1、 本課題使用的洗滌劑是多組分的混合物，在嚴格的 科學實驗中很少使用。實驗室提取高純度的DNA時， 通常使用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、十二烷 基硫酸鈉（SDS）或吐溫等化學試劑。 提取提取DNA的的第一步是材料的選取第一步是材料的選取，其目的是一，其目的是一 定要選取定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會由于實含量較高的生物材料，否則會由于實 驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；第二第二 步是步是DNA的釋放和溶解，的釋放和溶解，這一步是實驗成功與否的這一步是實驗成功與否的 關鍵，要盡可能使細胞內(nèi)的關鍵，要盡可能使細胞內(nèi)的DNA全部溶解；全部

2、溶解；第三步第三步 是是DNA的純化，的純化，即根據(jù)即根據(jù)DNA的溶解特性、對酶及的溶解特性、對酶及 高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將DNA與與 雜質(zhì)分開；雜質(zhì)分開；最后一步是對最后一步是對DNA進行鑒定進行鑒定，這是對整，這是對整 個實驗的結果的檢測。個實驗的結果的檢測。 1 1、請解釋提取、請解釋提取DNA的實驗操作主要步驟的目的的實驗操作主要步驟的目的 練習練習 2 2、你認為從細胞中提取某種特定的蛋、你認為從細胞中提取某種特定的蛋 白質(zhì)與提取白質(zhì)與提取DNADNA一樣容易嗎？一樣容易嗎？ 答：提取蛋白質(zhì)比提取答：提取蛋白質(zhì)比提取DNA的的難度

3、大難度大。這是因為，。這是因為， 與與DNA相比，相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件等條件 要敏感得多要敏感得多，很容易失活；并且，很容易失活；并且蛋白質(zhì)的空間結構蛋白質(zhì)的空間結構 多種多樣，理化性質(zhì)各不相同多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取，使得蛋白質(zhì)的提取 沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性 摸索提取的條件，設計特定的方法。摸索提取的條件，設計特定的方法。 2.實驗中實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和 0.14 molL對對DNA有何影響有何影響? 1.在在DNA的粗提取實

4、驗過程中，兩次向燒杯的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯 中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是( )。 A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品 B.使血細胞破裂、降低使血細胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出 C.使血細胞破裂、增大使血細胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA 答：答：B 答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出 3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會染成會染成( ) ( ) A. A.磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫色紫色 D.D.藍色藍

5、色 4.提取雞血中的提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液時，為什么要除去血液 中的上清液中的上清液? 答：答：DNA的提取，關鍵是對雜質(zhì)的去除，由于的提取，關鍵是對雜質(zhì)的去除，由于 上清液是血液中的血漿部分，不含上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以，所以 要除去上清液要除去上清液(含有蛋白質(zhì)含有蛋白質(zhì))。 答：答：D 為什么反復地溶解與析出為什么反復地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？，能夠去除雜質(zhì)？ 1 1、用高鹽濃度的溶液溶解、用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除，能除 去去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)； 2 2、用低鹽濃度使、用低鹽濃度使DNA析出，能除去析出，能除去溶

6、溶 解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。 因此，通過反復溶解與析出因此，通過反復溶解與析出DNA，就能，就能 夠除去與夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。溶解度不同的多種雜質(zhì)。 過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細胞液過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細胞液 目的目的: :獲得含核物質(zhì)的濾液獲得含核物質(zhì)的濾液 過濾含粘稠物的過濾含粘稠物的0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 目的目的: :獲取紗布上的粘稠物獲取紗布上的粘稠物 過濾溶解有過濾溶解有DNA的的2 2mol/LNaCl溶液溶液 目的目的: :得到含得到含DNA的濾液的濾液 本實驗中有三次過濾本實驗中有三次過濾 , ,分別有什么作用分別有什

7、么作用? ? 第一次攪拌加蒸餾水的雞血細胞液第一次攪拌加蒸餾水的雞血細胞液 加速細胞的破裂加速細胞的破裂 第二次攪拌加第二次攪拌加2 2mol/LNaCl溶液的濾液溶液的濾液 使使DNA與溶液混合均勻與溶液混合均勻 第三次攪拌加蒸餾水至第三次攪拌加蒸餾水至0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 稀釋稀釋NaCl溶液溶液, ,析出析出DNA 第四次攪拌放入第四次攪拌放入2 2mol/LNaCl溶液中紗布上的粘稠物溶液中紗布上的粘稠物 使使DNADNA盡可能多的溶于溶液中盡可能多的溶于溶液中 第五次攪拌體積分數(shù)為第五次攪拌體積分數(shù)為95%95%的酒精的酒精 提取含雜質(zhì)較少的提取含雜質(zhì)較少的DN

8、A 實驗中有五次用玻璃棒攪拌實驗中有五次用玻璃棒攪拌? ?分別有什么作用分別有什么作用? ? 方法步驟方法步驟 加入物質(zhì)加入物質(zhì) 目的目的 1 1.制備雞血細胞液制備雞血細胞液 檸檬酸鈉溶液檸檬酸鈉溶液 2 2.提取雞血細胞細胞核物質(zhì)提取雞血細胞細胞核物質(zhì) 20 m120 m1蒸餾水蒸餾水 幻燈片 18 3 3.溶解細胞核內(nèi)的溶解細胞核內(nèi)的DNADNA 2 m12 m1L L 的的NaCINaCI溶液溶液4040mLmL 幻燈片 18 4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏稠物 蒸餾水蒸餾水 5 5.濾取含濾取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.將將DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物

9、再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.過濾含過濾含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的 DNADNA 冷卻的冷卻的9595的酒精的酒精50 mL50 mL 幻燈片 18 A A:(1)1)向試管中加入向試管中加入0 0.015 mol015 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)2)加入加入DNADNA (3)43)4 mLmL二苯胺試劑二苯胺試劑 9 9.DNADNA的鑒定的鑒定 B B:(1)(1)向試管中加入向試管中加入0 0.015mol015molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m2)4 mL 二苯胺試劑二苯胺試劑 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固 加速血細胞破裂加速血細胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀釋至溶液稀釋