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文檔簡介
1、 一一 實驗目的實驗目的 二二 實驗原理實驗原理 三三 實驗材料與儀器實驗材料與儀器 四四 實驗步驟實驗步驟 五五 注意事項注意事項 六六 思考題思考題第1頁/共12頁 一 實驗目的 學習BCA法測定蛋白質濃度的基本 原理 掌握BCA法測定蛋白質的技術第2頁/共12頁二 實驗原理 BCA (bicinchoninic acid,二辛可酸)法測定蛋白質即在堿性條件下蛋白質與Cu2+絡合,并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應,使其由原來的蘋果綠形成穩定的紫藍色復合物,在562 nm有強烈的光吸收,且吸光值和蛋白質濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系,因此可用于蛋白質濃度測定。第3頁/共12頁
2、其反應式為: 蛋白質+BCA試劑+Cu2+ 復合物 混合物由蘋果綠變為紫蘭色復合物 BCA測定蛋白質的范圍是20g/ml200g/ml,微量BCAg/ml 10g/ml。 此方法被科研工作者廣泛選用第4頁/共12頁 三 實驗器材與試劑1器材: 分光光度計;恒溫水浴箱;槍式移液管;試管13支;吸管2ml 1支、0.1ml 3支試劑: 試劑A;試劑B;蛋白質標準液;待測樣品第5頁/共12頁 四 實驗步驟1. 取試管13支,編號(除空白管只做1管外,其它各號測定管均重復做兩管),按下表操作并記錄:第6頁/共12頁管號試劑(l)空白管標準管測定管21222324252蛋白質標準液(1.5mg/ml)2
3、0406080100蒸餾水(ml)100604020待測樣品(ml)100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0 混勻后,在攝氏度下保溫 分鐘,比色測定BCA法測定蛋白質含量第7頁/共12頁2以蛋白質含量為橫坐標,光吸收值為縱坐標繪制標準曲線3用測定管平均光吸收值在標準曲線上查出相應的蛋白質含量,計算求出該待測血清蛋白質的含量(g/L)。4從標準管中選擇一管與測定管光吸收值相接近者,按比色法計算公式計算求出該待測血清的蛋白質濃度(g/L)。第8頁/共12頁 試比較法、雙縮脲法、Lowery法的異同.為什么法常用與科研?與其他方法相比它有什么特點和優勢?第9頁/共12頁 特點:1.操作簡便快速,比經典的lowry法快4倍2.靈敏度高ug3.準確,試劑穩定性好,在20ug/ml2000ug /ml 濃度范圍內有良好的線性關系4.經濟實用,可在微孔板中進行,待測樣品體積為1ul20ul,大大節約樣品和試劑用量5.抗干擾能力較強,不受絕
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