1、2020-2021學年高中生物 第1章 發酵工程 2.2 微生物的選擇培養和計數學案 新人教版選擇性必修32020-2021學年高中生物 第1章 發酵工程 2.2 微生物的選擇培養和計數學案 新人教版選擇性必修3年級：姓名：- 18 -微生物的選擇培養和計數 必備知識素養奠基一、選擇培養基1.實驗室中微生物篩選的原理:人為提供有利于目的菌生長的條件(包括營養、溫度、ph等),同時抑制或阻止其他微生物的生長。2.選擇培養基概念:在微生物學中,允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基。3.選擇培養基配方的設計:(1)原理:分解尿素的細菌合成的脲酶將尿素分解產生nh3。(2

2、)培養基配方設計:以尿素為唯一氮源的選擇培養基。 如果要從土壤中分離出固氮微生物,那么對培養基有什么要求呢?提示:固氮微生物能利用空氣中的n2,因此培養基中不應添加氮源,這樣就只有固氮微生物才能生存。 二、微生物的選擇培養1.方法:對樣品進行充分稀釋,然后將菌液涂布到制備好的選擇培養基上。2.稀釋涂布平板法的操作過程:(1)系列梯度稀釋操作: (2)涂布平板操作。取菌液:取0.1_ml菌液,添加到培養基表面。涂布器滅菌:取出浸在酒精中的涂布器,放在火焰上燃燒,酒精燃盡后,冷卻涂布器。涂布過程:用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面,涂布時可轉動培養皿,使菌液分布均勻。3.培養:待涂布的菌液被培養

3、基吸收后,將平板倒置,放入恒溫培養箱中培養,觀察。 在進行稀釋操作時,需要在酒精燈火焰附近操作嗎?解釋原因。提示:需要。在進行稀釋操作時,如果不在酒精燈火焰附近進行,就有可能造成雜菌污染。 三、微生物的數量測定1.稀釋涂布平板法:(1)統計依據。當樣品的稀釋度足夠高時,培養基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數,就能推測出樣品中大約含有多少活菌。(2)操作。一般選擇菌落數為30300的平板進行計數。選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養,在同一稀釋度下,應至少對3個平板進行重復計數,然后求平均值。2.顯微鏡直接計數:利用特定的細菌計數板或血細胞計數板,在顯微鏡下觀

4、察、計數,然后再計算一定體積的樣品中微生物的數量。四、探究實踐土壤中分解尿素的細菌的分離與計數1.提出問題:如何分離土壤中分解尿素的細菌?每克土壤樣品中含有多少分解尿素的細菌?2.基礎知識:組分含量提供的主要營養kh2po41.4 g無機鹽na2hpo42.1 gmgso47h2o0.2 g葡萄糖10.0 g碳源尿素1.0 g氮源瓊脂15.0 g凝固劑h2o定容至1 000 ml水3.實驗設計:(1)土壤取樣:先鏟去表層土,取距地表38 cm的土壤層,將樣品裝入紙袋中。(2)樣品稀釋:一般選用1_104、1_105、1_106倍的稀釋液進行平板培養。(3)微生物的培養與觀察:一般在3037_的

5、溫度下培養12天,每隔24_h統計一次菌落數目,選取菌落數目穩定時的記錄作為結果。4.操作提示:選出下列關于實驗操作的正確說法。本實驗耗時長,應提前制訂好計劃,提高效率。本實驗用到的器材比較多,應該對試管和平板做好標記。取土樣的鐵鏟和取樣紙袋使用前都要經過消毒。為了防止雜菌污染,從酒精中取出的涂布器應該直接在酒精燈火焰上充分燃燒滅菌。過熱的涂布器不能直接放在盛有酒精的燒杯中。5.結果分析與評價:結合實驗過程,判斷下列實驗分析的正誤:(1)由于使用了選擇培養基,因此本實驗不需要設置對照組。()提示:應該設置未接種的平板和接種在牛肉膏蛋白胨培養基的平板作為對照。(2)在同一稀釋度下,至少要涂布3個

