1、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室ISO15189 認(rèn)可性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方案德信誠(chéng)咨詢?yōu)榱藵M足目前醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的需求保證實(shí)驗(yàn)室檢 測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，特制定本方案。本方案從準(zhǔn)確度、精密度、參考范 圍、線性范圍以及方法學(xué)比對(duì) 5個(gè)方面對(duì)各個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行評(píng)價(jià)。一、精密度（Precision ）:精密度是指在規(guī)定條件下所獲得的 檢測(cè)結(jié)果的接近程度，表示測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。 精密度通常用不精密度表示。可以分別評(píng)價(jià)連續(xù)精密度（批內(nèi)精密 度）、重復(fù)性不精密度（中間精密度，包括批間、日間精密度等）和 再現(xiàn)性精密度。本方案采用批內(nèi)和天間兩種方法對(duì)各個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目的精 密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程使用同批號(hào)試劑和質(zhì)控品，并且保證檢測(cè)

2、當(dāng)日質(zhì)控在控。1、批內(nèi)精密度（連續(xù)精密度）：方法：在檢測(cè)患者標(biāo)本過(guò)程中，連續(xù)運(yùn)行高低水平質(zhì)控品各 20次， 記錄檢測(cè)結(jié)果。計(jì)算批內(nèi)精密度的 CV值和SD值。結(jié)果評(píng)價(jià)（1）廠家評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算精密度指數(shù)二驗(yàn)證SD/廠商SD， 精密度指數(shù)要求小于等于1，或者實(shí)測(cè)CV小于等于廠家要求的CV， 兩者符合其一即可。具體見(jiàn)精密度評(píng)價(jià)表格。（2）按照國(guó)際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度應(yīng)在CLIA88允許誤 差的1/4以內(nèi)，見(jiàn)美國(guó)CLIA 88能力比對(duì)檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求。2、天間精密度（中間精密度）：方法：同樣使用兩個(gè)水平的質(zhì)控品，若需復(fù)溶凍干質(zhì)控品做實(shí)驗(yàn)，要 注意選擇產(chǎn)品的穩(wěn)定性和瓶間差。要嚴(yán)格控制每次復(fù)溶凍干品時(shí)的操

3、 作手法。連續(xù)測(cè)試20天，每天檢測(cè)1次。在次過(guò)程中不能更換試劑批 號(hào)及質(zhì)控品批號(hào)，是否需要重新定標(biāo)則取決于實(shí)驗(yàn)室。 測(cè)試完成后記 錄檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果評(píng)價(jià)（1）廠家評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算天間的SD及CV值，并計(jì)算精密度 指數(shù)二驗(yàn)證SD/廠商SD。精密度指數(shù)要求小于等于1，或者實(shí)測(cè)CV小 于等于廠家要求的CV，兩者符合其一即可。具體見(jiàn)精密度評(píng)價(jià) 表格。（2）按照國(guó)際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度應(yīng)在CLIA88允許誤 差的1/3以內(nèi)，見(jiàn)美國(guó)CLIA 88能力比對(duì)檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求。二、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度（accuracy）指檢測(cè)結(jié)果與被測(cè)量物真值之間的接近程度。 是分析測(cè)量范圍、分析靈敏度以及生物參考區(qū)間評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)。準(zhǔn)確度

4、的評(píng)價(jià)方法很多，比如檢測(cè)定值參考物質(zhì)，同參考方法進(jìn) 行比對(duì)，同有溯源性的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)，衛(wèi)生部臨檢中 心質(zhì)評(píng)的匯報(bào)結(jié)果均可以作為評(píng)價(jià)準(zhǔn)確性的方法之一。本方案采 用測(cè)定定值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法來(lái)評(píng)價(jià)各個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的準(zhǔn)確度。定值 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用廠家定值標(biāo)準(zhǔn)品。方法：（1）試驗(yàn)期間保證機(jī)器狀態(tài)正常，保證試驗(yàn)當(dāng)日室內(nèi)質(zhì)控在控。（2）按廠家要求準(zhǔn)備各個(gè)項(xiàng)目的新批號(hào)定標(biāo)品（要與定標(biāo)時(shí)使用的定標(biāo)品批號(hào)不同）各一套，按照標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶。（3）記錄該新批號(hào)定標(biāo)品的定值。（4）在設(shè)備上檢測(cè)各個(gè)定標(biāo)品（多水平）的相關(guān)項(xiàng)目，每個(gè)水 平重復(fù)2次，記錄檢測(cè)結(jié)果，將檢測(cè)結(jié)果錄入準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 表格。結(jié)果評(píng)價(jià)：（1）廠家標(biāo)準(zhǔn)：按照各定標(biāo)

