1、-環(huán)糊精手性流動相添加劑法拆分帕羅西汀及其中間體對映體2007年11月november2007色,譜chinesejournalofchromatographyvo1.25no.6830833羧甲基一環(huán)糊精手性流動相添加劑法拆分帕羅西汀及其中間體對映體盧鐵剛,楊茂俊(四jli抗菌素工業(yè)研究所,四jll成都61o051)摘要:建立了帕羅西汀及其中間體的高效液相色譜手性拆分分析方法.選用c柱(4.6mm250mm,5m),流動相為0.1%磷酸一甲醇(體積比為65:35,含0.38g/l羧甲基一環(huán)糊精,以三乙胺調(diào)ph7.2),柱溫25,檢測波長210am.結(jié)果表明,帕羅西汀及其中間體hfp的對映異構(gòu)

2、體在30min內(nèi)同時得到了基線分離,該法與手性固定相法相比具有分離效果更好的優(yōu)勢.關(guān)鍵詞:高效液相色譜;手性流動相添加劑;羧甲基一環(huán)糊精;對映體分離;帕羅西汀中圖分類號:0658文獻(xiàn)標(biāo)識碼:a文章編號:10008713(2007)06083004欄目類別:研究論文separationofparoxetineanditsintermediateenantiomersbyhighperformanceliquidchromatographyusingcarboxy-methyl-一cyclodextrinaschiralmobilephaseadditivelutiegang,yangmaojun

3、(sichuanindustrialinstituteofantibiotic,chengdu610051,china)abstract:ahighperformanceliquidchromatographicmethodtoseparatetherespectiveenan-tiomersofparoxetineanditsintermediatewasdevelopedusingchiralmobilephaseadditive.separationwasperformedonadiamondcl8column(4.6mm250mm,5m).themobilephasewas0.1%ph

4、osphateacid-methanol(65:35,v/v)containing0.38g/lcarboxymethyl-fl-cyclodextrinandthephwasadjustedto7.2bytriethylamine.thedetectionwavelengthwassetat210amandthetemperaturewas25.withthismethod.paroxetinestrans/cisisomersandtheirenantiomersaswellasintermediatehfpstrans/cisisomersandtheirenantiomersweres

5、eparatedsimultaneously.themethodissimple,rapidwithhighresolutions.keywords:highperformanceliquidchromatography(hplc);chiralmobilephaseadditive;carboxymethyl-fl-cyclodextrin(cm-cd);enantiomericresolution;paroxetine帕羅西汀(paroxetine)是選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑,屬第三代抗抑郁藥,其化學(xué)名為(一)反式-3s-(3,4-亞甲二氧基)苯氧基甲基-4r-(4-氟代苯基)-n-甲

6、基哌啶(結(jié)構(gòu)式見圖1).該化合物哌啶環(huán)3位和4位上有兩個手性碳,共有2對對映異構(gòu)體,帕羅西汀的構(gòu)型為3s,4r.(一)反式一3s一羥甲基-4r-(4-氟代苯基)-_甲基哌啶(簡稱中間體hfp)(結(jié)構(gòu)式見圖1)是帕羅西汀合成工藝中的重要中間體,其光學(xué)純度直接決定了最終產(chǎn)品帕羅西汀的光學(xué)純度.帕羅西汀及其中間體的拆分已有文獻(xiàn)報(bào)道:如vivekanand等用3種手性柱對帕羅西汀的中間體對映體進(jìn)行了拆分研究;ferretti等以及歐洲藥典4.5版分別使用了衍生化氨基甲酸酯手性柱(chiralpakad)和o/-酸性糖蛋白手性柱(chiral-agp)拆分了帕羅西汀對映體.但手性柱一般存在價格較昂貴,穩(wěn)

