1、實驗一 普通光學顯微鏡的使用及細菌形態的觀察主主 講講: :文晴文晴生命科學學院生命科學學院2021-7-10實驗課要求作圖要求：實驗報告要求用藍色或黑色鋼 筆、圓珠筆或簽字筆撰寫，要 求用鉛筆作圖（包括視野、觀 察結果、放大倍數等；值日要求：每四人一組，包括物品歸位、 黑板、地面、臺面等，值日結 束后經老師同意方可離開。一、實驗目的一、實驗目的 了解顯微鏡的構造和各部分的作用，掌握了解顯微鏡的構造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用方法顯微鏡的使用方法 學習并掌握油鏡的原理和使用方法學習并掌握油鏡的原理和使用方法 了解并觀察細菌的三種基本形態了解并觀察細菌的三種基本形態目鏡目鏡鏡筒鏡筒轉換器轉換

2、器物鏡物鏡通光孔通光孔聚光器聚光器壓片夾壓片夾反光鏡反光鏡鏡座鏡座粗準焦螺旋粗準焦螺旋細準焦螺旋細準焦螺旋 鏡臂鏡臂 鏡柱鏡柱載物臺載物臺 機械部分和光學部分機械部分和光學部分普通光學顯微鏡的構造可分為兩部分：普通光學顯微鏡的構造可分為兩部分：一、普通光學顯微鏡的基本結構一、普通光學顯微鏡的基本結構二、實驗原理：顯微鏡的工作原理二、實驗原理：顯微鏡的工作原理物鏡上的標識物鏡上的標識 顯微鏡的總放大倍數顯微鏡的總放大倍數=物鏡放大倍數物鏡放大倍數X目鏡放大倍數目鏡放大倍數油鏡的放大倍數可達油鏡的放大倍數可達100100 ，放大倍數這樣大的鏡頭，放大倍數這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的

3、光照強度卻最大。焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。由低倍鏡轉為高倍鏡時，通過增加照明強度和開大虹彩光圈，以增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。 從標本玻片透過來的光從標本玻片透過來的光線，因介質密度不同（從玻片線，因介質密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像時會因射入的光線較少，物像顯現不清。顯現不清。為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻片之間加入與玻

4、璃的折射率玻璃的折射率相仿的鏡油（通常使用相仿的鏡油（通常使用香柏香柏油油，其折射率，其折射率n =1.52n =1.52）。）。增加了視野的進光量，從而使增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。物象更加清晰。顯微鏡的分辨率或分辨力（顯微鏡的分辨率或分辨力（resolution or resolution or resolving powerresolving power）是指）是指顯微鏡能辨別兩點之間最顯微鏡能辨別兩點之間最小距離的能力小距離的能力。從物理學角度看，光學顯微鏡的。從物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現象及所用物鏡性能的限制，分辨率受光的干涉現象及所用物鏡性能的限制，可

5、表示為：可表示為：式中：式中： D =D =顯微鏡分辨兩點間的最短距離顯微鏡分辨兩點間的最短距離 = =光波波長光波波長（平均（平均0.550.55 m)m) NA=NA=物鏡的數值孔徑值。物鏡的數值孔徑值。2DNA顯微鏡的性能顯微鏡的性能 數值孔徑數值孔徑則取決于物鏡的則取決于物鏡的鏡口鏡口角角和玻片與鏡頭間和玻片與鏡頭間介質的折射率介質的折射率，可表示為：可表示為：NA=NA=n n sin(/2 sin(/2） n: n: 物鏡和被檢標本間介質的折射率物鏡和被檢標本間介質的折射率 ：鏡口角。鏡口角。物質物質折射率折射率物質物質折射率折射率空氣空氣1 1亞麻油亞麻油1.471.47水水1.

6、331.33石蠟油石蠟油1.4871.487甘油甘油1.4871.487香柏油香柏油1.5151.515玻璃玻璃1.521.52丁香油丁香油1.5351.535冬青油冬青油1.5361.536濃松節油濃松節油1.5421.542以香柏油為介質的油鏡所能達到的數值孔徑（以香柏油為介質的油鏡所能達到的數值孔徑（NANA一般在一般在1.21.21.41.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（NANA都低于都低于1.01.0）。）。數值孔徑通常在數值孔徑通常在0.650.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.40.4m m的物體，而油鏡的的物體，而油