5、品各水平的定值和不確定度（廠家提 供），來(lái)確定準(zhǔn)確度的偏倚范圍。計(jì)算實(shí)測(cè)均值的各項(xiàng)目各水 平定標(biāo)品的偏倚，與偏倚范圍相比較，來(lái)判斷偏倚是否可以接 受。詳見(jiàn)準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)表，實(shí)測(cè)的均值如果落在該限度內(nèi)， 則為其準(zhǔn)確度認(rèn)為可被接受。（2） 按照國(guó)際推薦標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確度偏倚應(yīng)該在CLIA88允許誤差的 1/2以內(nèi)，見(jiàn)美國(guó)CLIA 88能力比對(duì)檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求。三、參考范圍驗(yàn)證參考NCCLSC28 A2文件，本方案僅對(duì)廠家提供的或者實(shí)驗(yàn)室正在 使用的各個(gè)項(xiàng)目的參考范圍進(jìn)行驗(yàn)證。方法：（1）選擇20個(gè)能夠代表實(shí)驗(yàn)室的健康總體的標(biāo)本。（2 ）保證試驗(yàn)系統(tǒng)運(yùn)行正常，依照標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測(cè)標(biāo)本。（3）運(yùn)行該20份標(biāo)本

6、，記錄結(jié)果，將結(jié)果填入?yún)⒖紖^(qū)間驗(yàn)證 表格。結(jié)果評(píng)價(jià)如果20個(gè)參考個(gè)體中不超過(guò)2例的檢測(cè)值在驗(yàn)證的參考限之外，廠 商或提供參考區(qū)間的實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的 95%參考區(qū)間可以接受。如果 3 例以上超出界限，再選擇20個(gè)參考個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證，若少于或等于 2 個(gè)觀測(cè)值超過(guò)原始參考值，則可接受，若還有3個(gè)超出參考限，需要 重新檢查各種條件，決定是否建立自己的參考區(qū)間。四、線性范圍分析測(cè)量范圍即定量檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍， 是整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)（包 括儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序、檢驗(yàn)人員等）對(duì)應(yīng)于系 列分析濃度的儀器最終輸出的信號(hào)間是否呈恒定比例的性能，是一個(gè)很重要的儀器性能分析指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同配比比例的高

7、低值新鮮患者標(biāo)本，以驗(yàn)證實(shí)測(cè)值和理論值的線性關(guān)系，來(lái)評(píng)估每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍。方法：（1）實(shí)驗(yàn)室人員必須十分熟悉儀器的操作、質(zhì)量控制和定標(biāo)方法， 以及正確的收集樣本。試驗(yàn)期間保證儀器狀態(tài)良好下，質(zhì)控在 控。（2）全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)盡可能在較短的時(shí)間內(nèi)收集， 如可能，單個(gè)分析 試驗(yàn)最好在一天內(nèi)做完。（3）用于驗(yàn)證線性范圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測(cè)試所用的標(biāo)本類型 相同或相類似，所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素（如溶 血、黃疸、脂血等）。如果上述條件不可避免，則應(yīng)在最后的報(bào)告中注明在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中所用的標(biāo)本處理方法或基質(zhì)類型。注意：收集的高濃度標(biāo)本應(yīng)盡可能的接近線性范圍高限。（4）按照線性評(píng)價(jià)表格要求配比標(biāo)本

