1、芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂

2、蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇

3、荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁

4、膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅

5、蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿

6、芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆

7、葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁

8、莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅

9、膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿

10、蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅

11、芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈

12、蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅

13、莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿

14、膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃

15、莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇

16、芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂

17、蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆

18、節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀

19、薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇

20、莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁

21、羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆

22、蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀

23、節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄

24、薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿

25、莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆

26、膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀

27、蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈肂蒀蚈蝕芇莆蚇螃肀節蚆裊芆膈蚅肇肈薇蚄螇羈蒃蚄衿膇荿蚃羂罿芅螞蟻膅膁螁螄羈蒀螀袆膃莆蝿羈羆節螈螈膁羋螈袀肄薆螇羃芀蒂螆肅肅莈螅螅羋芄莂袇肁膀蒁罿芆葿蒀蠆聿蒞葿袁芅莁蒈羃膇芇蕆肆羀薅蒆螅膆蒁蒆袈罿莇蒅羀膄芃薄蝕羇腿薃螂膂蒈薂羄羅蒄薁肇芁莀薀螆肅芆薀衿艿膂蕿羈 發酵課后題參考答案第一章 一.發酵工程技術的發展大致可分為那幾個階段？每個階段的技術特點是什么？答：發酵工程技術大致可分為六個發展階段分別為： 1.自然發酵階段，在這一階段人們對微生物的性質尚未認知，

28、只是利用自然接種方法進行發酵制品的生產。此階段的技術特點是多數產品屬嫌氣發酵，且非純種培養，憑經驗傳授技術和產品的質量不穩定的特點。2.轉折階段，這一階段又可分為三個階段。第一個階段以純種培養和無菌操作技術為轉折點，這一階段的技術特點發酵過程避免了雜菌污染，發酵效率逐步提高，生產規模逐漸擴大，產品質量穩定提高。第二個轉折點是深層液體通氣攪拌純種培養的采用，這一階段的技術特點是深層液體通氣攪拌純種培養技術解決了大量培養基和生產設備的滅菌以及大量無菌扛起的制備問題，且在提取精制中采用離心萃取機，冷凍干燥器等新型高效化工設備，是生產規模，產品質量和收效穩步提高。第三個轉折點是利用代謝調控進行微生物菌

29、種選育和發酵條件的控制，技術特點是采用遺傳育種方法進行微生物人工右邊，選育出某種營養缺陷株或者抗代謝類似物菌株，在控制營養條件的情況下發酵生產大量積累所預期的氨基酸。3.發酵放大技術的進一步發展階段，技術特點是發酵罐的容積發展到前所未有的規模，發酵時氧耗大，對發酵設備提出了新的要求，并逐步運用計算機以及自動化控制技術進行滅菌和發酵過程的ph，溶解氧等發酵參數的控制，使發酵生產向連續化，自動化前進了一大步。4.以基因工程為中心的時代。技術特點是定向的改變生物性狀與功能，創造新物種的目的，賦予微生物細胞具有生產較高等生物細胞所產生的和化合物的能里。擴大了微生物的范圍，大大豐富了發酵產業的內容，使發

30、酵工業發生了革命性的變化。二.簡述工業發酵的應用范圍？答：發酵工業的應用范圍很廣，按其產品可以分為四大類：11.微生物菌體。工業生產的微生物菌體可分為兩種，一種是供制面包用的酵母，另一種是作為人類或者動物使用的微生物細胞。2.酶制劑。微生物酶制劑可以用發酵技術來大量生產，而且提高微生物的生產能力很方便，具有動物或植物無法比擬的優點。現今酶制劑廣泛用于醫藥，食品加工，活性飼料，纖維脫漿等許多行業。3.代謝產物。微生物利用外界的營養無知，通過包括分解代謝和合成代謝在內的兩種緊密相關的物質代謝過程，生產許多重要的代謝產物，包括初級代謝產物和刺激代謝產物。4.生物轉化。生物轉化是指利用微生物細胞或者酶

