1、生物學指標的測定2.5 生物學指標的測定生物學指標的測定細菌總數的測定細菌總數的測定 指1ml水（或1g樣品），在普通瓊脂培養(yǎng)基中經37、 24h培養(yǎng)后所生長的細菌菌群總數。 評定水體污染程度指標之一。 生活飲用水衛(wèi)生標準（GB5749-2006）規(guī)定每毫升水的細菌總數不得超過100個。 水中通常存在的細菌大致可分為三類： 天然水中存在的細菌。普通的是熒光假單孢桿菌、綠膿桿菌，一般認為這類細菌對健康人體是非致病的。熒光假單胞桿菌生物學指標的測定細菌分類 腸道細菌。它們生存在溫血動物的腸道中，故糞便中大量存在。水體中發(fā)現這類細菌，可以認為已受到糞便的污染。致病性腸道細菌有沙門氏桿菌（傷寒和副傷寒

2、菌）、B型炭疽菌、痢疾志賀氏菌和霍亂弧菌等。 土壤細菌。當洪水時期或大雨后地表水中較多。它們在水中生存的時間不長，在水處理過程中容易被去除。腐蝕水管的鐵細菌和硫細菌也屬此類。大腸桿菌鐵細菌生物學指標的測定平板計數法 國標規(guī)定的方法為平板計數法 檢驗方法：在玻璃平皿內，接種一毫升水樣或稀釋水樣于加熱液化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，冷卻凝固后在37C培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)基上的菌落數或乘以水樣的稀釋倍數即為細菌總數。 精度高，耗時長。為了簡化檢測程序、縮短檢測時間，國內外學者進行了大量的快速檢測方法的研究，提出了阻抗檢測法、Simplate TM全平器計數法、微菌落技術、紙片法等檢測方法。生物學指標的測定平板

3、計數法生物學指標的測定總大腸菌群的測定 總大腸菌群總大腸菌群：需氧及兼性厭氧需氧及兼性厭氧的在的在3535、48h48h之內生長時之內生長時能使乳糖發(fā)酵、產酸產氣的革蘭陰性無芽胞桿菌，以每升能使乳糖發(fā)酵、產酸產氣的革蘭陰性無芽胞桿菌，以每升水樣中所含有的大腸菌群的數目表示。總大腸菌群既包括水樣中所含有的大腸菌群的數目表示。總大腸菌群既包括存在于人及動物糞便的大腸菌群，也包括存在于其他環(huán)境存在于人及動物糞便的大腸菌群，也包括存在于其他環(huán)境中的大腸菌群。中的大腸菌群。 包括包括: :大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌 生活飲用水生活飲用水衛(wèi)生衛(wèi)生標準標準（GB5749-2

4、006GB5749-2006）規(guī)定每規(guī)定每100mL100mL水不得水不得檢出總大腸菌群檢出總大腸菌群。生物學指標的測定革蘭氏染色法 細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。未經染色之細菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結構特征，而用以分類鑒定。 革蘭氏染色屬復染法。 革蘭氏染色法能夠把細菌分為兩大類，革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。 染色的差異主要由陰性與陽性細菌細胞壁的差異引起。生物學指標的測定革蘭氏染色法 先用龍膽紫（亦稱結晶紫）來染細菌，所有細菌都染成了紫色 涂以革蘭氏碘液，來加強染料與菌體的

5、結合 用95%的酒精來脫色2030秒鐘，有些細菌不被脫色，仍保留紫色，有些細菌被脫色變成無色 用番紅或沙黃復染1分鐘，結果已被脫色的細菌被染成紅色，未脫色的細菌仍然保持紫色，不再著色 凡被染成紫色的細菌稱為革蘭氏陽性菌（G+菌）；染成紅色的稱為革蘭氏陰性菌（G-菌）。常見的革蘭氏陽性菌：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、常見的革蘭氏陽性菌：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉桿菌、破傷風桿菌等；白喉桿菌、破傷風桿菌等；常見的革蘭氏陰性菌常見的革蘭氏陰性菌：痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌及霍亂弧菌等。綠膿桿菌、百

6、日咳桿菌及霍亂弧菌等。生物學指標的測定多管發(fā)酵法配制培養(yǎng)基 在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基成品要存放在大氣濕度低、溫度低于 30的暗處，存放時應避免陽光直接照射，并且要避免雜菌侵入和液體蒸發(fā)。當培養(yǎng)液顏色變化，或體積變化明顯時廢棄不用。初步發(fā)酵試驗 水樣分別接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中。在 370.5下培養(yǎng)24h2h。產酸和產氣的發(fā)酵管表明試驗陽性。如在倒管內產氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性。生物學指標的測定多管發(fā)酵法復發(fā)酵試驗 微振蕩初發(fā)酵試驗陽性結果的發(fā)酵管，用 3mm接種環(huán)或滅菌棒將培養(yǎng)物轉接到 EC 培養(yǎng)液中。在 44.50.5溫度下培養(yǎng) 24h2h（水浴箱的水面應高于試管

7、中培養(yǎng)基液面） 。接種后所有發(fā)酵管必須在 30min 內放進水浴中。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產氣則證實為糞大腸菌群陽性。生物學指標的測定多管發(fā)酵法結果計算生物學指標的測定濾膜法 濾膜是一種微孔性薄膜。 將水樣注入已滅菌的放有濾膜（孔徑 0.45m）的濾器中，經過抽濾，細菌即被截留在膜上，然后將濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，37溫度下進行培養(yǎng)，計數濾膜上生長的此特性的菌落數，計算出每 1L 水樣中含有大腸菌群數。 生物學指標的測定濾膜法 將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌三次，每次 15min。前兩次煮沸后需更換水洗滌 23 次，以除去殘留溶劑。也可用 121滅菌 10min，10min 一到，迅速將蒸汽放出，這樣可以盡量減少濾膜上凝集的水分。濾器、接液瓶和墊圈分別用紙包好，在使用前先經 121高壓蒸汽滅菌 30min。濾器滅菌也可用點燃的酒精棉球火焰滅菌。 以無菌操作把濾器裝置裝好。 過濾： 用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣， 將粗糙面向上， 貼放在已滅菌的濾床上， 穩(wěn)妥地固定好濾器。 將適量的水樣注入濾器中，加蓋，開動真空泵即可抽濾除菌。 生物學指標的測定濾膜法 由濾膜上生長的大腸菌群菌落綜述和所取過濾水樣量，按下式計算1L水中總大腸菌群數： 生物學指標的測定其他細菌的測定 生活飲用水衛(wèi)生標準（GB5749-2006）規(guī)定每100mL水不得檢出總大腸菌