6、平板。 ()(3)當菌落數目穩定時,選取菌落數在 30300 的平板進行計數。()(4)應該仔細觀察培養基上菌落的形狀、大小、顏色等特征,并要做好記錄。()(5)統計的分解尿素的細菌菌落數目就是樣品中分解尿素的活菌數目。()提示:統計的菌落數目還要經過計算才能代表樣品中的活菌數目,而且數目偏低,因為當兩個或多個細菌連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。 選擇培養基上生長分解尿素的細菌之后,ph會發生變化嗎?解釋原因。提示:會升高。分解尿素的細菌可以將尿素分解成nh3,導致培養基的ph升高。 關鍵能力素養形成知識點一微生物的選擇培養與計數方法1.選擇培養的目的:從眾多微生物中分離出需要的特定微

7、生物。2.篩選微生物常用培養基選擇培養基和鑒別培養基:選擇培養基鑒別培養基特殊成分控制某一條件(如唯一氮源)或加入某種物質(如青霉素)加入某種指示劑或化學藥品目的抑制其他微生物生長,促進目的微生物的生長與微生物的代謝產物或培養基中的成分發生特定反應用途培養、分離出特定微生物鑒別不同的微生物舉例培養酵母菌和霉菌,可在培養基中加入青霉素,抑制細菌生長;用以尿素為唯一氮源的培養基來培養尿素分解菌可用伊紅美藍培養基鑒定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有,菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤)3.稀釋涂布平板法:(1)主要操作環節:系列梯度稀釋和涂布平板。(2)系列梯度稀釋和涂布平板后培養結果如圖所示: (3

8、)計算公式:每克樣品中的菌株數=稀釋倍數(4)計數結果:由于當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,計算結果比實際值偏小。4.稀釋涂布平板法操作注意問題:(1)稀釋操作時:每支試管及其中的9 ml水、移液管等均需滅菌;操作時,試管口和移液管應在離火焰12 cm 處。(2)涂布平板時。涂布器浸在體積分數為70%的酒精中,取出時,讓多余酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中,以免引燃其中的酒精。酒精燈與培養皿距離要合適,移液管管頭不接觸任何物體。(3)同一稀釋度的樣液加到三個或三個以上的平板上,經涂布、培養,計算出菌落平均數

9、。5.兩種純化方法的比較:主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環在固體培養基表面連續劃線系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環涂布器菌體獲取在具有顯著的菌落特征的區域挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體能否用于計數不能計數可以計數,但是操作復雜,需涂布多個平板共同點都能將微生物分散到固體培養基表面,以獲得單細胞菌落,達到分離純化微生物的目的,也可用于觀察菌落特征6.顯微鏡直接計數:(1)原理:此法利用特定的細菌計數板或血細胞計數板,在顯微鏡下計算一定體積的樣品中微生物的數量。 (2)方法:顯微鏡下觀察,細菌計數板或血細胞計數板計數。(3)計算公式:每毫升原液所含細菌數=每

10、小格平均細菌數40010 000稀釋倍數(4)缺點:統計的結果一般是活細菌和死細菌的總和,計算結果比實際值偏大。 (2020全國卷)某種物質s(一種含有c、h、n的有機物)難以降解,會對環境造成污染,只有某些細菌能降解s。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解s的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養基,甲的組分為無機鹽、水和s,乙的組分為無機鹽、水、s和y。 回答下列問題:(1)實驗時,盛有水或培養基的搖瓶通常采用_的方法進行滅菌。乙培養基中的y物質是_。甲、乙培養基均屬于_培養基。(2)實驗中初步估測搖瓶m中細菌細胞數為2107 個/ml,若要在每個平板上涂布100 l 稀釋后

11、的菌液,且保證每個平板上長出的菌落數不超過200個,則至少應將搖瓶m中的菌液稀釋_倍。(3)在步驟的篩選過程中,發現當培養基中的s超過某一濃度時,某菌株對s的降解量反而下降,其原因可能是_(答出1點即可)。(4)若要測定淤泥中能降解s的細菌細胞數,請寫出主要實驗步驟_。(5)上述實驗中,甲、乙兩種培養基所含有的組分雖然不同,但都能為細菌的生長提供4類營養物質,即_。【解析】本題主要考查培養基的類型及其應用、無菌技術和微生物的分離與計數。(1)常用高壓蒸汽滅菌法處理盛有水或培養基的搖瓶。由圖中過程可知,甲為液體培養基,乙為固體培養基,所以乙培養基中需要加入的y為瓊脂。甲和乙培養基可以用于篩選能降