8、。將 H和L樣品按：5L、4L+IH、3L+2H、2L十3H、IL十4H、5H 關(guān)系各自配制棍 合，形成系列評(píng)價(jià)樣品。（5）難以收集到低限樣品，可收集高值樣品，用相應(yīng)稀釋液作系列 不同程度稀釋，形成系列評(píng)價(jià)樣品。（6）在線性評(píng)價(jià)表格記錄檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果評(píng)價(jià)：將數(shù)據(jù)填入線性評(píng)價(jià)表格，以X表示各樣品的預(yù)期值， 以丫表示各樣品的實(shí)測(cè)值，得出散點(diǎn)圖。若所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)呈明顯直線趨勢(shì)，用直線回歸對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得 直線回歸 Y二bX+a，若r20.95，斜率b在1.00 0.03范圍內(nèi)，可 直接判斷測(cè)定方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)成線性。五、用患者標(biāo)本進(jìn)行方法比對(duì)及偏倚評(píng)估實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備用一個(gè)新的檢測(cè)系統(tǒng)或測(cè)定方法

9、（或新的試劑盒、新儀器 進(jìn)行病人標(biāo)本測(cè)定前，應(yīng)與原有的檢測(cè)系統(tǒng)或者公認(rèn)的參考方法-起檢測(cè)一批病人標(biāo)本，從測(cè)定結(jié)果間的差異了解新檢測(cè)系統(tǒng)或方法引人 后的偏倚。如果偏倚不大，或者偏倚量在允許誤差范圍內(nèi)，說(shuō)明兩檢 測(cè)系統(tǒng)或方法對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符，新檢測(cè)系統(tǒng)或方法替代 原有檢測(cè)系統(tǒng)或方法不會(huì)對(duì)臨床引人明顯偏倚，這樣的實(shí)驗(yàn)稱為方法 學(xué)比較實(shí)驗(yàn)。在方法學(xué)比較中，常將新方法稱為實(shí)驗(yàn)方法，與之比較 的方法稱為比較方法。試驗(yàn)方法：（1）各種儀器處于良好的工作狀態(tài)，嚴(yán)格按 SOP操作。（2） 檢驗(yàn)人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各個(gè)環(huán)節(jié)，熟悉評(píng)價(jià)方 案。（3）在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，保持實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都處于完整的

10、質(zhì)量控 制之下，始終對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有校準(zhǔn)措施。（4）實(shí)驗(yàn)時(shí)間至少做5天，時(shí)間長(zhǎng)一些更好，可以客觀反映實(shí)際情 況。（5）至少做40份病人標(biāo)本，多一點(diǎn)更好。（6）盡可能使50%的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間內(nèi)， 各個(gè) 標(biāo)本分析物含量越寬越好。（7）不要使用對(duì)任一方法有干擾的標(biāo)本。（8）每份標(biāo)本應(yīng)有足夠的量，以便使實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都能做雙份測(cè)定。例如，第I次序號(hào)為1、2.3.4、5.6、7、8 ,第2 次序號(hào)為8、7、6、5，4、3、2.1。兩方法都按此實(shí)驗(yàn)。（9）應(yīng)在2個(gè)小時(shí)內(nèi)兩種方法對(duì)同批標(biāo)本分別開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，最好使用 當(dāng)天采集的標(biāo)本。（10）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，記錄數(shù)據(jù)。保留原始數(shù)據(jù)。結(jié)果評(píng)價(jià)：（1）不

11、采用已明確有人為誤差的結(jié)果。（2）將所有無(wú)明顯誤差的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄下來(lái)。 但是，若兩種方法結(jié) 果的各自差值大于任一方法的批內(nèi)不精密度，應(yīng)查對(duì)標(biāo)本，并 重新實(shí)驗(yàn)。若找不出原因，應(yīng)保留數(shù)據(jù)備考。（3）整個(gè)實(shí)驗(yàn)一定要有內(nèi)部質(zhì)量控制，失控時(shí)結(jié)果必須重做。（4）對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的初步篩查： 設(shè)比較方法測(cè)定結(jié)果為X值，實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定結(jié)果為Y值。在 方法學(xué)比對(duì)表格上錄入檢測(cè)數(shù)據(jù)，若有40個(gè)標(biāo)本，則有80個(gè)X和Y的結(jié)果。 檢查每一方法內(nèi)現(xiàn)份測(cè)定值有無(wú)離群表現(xiàn)，先計(jì)算每一標(biāo)本 每一方法成對(duì)結(jié)果的差值和差值的均值。以4倍的各方法差值的均值 為判斷限，各方法內(nèi)標(biāo)本的成對(duì)差值都應(yīng)在限值內(nèi)， 說(shuō)明雙份測(cè)定結(jié) 果符合要求。 若原數(shù)