7、鏡的分辨率卻可達到分辨率卻可達到0.20.2m m左右。左右。三、實驗器材三、實驗器材1 1、標本片：四聯球菌、標本片：四聯球菌、枯草芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌2 2、試劑：、試劑：香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯3 3、儀器及其它用具：、儀器及其它用具：顯微鏡、擦鏡紙等顯微鏡、擦鏡紙等四、實驗步驟四、實驗步驟1 1、顯微觀察步驟、顯微觀察步驟 1 1）低倍鏡觀察）低倍鏡觀察（1010）：）： 2 2）高倍鏡觀察）高倍鏡觀察（4040）：）： 3 3）油鏡觀察）油鏡觀察（100100）：）：2 2、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處理低倍鏡的操作低倍鏡的操作右手握住鏡臂，左手拖住鏡座，將顯微鏡放在自

8、己身體的右手握住鏡臂，左手拖住鏡座，將顯微鏡放在自己身體的前方，離實驗臺邊緣前方，離實驗臺邊緣10 cm10 cm左右處；左右處；接通電源，打開顯微鏡電源開關；接通電源，打開顯微鏡電源開關；3. 3. 旋動轉換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方；旋動轉換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方；4. 4. 調節光源強度，同時用眼對準目鏡，仔細觀察，視野亮度調節光源強度，同時用眼對準目鏡，仔細觀察，視野亮度均勻；均勻；5. 5. 將標本放在載物臺上，旋轉推動器，使觀察的目的物置于將標本放在載物臺上，旋轉推動器，使觀察的目的物置于圓孔的正中央；圓孔的正中央；6. 6. 轉動粗準焦螺旋，上升載物臺至距離物鏡約轉動粗準焦螺

9、旋，上升載物臺至距離物鏡約0.5 cm0.5 cm（注意：注意：眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰）；）；7. 7. 左眼觀察目鏡，調節粗、細準焦螺旋直至目的物清晰為止。左眼觀察目鏡，調節粗、細準焦螺旋直至目的物清晰為止。高倍鏡的操作高倍鏡的操作轉換物鏡。旋動轉換器將低倍鏡換成高倍鏡轉換物鏡。旋動轉換器將低倍鏡換成高倍鏡（注意：（注意：在轉換物鏡時要從側面觀察，以防鏡頭與標本片相撞，在轉換物鏡時要從側面觀察，以防鏡頭與標本片相撞，如果高倍鏡觸及標本片，應立即停止旋轉，并重新用如果高倍鏡觸及標本片，應立即停止旋轉，并重新用低倍鏡調焦）低倍鏡調焦）；調焦。調節光圈

10、，使光線亮度合適，再調節調焦。調節光圈，使光線亮度合適，再調節細準焦螺細準焦螺旋旋直至目的物清晰；直至目的物清晰；觀察。移動推動器，找到合適的目的物，并移至視野觀察。移動推動器，找到合適的目的物，并移至視野的中心進行觀察。的中心進行觀察。（如果用高倍鏡未能看清目的物，則可換用油鏡觀察）（如果用高倍鏡未能看清目的物，則可換用油鏡觀察）油鏡的操作油鏡的操作1.1.轉換油鏡。調節粗準焦螺旋，轉換油鏡。調節粗準焦螺旋，下降載物臺約下降載物臺約2 cm，轉，轉換油鏡鏡頭；換油鏡鏡頭；2.2.加香柏油。加香柏油。在標本片的鏡檢部位滴一滴香柏油；從側在標本片的鏡檢部位滴一滴香柏油；從側面注視，用面注視，用粗

11、準焦螺旋粗準焦螺旋緩慢上升載物臺，使油鏡頭浸沒緩慢上升載物臺，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片；在油中，剛好貼近載玻片；3. 3. 調焦。上升聚光器，將虹彩光圈開大，使光線充分照調焦。上升聚光器，將虹彩光圈開大，使光線充分照明；緩慢調節明；緩慢調節細準焦螺旋細準焦螺旋，直至物像清晰。，直至物像清晰。4. 4. 觀察。觀察。 多觀察幾個視野，選取菌體分布均勻的視野多觀察幾個視野，選取菌體分布均勻的視野進行菌體形態和排列方式觀察。進行菌體形態和排列方式觀察。2 2、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處理將光強調節至最弱將光強調節至最弱 關閉電源開關關閉電源開關 拔掉拔掉電源插頭電源插頭 下降載物

12、臺下降載物臺 取干凈擦鏡紙取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油拭去鏡頭上的香柏油 取干凈擦鏡紙蘸少許二取干凈擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡 取干凈擦鏡紙擦取干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯去殘留的二甲苯 將顯微鏡的各部位還原將顯微鏡的各部位還原，物，物鏡轉成鏡轉成“八八”字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。 繪出你在油鏡下觀察到的兩種細菌繪出你在油鏡下觀察到的兩種細菌的形態及其不同細菌細胞的排列方式。的形態及其不同細菌細胞的排列方式。四聯球菌（10100） 桿菌120（10100）用油鏡觀察時應注意哪些問題？在載用油鏡觀察時應注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油？起什么作玻片