12、解s的菌株,因此均屬于選擇培養基。(2)若要在每個平板上涂布100 l稀釋后的菌液,且每個平板上長出的菌落數不超過200個,根據計算公式:細菌細胞數=(cv)m可知,稀釋倍數m=2107vc=21071000100200=104(倍)。(3)當培養基中的s超過某一濃度后,可能會抑制菌株的生長,從而造成其對s的降解量下降。(4)要測定淤泥中能降解s的細菌的細胞數,可以取淤泥加無菌水制成菌懸液,稀釋涂布到乙培養基上,培養后進行計數。(5)甲和乙培養基均含有水、無機鹽、碳源、氮源等成分。答案:(1)高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇(2)104(3)s的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長(4)取淤泥加入無菌水,涂布

13、(或稀釋涂布)到乙培養基上,培養后計數(5)水、碳源、氮源和無機鹽【誤區警示】稀釋涂布平板法分離微生物常見誤區(1)誤認為不用涂布均勻:用涂布器涂布平板時一定要涂布均勻,否則難以得到單菌落。(2)誤認為不用冷卻:涂布器使用前應進行酒精浸泡,然后灼燒滅菌,冷卻之后再涂布,否則會由于溫度過高殺死菌種。 【素養遷移】(2020棗莊高二檢測)篩選是分離和培養微生物新類型常用的手段,下列有關技術中不能篩選成功的是()a.在全營養的lb培養基(普通培養基)中,篩選大腸桿菌b.在尿素固體培養基中,篩選能夠分解尿素的微生物c.用纖維素為唯一碳源的培養基,篩選能分解纖維素的微生物d.在培養基中加入不同濃度的氯化

14、鈉,篩選抗鹽突變體的微生物【解析】選a。在全營養的lb培養基中,幾乎所有細菌都能生長,不能篩選出大腸桿菌,a錯誤;在尿素固體培養基中,只有能分解尿素的微生物才能生長,不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生長,能夠篩選分解尿素的微生物,b正確;在纖維素為唯一碳源的培養基上,只有能分解纖維素的微生物才能生長,不能分解纖維素的微生物因缺乏碳源不能生長,能篩選分解纖維素的微生物,c正確;在培養基中加入不同濃度的氯化鈉,能篩選抗鹽突變體微生物,d正確。【補償訓練】下列關于測定土壤中微生物數量的敘述,不正確的是()a.顯微鏡直接計數計算的結果比實際值偏大b.當樣品的稀釋度足夠高時,一個活菌會形成一個菌落c.

15、采用平板計數法獲得的菌落數往往少于實際的活菌數d.統計菌落數目時,只要菌落數目在30300的平板都可以計數,并以它們的平均值作為統計結果【解析】選d。顯微鏡直接計數統計的結果一般是活細菌和死細菌的總和,計算結果比實際值偏大,a正確;當樣品的稀釋度足夠高時,一個活菌會形成一個菌落,b正確;采用平板計數法獲得的菌落有可能是由多個細菌形成的,所以往往少于實際的活菌數,c正確;統計菌落數目時,應選擇同一稀釋倍數下涂布的菌落數量為30300之間的平板進行計數,d錯誤。知識點二土壤中分解尿素的細菌的分離與計數1.分離菌種的原理:在以尿素為唯一氮源的選擇培養基上,只有能產生脲酶的微生物才能分解尿素,而缺乏脲

16、酶的微生物由于不能分解尿素,會因缺乏氮源而無法生長繁殖。2.實驗流程示意圖: 3.實驗操作過程:流程具體操作操作提示土壤取樣先鏟去表層土,取距地表 38 cm的土壤層,將樣品裝入紙袋中適宜在富含有機質,酸堿度接近中性的潮濕土壤中取樣取樣用的鐵鏟和取樣的紙袋使用前都需要滅菌制備培養基分別配制牛肉膏蛋白胨培養基和以尿素為唯一氮源的選擇培養基牛肉膏蛋白胨培養基作為對照組,用來判斷選擇培養基是否具有選擇的作用樣品的稀釋和涂布火焰旁稱取土壤樣本將稀釋倍數為103107的稀釋液涂布平板。每個稀釋度至少涂布三個平板作為重復組注意無菌操作 對所用的平板、試管做好標記初次實驗對于稀釋的范圍沒有把握,可選擇一個較

