到某種固相載體表面結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。 使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗酶標抗原或抗體體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用elisa 基本原理 在測定時，把受檢酶標抗體或抗原和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌洗滌的方法使固相載體上形成的抗

21、原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析性或定量分析。第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用elisa 基本原理 堿堿性性磷磷酸酸酶酶或或過過氧氧化化物物酶酶第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用酶聯免疫吸附劑測定 enzyme linked immunosorbent assay，elisa 二、elisa的種類 p320直接法測定抗原直接法測定抗

22、原間接法測定抗體間接法測定抗體雙抗體夾心法測定抗原雙抗體夾心法測定抗原雙抗原夾心法測定抗原雙抗原夾心法測定抗原競爭法測定抗原競爭法測定抗原第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用二、elisa的種類雙抗原夾心法測定抗原第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用二、elisa的種類雙抗體夾心法測定抗原 elisa可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體，酶標記的抗原或抗體，酶作用的底物。 根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。（一）雙抗體夾心法（一）雙抗體夾心法 elisa可用于測定抗原

23、，也可用于測定抗體。可設計出各種不同類型的檢測方法。（一）雙抗體夾心法（一）雙抗體夾心法雙抗體夾心法雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下： （1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。 （2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。 （3）加酶標抗體： （4）加底物：（一）雙抗體夾心法（一）雙抗體夾心法雙抗體夾心法雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下： （1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：（2）加受檢標本：（3）加酶標抗體：使固相免疫復合物

24、上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。 （4）加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。 根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。 二、elisa的種類雙抗體夾心法測定抗原三、抗體的酶標記 p321 戊二醛法 過碘酸鹽氧化法第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用四、酶與底物 酶與抗原、抗體或半抗原在交聯劑作用下連接。 是elisa成敗的關鍵試劑 。 p323 表表14-1 五、固相載體 最常用的

25、是聚苯乙烯 elisa載體的形狀主要有三種：小試管、小珠、微量反應板（酶標板）第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用六、最適工作濃度的選擇 以夾心法測抗原為例，可用棋盤滴定法。p323 表表14-2 第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用七、elisa測定方法 1、 加樣 2、 保溫 3、 洗滌 4、 比色 5、 結果判定第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用 封閉 p330 封閉封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占吸收后固相載體表面尚有未被占據的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填據的空隙，封閉就是

26、讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在這些空隙，從而排斥在elisa其后的步驟中干擾其后的步驟中干擾物質的再吸附物質的再吸附。封閉的操作與包被相類似。 最常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋牛血清白蛋白白，也有用10%的小牛血清小牛血清或1%明膠明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，可以高濃度使用（5%）。 采用酶標法（elisa）進行三聚氰胺檢測 thermo mk3型酶標儀 酶標儀原理與結構 第三節 免疫酶技術在食品檢測中的應用八、酶免疫技術在食品檢驗中的應用 用于細菌及毒素、真菌及毒素、病毒和寄生蟲的檢測。 用于蛋白質、激素、其他生理活性物質、藥物殘留、抗生素等

27、的檢測。 應用實例：elisa法檢測致瀉性大腸埃希氏菌腸毒素。常規鑒定常規鑒定elisa法檢測致瀉性大腸埃希氏菌腸毒素elisa法檢測腸毒素 第四節 放射免疫技術在食品檢測中的應用標記免疫分析技術標記免疫分析技術 用標記示蹤技術觀察抗原抗體一級反應的分析方法用標記示蹤技術觀察抗原抗體一級反應的分析方法 特點：特點：敏感性高，反應時間短，可用儀器檢測結果敏感性高，反應時間短，可用儀器檢測結果 三大標記免疫分析技術：三大標記免疫分析技術： 放射免疫、熒光免疫、酶免疫放射免疫、熒光免疫、酶免疫 檢測方法檢測方法 檢測范圍檢測范圍 生化、常規免疫生化、常規免疫 mgg（10-3 10-6 g） 熒光免

