1、ZIBO VOCATIONAL INSTITUTE畢業論文課題名稱花生殼中抗氧化物的提取方法姓名 學號所在系專業年級指導教師 職 稱二O 年 月 日摘要本文主要研究了回流浸提法從花生殼中提取天然抗氧化成分（主要是黃酮類化合物）的方法。討論了溶劑（主要是甲醇、乙醇）、時間（2h、3h、4h）、溫度（70 C、80C、90C ）、酸度（pH=2、3、5）等因素對提取效果的影響。以蘆丁為標準物，用分光光度法在紫外區對總黃酮的含量進行測定。并通過正交試驗確定了最佳提取工藝。通過對比，結果表明最佳提取工藝條件為：乙醇為提取劑，濃度為70%提取溫度為90C, pH=3,提取時間為4h時提取物中總黃酮含量較

2、高。關鍵詞：花生殼；黃酮類；提取；分光光度法11摘要 2概述 31試驗材料與方法 31.1 試驗材料 31.1.1 原料 31.1.2 試劑 31.2儀器設備 31.3實驗方法 31.3.1總黃酮含量的測定31.3.2原料的預處理 41.3.3提取方法41. 3.4樣品制備流程42. 預試驗結果對比 43試驗結果與分析 53. 1試驗方案設計 53. 2試驗結果分析 54結果與討論 74.1結果 74.2討論 7參考文獻 8謝辭 9概述花生，長生果，豆科，一年生草本。目前，其開發利用的主要是花生仁、花生紅衣和花生根，花生果殼大部分用作燃料或當作廢渣棄去，造成自然資源的極大浪費，直接影響了花生的

3、綜合利用價值。我國每年花生莢果產量約500萬t，其中花生殼占140萬t。研究表明，花生殼中除了含有大量碳水化合物及粗纖維外，還有黃酮類化合物， 該類化合物有很好的清除自由基的作用。據報道，成熟的花生殼中有含量(質量含量， 下同)為3.34%7.13%的多酚類物質。酚類物質是油脂的抗氧化劑，若花生殼中酚類物 質超過0.167%時，就顯出抗氧化作用2。因此，若把花生殼中的多酚類物質提出，即可 獲得天然的食品抗氧化劑。近年來，有醫學報道，花生殼中的黃酮類化合物質有降血壓、降血脂和治療冠心病 的作用。所以，從花生殼中提取的抗氧化成分不僅是油脂的防腐劑，而且還有保健作用, 是一種多功能的食品添加劑。1試

4、驗材料與方法1.1試驗材料1.1.1 原料 花生殼1.1.2試劑天津北方天醫化學試劑廠北方化工廠天津北方天醫化學試劑廠天津市標準科技有限公司煙臺三合化學試劑有限公司95%L醇分析純無水甲醇分析純無水乙醇分析純固體NaOH(1:1 ) HCl 溶液5%NaNO2 溶液10%AI (NO) 31.2 儀器設備粉碎機FFC-15電子天平AR2130/C山東即墨市雙工機械廠制造上海電子儀器廠電熱恒溫水浴鍋HWS-20龍口市先科儀器公司旋轉蒸發儀RE52CS上海亞榮生化儀器廠循環水式多用真空泵 SHB-BA95型鄭州長城科工貿有限公司真空干燥箱DZF-6050上海精宏實驗設備有限公司紫外可見分光光度計7

5、21上海精密科學儀器有限公司1.3試驗方法1.3.1總黃酮含量的測定3蘆丁標準曲線的制作配制0.2mg/mL的蘆丁溶液50mL，取不同體積的蘆丁溶液于 7個25mL容量瓶中，每 個反應管中蘆丁含量分別為0.0mg，0.2mg，0.4mg，0.6mg，0.8mg，1.0mg，1.2mg。各加入5%勺NANO溶液1mL，放置6min，再加入10%勺AL（ N） 3溶液1mL放置6min， 然后加入4%勺NAOH溶液10mL，用蒸餾水定容，靜置15min，以第一管做參比，在510nm 處測吸光度，繪制標準曲線，得蘆丁質量濃度與吸光度的關系曲線方程：Y=0.4198X+0.0159氏=0.9995樣品