17、為寬泛范圍103107倍的稀釋液培養、觀察和計數將涂布好的平板和空白平板放在適宜溫度下的培養箱中倒置培養每隔24 h統計一次菌落數目,比較牛肉膏蛋白胨培養基和選擇培養基中菌落的數量、形態等,并做好記錄當菌落數目穩定時,選取菌落數在30300 的平板進行計數空白平板作為對照,檢測培養基制備是否合格觀察時還要記錄不同菌落的形狀、大小、顏色等在同一稀釋度下,至少對3個平板進行計數,然后求出平均值,并根據平板所對應的稀釋度計算出樣品中活菌的數目4.實驗結果分析:內容現象結論有無雜菌污染的判斷對照的培養皿中無菌落生長未被雜菌污染培養基中菌落數偏高被雜菌污染菌落形態多樣,菌落數偏高培養基中混入其他雜菌選擇

18、培養基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養基上的菌落數目大于選擇培養基上的數目選擇培養基具有篩選作用樣品的稀釋操作得到3個或3個以上菌落數目在30300的平板操作成功重復組的結果若選取同一種土樣,統計結果應接近5.鑒定原理:分解尿素的細菌合成的脲酶將尿素分解為nh3,使培養基的堿性增強,ph升高。在選擇培養基中加入酚紅指示劑,培養某種細菌,若指示劑變紅,可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。 【特別提醒】實驗中的兩種“對照組”與“重復組”(1)兩種對照組作用比較。判斷培養基中“是否有雜菌污染”,需將未接種的培養基(空白對照組)同時進行培養。判斷選擇培養基“是否具有篩選作用”,需設置完全培養基(牛肉膏蛋白胨培養

19、基)進行接種培養,觀察兩種培養基上菌落數目,進行對比得出結論。(2)重復組的設置及作用:為排除偶然因素對實驗結果的干擾,在每一稀釋度下宜設置3個平板作為重復組,選擇菌落數均在30300且數目相差不大的三個平板,用“平均值”代入計數公式計算活菌數。 巴氏芽孢桿菌是一類具有較高脲酶活性,能夠分解尿素的細菌,廣泛分布在土壤、堆肥及污水中。這種細菌能夠將氮肥中的尿素分解成氨態氮被植物吸收,對土壤的肥力有著重要作用。研究人員擬從土壤樣品中分離該類細菌,如圖所示為操作流程,表示操作步驟。請回答下列問題: (1)制備培養基時,按照培養基配方準確稱量各組分,將其溶解、定容后,調節培養基的_,及時對培養基進行分

20、裝,并進行_滅菌。(2)步驟富集培養所使用的培養基按用途來分應為_培養基,步驟的主要目的是_。(3)在步驟的培養基中加入_指示劑,根據培養基是否變紅來鑒定是否為尿素分解菌。若用該方法培養設置了3個培養皿,菌落數分別為163個、158個、159個,則可以推測富集培養后的菌液中每毫升含活菌數為_個,運用這種方法統計的結果往往較實際值_。(4)要進一步分離純化巴氏芽孢桿菌采用步驟_法進行操作,在該操作過程中接種工具至少要灼燒_次。【解題導引】解答本題的兩個關鍵知識點:(1)培養基滅菌的方法:常用高壓蒸汽滅菌。(2)培養基種類的判斷:富集培養目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度,所使用的培養基屬于選擇培養基。

21、【解析】(1)制備培養基時,操作過程為計算、稱量、溶化、配制培養液、調節ph、分裝、包扎、滅菌、倒平板,培養基需要進行高壓蒸汽滅菌。(2)圖中步驟富集培養所使用的培養基屬于選擇培養基,目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數量)。(3)鑒別尿素分解菌時需要使用酚紅指示劑,根據培養基是否變紅來鑒定是否為尿素分解菌。富集培養后的菌液中每毫升含活菌數為(163+158+159) 30.1103=1.6106個,用稀釋涂布平板法進行計數時,由于一個菌落可能是兩個或多個微生物細胞的后代形成的,所以統計的結果往往較實際值偏低。(4)圖中分離純化巴氏芽孢桿菌采用的方法是平板劃線法,圖中劃線區域共4個,所以該操作過程