12、據(jù)僅40例病人標(biāo)本的結(jié)果，剔除的數(shù)據(jù)應(yīng)另做實(shí)驗(yàn)補(bǔ)上。若有1例以上需剔除，應(yīng)檢查原因是標(biāo)本原因，其他數(shù)據(jù)仍可使 用。無(wú)法找出原因，則保留使用所有數(shù)據(jù)。若最大差異超過(guò)臨床允許 誤差，應(yīng)從儀器、試劑、方法上尋找原因，停止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。（5 ）在方法學(xué)比對(duì)表格上，以X均值、Y均值和（Y-X）、X作圖， 通過(guò)這兩種圖了解線性關(guān)系，即有無(wú)明顯離群點(diǎn)，是否呈恒定變異等 情況。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果具良好線性關(guān)系，繼續(xù)處理數(shù)據(jù)。（6）X、Y關(guān)系實(shí)驗(yàn)點(diǎn)有無(wú)離群表現(xiàn)先看圖在無(wú)明顯離群點(diǎn)。若無(wú)，可作以后的統(tǒng)計(jì)；若有，應(yīng)對(duì)X、Y 配對(duì)值作離群值計(jì)算。將每一個(gè)標(biāo)本兩個(gè)方法的前后兩個(gè)測(cè)定值一一 對(duì)應(yīng)，求出第1個(gè)X與第1個(gè)丫的差值和第2

13、個(gè)X與第2個(gè)丫的差 值，并計(jì)算出所有標(biāo)本總的平均差值，以4倍的平均差值為判斷限值。 所有差值都不應(yīng)超出限值。若有，為離群點(diǎn)，僅一點(diǎn)離群點(diǎn)，剔除。 有一點(diǎn)以上離群點(diǎn)，需查原因，判斷是否保留數(shù)據(jù)。若原因不清，不 能隨意剔除，全部保留作統(tǒng)計(jì)分析，或者用一批新標(biāo)本重做評(píng)價(jià)。凡 有剔除的，應(yīng)另用標(biāo)本補(bǔ)做。（7） 標(biāo)本內(nèi)分析物含量分布是否適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)。相關(guān)系數(shù)r常用來(lái)表 示兩個(gè)變量間互相關(guān)系密切的程度。在直線回歸統(tǒng)計(jì)時(shí)，除所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)和回歸線間的離散度會(huì)影響r值的大小外，實(shí)驗(yàn)點(diǎn)對(duì) 應(yīng)的分析物含量分布寬度也會(huì)明顯影響r值的大小。若實(shí)驗(yàn)點(diǎn) 過(guò)于密集，盡管離散度不大，但r值偏小。因此，可用r檢驗(yàn)X 取值范圍是否適當(dāng)。一般要求r大于或等于0.975 （或r2大于或 等于0. 95），認(rèn)為X范圍是適合的。若r小于0.975時(shí)，應(yīng)再 多做實(shí)驗(yàn)，擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍。（8）線性回歸統(tǒng)計(jì)可用直線回歸分析來(lái)估計(jì)斜率和截距。數(shù)據(jù)以回歸式 丫二bX十a(chǎn),表示 這些數(shù)據(jù)的直線趨.這是以X方法為準(zhǔn)，Y方法與之配合的關(guān)系式。 式中b為斜率,a為截距。兩方法理想狀態(tài)的回歸式應(yīng)為丫二X，即b =1 ，a=0。根據(jù)臨