7、定性較差,不適合長期大進(jìn)樣量使用的缺點(diǎn).而使用手性流動相添加劑法對該兩種化合物的手性分析尚未見文獻(xiàn)報(bào)道.j8一環(huán)糊精衍生物近年來已經(jīng)成為最重要的手性分析試劑.本文采用羧甲基-一環(huán)糊精(carboxy-methyl一cyclodextrin,cm一cd)為手性流動相添加劑(chiralmobilephaseadditive,cmpa),以c18柱為固定相,用反相高效液相色譜(rp.hplc)對帕羅西汀及其中間體對映體進(jìn)行了拆分研究.收稿日期:2007-0524通訊聯(lián)系人:盧鐵剛,男,碩士,tel:(028)6663l542,email:lutg第6期盧鐵剛,等:羧甲基一環(huán)糊精手性流動相添加劑法拆

8、分帕羅西汀及其中問體對映體.831?ffch3boh圖i(a)帕羅西汀和(b)中間體hfp的結(jié)構(gòu)式fig.1chemicalstructuresof(a)paroxetine(trans3s,4r)and(b)intermediatehfp(trans3s,4r)1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑waters600e高效液相色譜儀(waters600e泵,waters996二極管陣列檢測器,watersmillennium32色譜工作站);lp115型ph計(jì)(梅特勒一托利多公司);ae240型電子天平(梅特勒一托利多公司);羧甲基一一環(huán)糊精(編號cm一1,編號cm一2,編號cm一3,經(jīng)核磁共振(nmr

9、)譜結(jié)構(gòu)確證羧甲基總?cè)〈确謩e為16.5,14.4和1.31;2位取代度分別為4.6,3.3和1.1,以上3種羧甲基8一環(huán)糊精均由本單位分析研究室制備及結(jié)構(gòu)確證);|8一環(huán)糊精,磷酸,三乙胺(分析純,成都科龍化工試劑廠);甲醇(色譜純,上海陸都化學(xué)試劑廠);帕羅西汀消旋體,帕羅西汀順式異構(gòu)體;中間體hfp消旋體,中間體hfp順式異構(gòu)體由本單位藥物合成研究室提供.1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制實(shí)驗(yàn)中所用的帕羅西汀的兩對對映異構(gòu)體(trans3s,4r和trans3r,4s;cis3s,4r和cis3r,4s)和中間體hfp(trans3s,4r和trans3r,4s;cis3s,4r和cis3r,4s)的

10、兩對對映異構(gòu)體均配制成1.0mg/ml的水溶液貯備液.取貯備液適量,配制成trans對映體濃度分別為0.5mg/ml,cis對映體濃度分別為0.05mg/ml的待測溶液.1.3色譜條件色譜柱:鉆石c柱(4.6mmx250mm,5ixm);流動相:0.1%磷酸一甲醇(體積比為65:35,含0.38g/lcm8一cd(cm一2),以三乙胺調(diào)ph7.2);流速1.2ml/min;柱溫25oc;檢測波長2l0nm;進(jìn)樣量20l.2結(jié)果與討論2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果本文以cm一2號羧甲基8一環(huán)糊精為流動相添加劑,對帕羅西汀和中間體hfp的異構(gòu)體進(jìn)行了手性分析,在優(yōu)化后的色譜條件下,拆分色譜圖如圖2.圖2以cm-c

11、d為cmpa拆分帕羅西汀及中間體hfp對映體fig.2chromatogramsofparoxetineandintermediatehfpenantiomersseparatedbycm?cdmobilephasea,intermediatehfpandtrans3r,4s;cis3s.4randcis3.4senantiomersofhfp;b.paroxetineandtrans3r,4s:c/s3s.4randcis3r,4senantiomersofparoxetine,由圖2可以看出,兩種化合物的拆分問題均得到了很好的解決,中間體hfp的4個異構(gòu)體在6min之內(nèi)同時得到基線分離,帕