22、中接種工具至少要灼燒4+1=5次。答案:(1)ph高壓蒸汽(濕熱)(2)選擇增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數量)(3)酚紅1.6106偏低(4)平板劃線5【誤區警示】從土壤中分離微生物的注意事項(1)一般步驟:土壤取樣、選擇(富集)培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。(2)選擇分離過程中需要使用選擇培養基,要做到全過程無菌操作。(3)常用的固體培養基上的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。 【素養探究母題追問】 (1)科學思維分析與綜合上題步驟中用到的培養基的氮源是什么物質?提示:步驟中用到的培養基屬于選擇培養基,目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數量),應該以尿素為氮源。(2)科學思維演繹與推理某同

23、學發現他涂布的培養基上菌落數目過多連成一片,請你幫他分析可能的原因并提出合理的處理措施。提示:可能是稀釋倍數不夠,導致菌液濃度過高,可以通過增大稀釋倍數解決。 【素養遷移】尿素是一種重要的農業肥料,但若不經細菌的分解,就不能更好地被植物利用。下列有關土壤中尿素分解菌的分離和培養的敘述,正確的是()a.培養基中加入尿素作為唯一碳源,該培養基是鑒別培養基b.測定土壤中分解尿素的細菌數量和測定土壤中放線菌的數量可采用相同的稀釋度c.細菌合成的脲酶能將尿素分解成氨,氨會使培養基的堿性增強,ph升高d.利用稀釋涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的細菌的分離計數和純化鑒定【解析】選c。培養基中加入尿素作

24、為唯一碳源,該培養基是選擇培養基,a錯誤;因為土壤中各類微生物的數量不同,故為獲得不同類型的微生物,要按不同的稀釋倍數進行分離,b錯誤;細菌合成的脲酶能將尿素分解成氨,氨會使培養基的堿性增強,ph升高,可加入酚紅指示劑進行檢測,c正確;鑒定分解尿素的細菌應該用加酚紅的鑒別培養基,d錯誤。【補償訓練】在做分離分解尿素的細菌實驗時,a同學從對應106培養基上篩選出大約150個菌落,而其他同學只篩選出大約50個菌落。a同學的結果產生的原因可能有()土樣不同培養基被污染操作失誤沒有設置對照a.b.c.d.【解析】選a。土樣不同、培養基被污染和操作失誤都會影響實驗結果,對照的設置對實驗結果沒有影響。【課

25、堂回眸】 課堂檢測素養達標 【概念診斷】1.下列關于微生物的培養與計數的描述正確的是。分離分解尿素的細菌要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養基對微生物計數可以使用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種微生物使用顯微鏡直接計數的統計結果比樣品中的實際活菌數偏高在實驗過程中,應遵循平行重復原則,同一稀釋倍數下至少涂布三個平板進行微生物培養時要每隔24 h統計一次菌落的數目獲得菌落數目為30300的平板就說明實驗操作成功【解析】選。在以尿素為唯一氮源的選擇培養基上,只有能利用尿素的微生物才能生長,正確;對微生物計數使用稀釋涂布平板法接種微生物,平板劃線法無法計數,錯誤;使用顯微鏡直接計數統計的是活菌和死菌的數量

26、,結果比樣品中的實際活菌數偏高,正確;在實驗過程中,應遵循平行重復原則,同一稀釋倍數下至少涂布三個平板,正確;進行微生物培養時要每隔24 h統計一次菌落的數目,正確;應是在同一稀釋倍數下,獲得菌落數目為30300 的平板,且差距不能過大,說明實驗操作成功,錯誤。2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()a.co2和n2b.葡萄糖和nh3c.co2和尿素d.葡萄糖和尿素【解析】選d。合成脲酶的微生物能夠分解尿素,所以碳源是葡萄糖,氮源是尿素。3.用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時()可以用相同的培養基 都需要使用接種環進行接種 都需要在酒精燈火焰旁進行接種 都可以用來計數活菌a.