28、疫、酶免疫熒光免疫、酶免疫 gng（10-6 10-9 g） 放射免疫放射免疫、發光免疫、發光免疫 ngpg（10-9 10-12 g） pcr pgfg（10-12 10-15 g） 第四節 放射免疫技術在食品檢測中的應用放射免疫分析（ria）一、基本原理 放射免疫分析的基本原理是標記抗原標記抗原ag*和和非標非標記抗原記抗原ag對特異性抗體對特異性抗體ab的的競爭結合反應競爭結合反應。 反應式為：ag* + ab ag*ab + ag agab標記抗原標記抗原抗體抗體非標記抗原非標記抗原圖圖 14-6放射免疫放射免疫riaria以標記抗原與反以標記抗原與反應系統中未標記應系統中未標記抗原競

29、爭結合特抗原競爭結合特異性抗體來測定異性抗體來測定待檢樣品中抗原待檢樣品中抗原量。量。 免疫放射免疫放射irmairma以過量標記抗體以過量標記抗體與抗原非競爭結與抗原非競爭結合，采用固相免合，采用固相免疫吸附載體分離疫吸附載體分離游離和結合標記游離和結合標記抗體。抗體。放射受體分析放射受體分析rrarra放射配體結合放射配體結合分析分析rbarba其它其它一、基本原理一、基本原理第四節 放射免疫技術在食品檢測中的應用二、標記物 p333常用的核素有兩大類 射線： 131i、125i、57cr和60co 射線：14c、3h和32p。 使用最廣泛的是：125i性質活潑、易制備標記物對被標記物的免

30、疫活性影響小測量方法簡便、已推廣半衰期較長、核素豐度高b、f分離技術 第二抗體沉淀法 第四節 放射免疫技術在食品檢測中的應用 測量儀器測量儀器 （1） 計數儀計數儀 （2） 液閃儀液閃儀 化學發光化學發光（chemiluminescence）是指伴隨化學反是指伴隨化學反應過程所產生的光的發射現象。應過程所產生的光的發射現象。化學發光化學發光發光免疫分析技術（發光免疫分析技術（luminescent immunoassay，lia） 光照發光光照發光（photoluminescence）是指發光是指發光劑（熒光素）經短波長的入射光照射后，電子劑（熒光素）經短波長的入射光照射后，電子吸收能量躍遷到

31、激發態，在其回復至基態時，吸收能量躍遷到激發態，在其回復至基態時，發射出較長波長的可見光（熒光）。發射出較長波長的可見光（熒光）。 生物發光生物發光（bioluminescence）是指發生在生物是指發生在生物體內的發光現象，如螢火蟲的發光，反應底物為體內的發光現象，如螢火蟲的發光，反應底物為螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下，螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下，利用利用atpatp能能，生成激發態氧化型熒光素，它在回復基態時，生成激發態氧化型熒光素，它在回復基態時多余的能量以光子的形式釋放出來。多余的能量以光子的形式釋放出來。 化學發光化學發光（chemiluminescence）是指伴隨化學反

32、是指伴隨化學反應過程所產生的光的發射現象。某些物質應過程所產生的光的發射現象。某些物質( (發光劑發光劑) )在化學反應時，在化學反應時，吸收了反應過程中所產生的化學能吸收了反應過程中所產生的化學能，使反應的產物分子或反應的中間態分子中的電子躍使反應的產物分子或反應的中間態分子中的電子躍遷到激發態，當電子從激發態回復到基態時，以發遷到激發態，當電子從激發態回復到基態時，以發射光子的形式釋放出能量，這一現象稱為化學發光。射光子的形式釋放出能量，這一現象稱為化學發光。化學發光化學發光 一些化學反應能釋放足夠一些化學反應能釋放足夠的能量把參加反應的物質激的能量把參加反應的物質激發到能發射光的電子激發態，發到能發射光的電子激發態，若被激發的是一個反應產物若被激發的是一個反應產物分子，則這種反應過程叫直分子，則這種反應過程叫直接化學發光。反應過程可簡單地描述如下：接化學發光。反應過程可簡單地描述如下： a a十十b