1、血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳1 血漿蛋白質(zhì) 醋酸纖維素薄膜電泳 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)2 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳2 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?l1、掌握醋酸纖維素薄膜電泳的原理 l2、掌握醋酸纖維素薄膜電泳分離血漿蛋白質(zhì) 的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)和注意事項(xiàng)。 l3、了解醋酸纖維素薄膜作支持物進(jìn)行電泳 的優(yōu)點(diǎn)及使用范圍。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳3 醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素薄膜電泳 采用醋酸纖維素薄膜作為支持物的電泳方 法叫做醋酸纖維素薄膜電泳。 醋酸纖維素是纖維素的羥基乙酰化所形成 的纖維素醋酸酯，將它溶于有機(jī)溶劑（如丙酮 、 氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均勻 的薄膜，干燥后就成為醋酸纖維素薄膜。該膜 具有均一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，厚

2、度約為120m，通 透性好，對(duì)分子移動(dòng)阻力少，是一種良好的電 泳支持物。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳4 醋酸纖維素薄膜電泳的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用醋酸纖維素薄膜電泳的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用 l具有微量、快速、簡(jiǎn)便、區(qū)帶清晰、靈敏度高、 便于攝影和保存等優(yōu)點(diǎn)。 l用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)、生化產(chǎn)品分析和臨床化驗(yàn)，如 血漿蛋白、血紅蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋 白、甲胎蛋白、同工酶等的分離鑒定。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳5 原原 理理 血漿中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，一般都低于pH7.4。 它們?cè)趐H8.6的緩沖液中均解離帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正 極移動(dòng)。由于血漿中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶 的電荷量不同，因而在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也 不

3、同。因此可以將它們分離為清蛋白（Albumin)、1-球 蛋白、2-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白，纖維蛋白原 條區(qū)帶。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳6 血漿蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、血漿蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、 平均相對(duì)分子量、及正常含量平均相對(duì)分子量、及正常含量 球球 蛋蛋 白白 清蛋白清蛋白 A 1 2 pI 相對(duì)分子量 （104） 含量（%） 4.88 6.9 5772 5.06 20 25 5.06 30 49 5.12 915 6.212 6.857.3 15.630 1220 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳7 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 l健康人血漿或動(dòng)物血漿 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳8 試劑試劑 l1、pH8.6巴比妥緩沖液 l2

4、、氨基黑10B染色液 l3、漂洗液 l4、洗脫液 l5、透明液 （試劑配制參見(jiàn)實(shí)驗(yàn)講義） 定量時(shí)用 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳9 儀器和器材儀器和器材 l1、常壓電泳儀、電泳槽 l2、醋酸纖維素薄膜（28cm） l3、點(diǎn)樣器（載玻片或蓋玻片）、玻璃板 l4、培養(yǎng)皿（泡膜、染色和漂洗用） l5、濾紙 l6、鑷子 l7、試管、試管架、吸量管 l8、分光光度計(jì) （定量用） 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳10 操作步驟操作步驟 l1、薄膜準(zhǔn)備、薄膜準(zhǔn)備 將醋酸纖維素薄膜切成28cm的小條。 在薄膜粗面一端1.5cm處用鉛筆輕輕畫一橫線。 在薄膜角上用鉛筆作一標(biāo)記。 將醋酸纖維素薄膜浸泡于緩沖液中20min。 血漿蛋白

5、質(zhì)醋纖膜電泳11 操作步驟操作步驟 醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置 8cm 2cm 點(diǎn)樣線 點(diǎn)樣區(qū) 1.5cm (粗面） 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳12 操作步驟操作步驟 l2、電泳儀準(zhǔn)備、電泳儀準(zhǔn)備 在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個(gè)電極槽內(nèi) 的液面等高。先剪裁尺寸合適的濾紙條，取雙 層濾紙條附著在電泳槽的支架上，使它的一端 與支架的前沿對(duì)齊，而另一端浸入電極槽的緩 沖液內(nèi)。用緩沖液將濾紙全部潤(rùn)濕并驅(qū)除氣泡， 使濾紙緊貼在支架上，即為濾紙橋。它是聯(lián)系 醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的“橋梁”。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳13 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳14 操作步驟操作步驟 l4、上槽、上槽 待血漿吸入膜后，以薄膜粗面