27、b.c.d.【解析】選c。平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養基,可以使用相同的培養基,正確;平板劃線法采用接種環進行操作,而稀釋涂布平板法采用涂布器進行操作,錯誤;純化時,要進行無菌操作,需要在酒精燈火焰旁接種,避免空氣中的微生物混入培養基,正確;平板劃線法一般用于分離而不是計數,錯誤。4.(2020浙江7月選考改編)下列關于微生物培養及利用的敘述,錯誤的是()a.利用尿素固體培養基可迅速殺死其他微生物,而保留利用尿素的微生物b.配制培養基時應根據微生物的種類調整培養基的phc.酵母菌不能直接利用糯米淀粉發酵得到糯米酒d.適宜濃度的酒精可使醋酸菌活化【解析】選a。本題主要考查微生物的培養

28、條件和應用。尿素固體培養基上,由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生長繁殖,而保留利用尿素的微生物,并非迅速殺死其他微生物,a項錯誤;不同的微生物所需的ph不同,所以配制培養基時,應根據微生物的種類調整培養基的ph,b項正確;酵母菌不能直接利用淀粉,應用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化,再用酵母菌發酵得到糯米酒,c項正確;醋酸菌在有氧條件下能利用酒精產生醋酸,所以適宜濃度的酒精可以使醋酸菌活化,d項正確。5.下列關于菌種計數方法的敘述不正確的是()a.當樣品的稀釋度足夠高時,能在培養基表面形成單個菌落b.應該選取培養基表面菌落數目穩定時的記錄作為有效數據c.為了保證結果準確,一般采用密度較

29、大的平板進行計數d.在某一濃度下涂布三個平板,以它們的平均值作為統計結果【解析】選c。當樣品的稀釋度足夠高時,培養基表面一個活菌會形成一個菌落,a正確;應該選取培養基表面菌落數目穩定時的記錄作為有效數據,b正確;為了保證結果準確,一般選取菌落數在30300之間的平板進行計數,c錯誤;在某一濃度下涂布三個平板,若三個平板統計的菌落數差別不大,則應以它們的平均值作為統計結果以減小實驗誤差,d正確。 【思維躍遷】6.自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純,然后進行數量的測定。下面是有關土壤中分解尿素的細菌分離和計數的實驗過程,請回答有關問題。(1)若取土樣6 g,應

30、加入_ml的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液。因土壤中細菌密度很大,需要不斷加以稀釋,配制成101107不同濃度的土壤溶液。將103107倍的稀釋液分別吸取0.2 ml加入固體培養基上,用涂布器將菌液鋪平,每個稀釋度下至少涂布3個平板,這種接種方法稱為_。將接種的培養皿放置在37 恒溫培養箱中培養2448 h,觀察并統計菌落數,結果如下表,其中_倍的稀釋比較合適,由此計算出每克土壤中的菌落數為_。這種方法測定的菌落數往往比活菌的實際數目_(填“低”或“高”)。稀釋倍數103104105106107菌落數/個1號平板4783672772652號平板4963542612083號平板509332254

31、293(2)若研究尿素分解菌的群體生長規律,可采用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌。操作時,接種環通過灼燒滅菌,在第二次及以后劃線時,總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是_。將分離純化后的單個菌落進行液體培養,可采用定期取樣的方法進行計數。若以一個大方格(體積為0.1 mm3)有25個中方格的計數板為例進行計算,設5個中方格中總菌數為45,菌液稀釋倍數為102 ,那么原菌液的菌群密度為_個/ml。 【解析】(1)根據題意分析,需要稀釋10倍的土壤溶液,因此應該將6 g土樣加入54 ml的無菌水進行配制;將103107倍的稀釋液分別吸取0.2 ml加入固體培養基上,用稀釋涂布平板法將菌液用涂布器涂布到固體培養基上;估算樣品中的活菌數時,往往選取菌落數在30到300之間的平板,分析表格中數據可知,稀釋倍數為105的平板菌落數在這一范圍;每克土壤中的菌落數為(277+261+254)31050.26=2.2107。稀釋涂布平板法進行微生物計數時,由于菌落之間會相互重疊,因此測定的菌落數往往比活菌的實際數目低。(2)用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌時,為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得(不連續