6、溶液的制備分別稱取不同方法下提取的干燥后的總黃酮物適量于25mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻溶解，分別吸取 1mL置于25mL容量瓶中，在510nm處測吸光度A,然后 由標準曲線方程計算得到黃酮的含量。1.3.2原料的預處理花生殼經清洗后，晾干，在 50 C60 C的溫度下烘干23h，然后在常溫下自然干 燥，保存于干燥的環境下。用粉碎機將花生殼粉碎，過40目篩。干燥保存備用。1.3.3提取方法預試驗是以75%勺乙醇作為溶劑，在同樣的溫度（80C）,同樣的時間（3h）,同樣 的溶劑比（1:30 ）和pH值（pH=3條件下用回流浸提和直接浸提來提取黃酮，對比哪種 方法提取的黃酮含量高。回流浸

7、提法稱花生殼粉5g于250mL圓底燒瓶中，用1:30的料液比加入150mL70喲乙醇溶液調pH=3（經查閱資料知在酸性條件下提取率高），在80C下回流浸提3h,真空抽濾，濾 液經減壓蒸餾（35E ）回收溶劑，濃縮至干，用無水乙醇將干燥物洗出，真空干燥至恒 重。直接提取法稱花生殼粉5g于250mL錐形瓶中，用1:30的料液比加入150mL70喲乙醇溶液，調 pH=3,在80T下直接浸提3h，真空抽濾，濾液經減壓蒸餾（35C）回收溶劑，濃縮至干, 用無水乙醇將干燥物洗出，真空干燥至恒重。1.3.4樣品制備流程濾渣花生殼f粉碎f稱量（5.000g 回流浸提f趁熱抽濾f濾液真空旋轉蒸發一濃縮粗提液一無

8、水乙醇洗出一真空干燥1.3.5試驗方案設計選用乙醇（濃度分別為 60% 70% 80%、甲醇（濃度分別為 60% 75% 90%兩種 不同濃度的不同溶劑作為提取劑來進行試驗。由于料液比對提取效果影響不大，固定料液比為1: 30。選擇乙醇濃度（）、提取時間（h ）、提取溫度C ）和pH值四個因素作為正交試驗的考察因素，提取率（提取物中黃 酮的含量%作為試驗指標，進行正交試驗。試驗因素與水平見表2（乙醇為提取劑）、表3 （甲醇為提取劑）。表2 乙醇試驗因素與水平表乙醇濃度（%）提取時間（h）提取溫度（C ）pH值160270227038033804905表3甲醇試驗因素與水平表甲醇濃度（）提取時間

9、（h）提取溫度C ）pH值1602702275380339049052.試驗結果與分析2.1預試驗結果按1.3.3方法進行實驗，結果見表1。表1不同提取方法的比較提取方法乙醇回流浸提法乙醇直接浸提法提取物總量（g）0. 1830.227總黃酮含量（%18.697.46提取率（%3.884.54經對比，回流浸提法提取率雖然低，但是總黃酮含量高，由于本試驗是以總黃酮含量作為考察指標，因此，選用回流浸提法進行正式試驗。在預試驗中，由于粉碎的太細，纖維物質影響浸提使提取物顏色成為深紅棕色，所以正式試驗選用過完40目的粗粉末2.2試驗結果分析正交試驗設計與結果分析見表 4 （乙醇為提取劑）、表5 （甲醇

10、為提取劑）表4乙醇正交試驗設計及結果表L9（ 34）A（濃度%）B（時間h）C(溫度C )D(pH)提取量（g）提取率（%黃酮含量（%）11(60)1(2)1(70)1(2)0.1432.8612.3421(60)2(3)2(80)2(3)0.1172.3414.4931(60)33(90)3(5)0.1462.9215.6042(70)1(2)2(80)3(5)0.1843.6817.1252(70)2(3)3(90)1(2)0.2454.9018.4662(70)31(70)2(3)0.1743.4816.9373(80)1(2)3(90)2(3)0.2314.6217.6283(80)2