6、向下粗面向下、點(diǎn)樣點(diǎn)樣 端置陰極端端置陰極端，兩端緊貼在濾紙鹽橋上， ，加蓋，平衡約5min，使薄膜滲透的 緩沖液達(dá)到平衡。 切勿使點(diǎn)樣處與電泳槽接觸切勿使點(diǎn)樣處與電泳槽接觸 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳15 醋酸纖維素薄膜電泳裝置示意圖醋酸纖維素薄膜電泳裝置示意圖 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳16 操作步驟操作步驟 l5、電泳、電泳 檢查電泳裝置是否正確，開(kāi)啟電源，調(diào)節(jié) 電壓、電流，然后通電4060min。 電壓：110150V（10V/cm膜長(zhǎng)） 薄膜的有效長(zhǎng)度是兩電極緩沖液面之間濾 紙鹽橋和薄膜的長(zhǎng)度之和。 電流：0.40.6mA/cm膜寬 有數(shù)條膜便求數(shù)條膜寬的總和。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳17 操作步

7、驟操作步驟 l6、染色和漂洗、染色和漂洗 電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接 浸于染色液中5min。 取出膜，盡量瀝凈染色液，移入漂洗液中 浸洗脫色（一般更換23次），至背景顏色脫 凈為止。 取出膜，用濾紙吸干即可。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳18 操作步驟操作步驟 l血漿蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜 電泳方向 A1 2 纖維蛋白原 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳19 操作步驟操作步驟 l7、透明、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后， 取出平貼在玻璃板上（不要留有氣泡），完全 干燥后即成透明的薄膜圖譜，要作掃描或照相 用。可長(zhǎng)期保存。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳20 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳21 血漿蛋白質(zhì)

8、醋纖膜電泳22 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳23 * *生理及臨床意義生理及臨床意義 同工酶譜的改變有同工酶譜的改變有 助于對(duì)疾病的診斷。助于對(duì)疾病的診斷。 心肌梗死和肝病病人血清心肌梗死和肝病病人血清LDHLDH同工酶譜的變化同工酶譜的變化 1 1 酶酶 活活 性性 心肌梗死酶譜心肌梗死酶譜 正常酶譜正常酶譜 肝病酶譜肝病酶譜 2 23 34 45 5 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳24 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳25 和和珠蛋白肽鏈合成異珠蛋白肽鏈合成異 常而導(dǎo)致其比例不均衡引起的溶血性貧血。常而導(dǎo)致其比例不均衡引起的溶血性貧血。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳26 地地 區(qū)區(qū) 地貧地貧 地貧地貧 樣本數(shù)樣本數(shù) 地貧地貧1

9、 % 1 % 樣本數(shù)樣本數(shù) 表型陽(yáng)性數(shù)表型陽(yáng)性數(shù) % % 廣州廣州 1,681 101 6.0 13,462 452 3.36 珠海珠海 1,028 41 3.99 9,854 227 2.30 汕頭汕頭 574 38 6.6 402 21 5.2 韶關(guān)韶關(guān) 969 40 4.13 1,597 54 3.4 湛江湛江 1004 48 4.78 1,170 41 3.5 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳27 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳28 操作流程操作流程 1、薄膜準(zhǔn)備 2、電泳儀準(zhǔn)備 3、點(diǎn)樣 4、上槽 5、電泳 6、染色及漂洗 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳29 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) l1、最好選用同一批號(hào)、厚薄均勻、質(zhì)量良好 的醋纖膜。 l2、樣品要新鮮。 l3、點(diǎn)樣要細(xì)窄、均勻、集中。 l4、鹽橋要平整。 l5、電泳槽蓋要密封。 l6、室溫不宜過(guò)高。 血漿蛋白質(zhì)醋纖膜電泳