12、羅西汀的4個異構(gòu)體也在30min內(nèi)同時得到了基線分離.2.2影響手性拆分的因素2.2.1cm一一cd的取代度和取代位置對手性拆分的影響天然|8一cd結(jié)構(gòu)中含有21個羥基,通過控制羧甲基化反應(yīng)條件,可獲得不同取代度的羧甲基8一cd.本文以3種不同取代度的cm一一cd和天然一cd為流動相添加劑,分離中間體hfp的色譜圖如圖3.由表1可以看到cm8一cd的取代度對分離選擇性因子o/和保留因子k均有明顯的影響,尤其是2位取代度的影響更大.隨著取代度的增加,o/增加,而k迅速降低,說明高取代度的cm8一cd對被測對映體的包結(jié)更好,手性匹配程度也更高.對于編號為cm一3的cm一cd來說,幾乎可以將其看作單

13、2位羧甲基取代的一cd(總平均取代度為1.3,2位平均取代度為1.1),但與完全無取代的天然一cd相比,分離效果有質(zhì)的飛躍,分析時間也大大縮短.o>or,n八jn=二=第6期盧鐵剛,等:羧甲基18一環(huán)糊精手性流動相添加劑法拆分帕羅西汀及其中間體對映體833?2.2.4ph對手性拆分的影響對于以離子型的/3-cd衍生物為cmpa的反向hplc體系來說,流動相的ph值對一cd衍生物的電離形態(tài)有很大的影響,cm-cd中的羧甲基為弱酸性基團(tuán),在高ph值時為電離的狀態(tài),在較低的ph值時為游離態(tài).同時,由于大多數(shù)能被離子型jb-cd衍生物拆分的手性化合物都含胺基或羧基等可電離基團(tuán),所以ph值也會影響

14、被分析手性化合物的電離形態(tài),從而極大地改變-cd衍生物與客體手性分子的作用力.因此ph對手性拆分有重要的影響.在采用cm-b-cd為手性添加劑分離帕羅西汀時ol隨ph的增加而增大,k隨ph的增加而降低(見圖5).值得注意的是,k達(dá)最小值時(ph7.0)ol正好達(dá)到最大值,說明在該ph條件下cmpa與被測手性化合物形成了最佳的包結(jié).ph圖5ph值對cm-cd分離帕羅西汀的影響fig.5effectofphofbuffersolutiononchiralseparationofparoxetineenantiomerswithcm-cd3結(jié)論本文研究了以陰離子型一環(huán)糊精衍生物cm一cd為手性流動相

15、添加劑拆分帕羅西汀及其中間體hfp的影響因素,通過優(yōu)化色譜條件,成功建立了帕羅西汀及其中間體hfp的hplc手性拆分分析方法.該方法可將帕羅西汀的4個異構(gòu)體和中間體hfp的4個異構(gòu)體在30min內(nèi)同時基線分離.方法簡便快捷,使用成本低廉,與chiral-agp柱法相比,具有明顯的優(yōu)勢.從許多-cd衍生物在hplc和ce中應(yīng)用的拆分實(shí)例來看,帶負(fù)電的陰離子型-cd衍生物對于拆分含有胺基的堿性手性化合物對映體比較有效j.從拆分機(jī)理看中間體hfp和帕羅西汀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)都比較符合armstrong等所提出的環(huán)糊精手性拆分化合物結(jié)構(gòu)的要求(如對映體手性中心附近應(yīng)含芳香環(huán)或環(huán)己烯等結(jié)構(gòu),并且還含有能產(chǎn)生氫鍵

16、作用的羥基,羰基以及胺基等),其氟苯環(huán)可進(jìn)入cm-一cd的桶型空腔形成包結(jié)絡(luò)合物,叔胺基和羥基(或烷氧基),可與cm-cd空腔邊緣的羧甲基產(chǎn)生氫鍵甚至靜電作用而達(dá)到手性識別,從而被拆分.參考文獻(xiàn):1vivekanandvv,kumarvr,mohakhudpk,reddygo.jpharmbiomedanal,2003,33(4):8032ferrettir,gallinellab,latorref,turchettol.jchromatogrbiomedlifesci,1998,710(1/2):1573europeanpharmacopoeia(4.5edition),2003:37544

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