11、(3)1(70)3(5)0.1412.8216.2093(80)32(80)1(2)0.3867.7217.34Ki42.4347.0845.4748.14K252.5149.1548.9549.04K351.1649.8751.6848.92ki14.1415.6915.1616.05k217.5016.3816.3216.35k317.0516.6217.2316.31極 差3.360.932.070.3由上表可知,乙醇四種因素最佳組合為濃度為70% t=4h , T=90C, pH=3o黃酮含量為18.46%。因素影響依次是濃度 溫度時間pH。表5甲醇正交試驗設計及結果表L9( 34)A

12、(濃度%)B(時間h)C(溫度C )D(pH)提取量(g)提取率(%)黃酮含量(%)11(60)1(2)1(70)1(2)0.3056.1011.1821(60)2(3)2(80)2(3)0.2264.5213.9531(60)33(90)3(5)0.3136.2613.2742(75)1(2)2(80)3(5)0.2104.2016.6352(75)2(3)3(90)1(2)0.4138.2614.2362(75)31(70)2(3)0.3386.7615.0873(90)1(2)3(90)2(3)0.3236.4615.7783(90)2(3)1(70)3(5)0.1933.8617.99

13、93(90)32(80)1(2)0.4098.1814.40K138.443.5843.2539.81K245.9446.1745.9844.80Ke48.1642.7543.2747.89k112.814.5314.4213.27k215.3115.3915.3314.93k316.0514.2514.4215.96極 差3.251.140.912.69由上表可知,甲醇四種因素的最佳組合為濃度為90% t=3h , T=80C, pH=5黃酮含量為17.99%。各因素影響依次是濃度 沖日寸間 溫度。對比上述兩個表的結論，可以得到，花生殼中總黃酮含量的最佳提取劑是乙醇，最佳提取工藝是70%L醇

14、，溫度在90C, pH=3時提取4h。黃酮的含量為18.46%。3結論與討論3.1結論 通過預試驗對比了回流浸提法和直接浸提法，乙醇回流浸提法黃酮含量為18.69%,乙醇直接浸提法黃酮含量為7.46%。試驗確定了用回流浸提法效果好，因此正試驗中采用回流浸提法來提取花生殼中的總黃酮。 花生殼中總黃酮含量的最佳提取劑是乙醇，最佳提取工藝是70%乙醇，溫度在90C,pH=3時提取4h。黃酮的含量為18.46%。3.2討論用乙醇提取花生殼中的抗氧化成分，影響因素有溫度、時間、酸度、提取劑濃度和溶 質溶劑比，考慮到固液比對提取效果影響不大，試驗只討論了前四種因素的影響，通過 正交試驗確定了最佳提取工藝為

15、濃度為70%浸提時間為4h，溫度為90C, pH值為3時提取效果比較好。預實驗中，抽濾之后，濾液為紅褐色，濾渣為米黃色，真空濃縮時，開始出現的干燥 固體是土黃色，后來成為紅褐色，原因可能由于真空旋轉時溫度高，因此，正試驗中將 減壓蒸餾和真空干燥的溫度調低。另一原因可能是由于花生殼粉碎的太細，里面含有的 纖維物質影響了浸提，所以，正實驗中換用過完 40目后的粗粉末。用分光光度法測定花生殼中總黃酮含量方法簡單，準確性較好，可為今后利用花生殼 提取黃酮類化合物建立質量控制標準提供參考4。由正交表可得到，溶劑的濃度對提取效果的影響最大。由于標準曲線是用水定容的， 而黃酮在水中的溶解性很小，導致測得的數據精確性和準確性不高，因此，時間、溫度 和pH值對提取效果的影響沒有得到規律。測得的黃酮含量比較低，分析原因可能是由于本試驗只研究黃酮的提取方法5，并沒有涉及到將產品進一步分離，純化，同時也可能與干燥操作有一定的關系。有待于以后 繼續進行1朱麗靜花生殼綜合利用2萬素英等.食品抗氧化劑3苗敬芝等.銀杏類黃酮參考文獻J.科技信息，1996,(9):23M.中國輕工業出版社,24.1998. 1 3.