31、對化合物的某一部位進行催化修飾，使其變成結構像是淡具有更大經濟價值的化合物。生物轉化反應通常包括脫氫，氧化，酰化等作用。三.簡述液體發酵生產的一般工藝流程。答：液體發酵的工藝流程可以劃分為一下六個基本工程：1.用作種子擴大培養及發酵生產的各種培養基的配制。2.培養基，發酵罐及其附屬設備的滅菌。3.擴大培養有活性的適量純種，以一定的比例將菌種介入發酵罐中。4.控制合適的發酵條件使微生物生長并形成大量的代謝產物。5.將產物提取并精制，以得到合格的產品。6.回收或處理發酵過程中形成的三毀無知。四.結合科學發展和國家的需要，討論發酵工業的發展前景、答：發酵工程未來的發展趨勢主要有以下幾大方面:1.基因

32、工程的發展為發酵工程帶來了新的活力。主要是以基因工程為龍頭，對傳統發酵工業進行改造，提高發酵單位，建立新型的發酵產業。2.新型發酵設備的研制為發酵工程提供先進的工具。新型發酵設備主要是指發酵罐，也可以稱為生物反應器。3.大型化，連續化，自動化控制技術的應用為發酵工程的發展提供了新空間。這些技術的應用，大大提高了發酵的效率和質量，降低了能耗和成本，開拓了發酵原料的來源和用途，提高了設備的利用率。4.強調代謝機理與調控的研究，使微生物的發酵技能得到進一步的開發。5.生態型發酵工業的興起開拓了發酵的新領域。6.再生資源的利用給人們帶來了希望。對各種廢棄物的處理和轉化，變害為寶，實現無害化，資源化和產

33、業化具有重大的意義。五.簡述發酵工程與生物技術和生物工程其它學科的區別和聯系。答：現代身無技術作為生命科學的核心備受重視，它可以解決可持續發展中的糧食，能源，資源，環境等各方面的問題。通常身無技術可分為基因工程，細胞工程，發酵工程，酶工程，升華工程等五個方面，它們緊密相連，不可分割。發酵工程和生化工程通常合稱為中下游生物技術，是現代生物技術實驗成果產業化的關鍵技術，發酵工程更具有連接生物技術上下游的紐帶作用，學科地位顯而易見。 第四章一.試述消毒和滅菌的區別。答：消毒是用物理或化學的方法殺死無聊和設備中所有生命無知的過程。滅菌是用無力或化學的方法殺死空氣，地表以及容器和器具表面的微生物。消毒和

34、滅菌的區別一方面在于消毒僅僅殺死生物體或非生物體表面的微生物，而滅菌是殺死所有的生命體。另一方面在于消毒一般只能殺死營養細胞，而不能殺死細菌芽胞和真菌孢子等，適合于發酵車間的環境和發酵設備，器具的無菌處理。二.染菌對發酵有什么危害，對產物有什么危害？試從污染雜菌的種類分析發酵污染的原因，染菌以后應采取那些措施？答：染菌對發酵及發酵產物的危害如下：1.由于雜菌污染，使發酵培養基因雜菌的消耗而損失，造成生產能力的下降。2.雜菌合成了一些新的代謝產物，或雜菌污染后改變了培養基的理化性質，使 發酵產物的提取和分離變得困難，再成產物收率或產品質量的下降。3.雜菌代謝會改變元反應體系的ph，使發酵發生一場

35、的變化。4.雜菌分解產物，是生產失敗。5.細菌發生噬菌體污染，衛生物細胞被破裂，導致整個發酵的失敗。三.如何避免菌種在移接過程中染菌？答：為了避免軍中在移接過程中的染菌，首先要嚴格無菌室制度，嚴格控制無菌室的潔凈程度，根據生產工藝的要求，建立合理的無菌室，并交替使用各種滅菌手段對無菌室進行滅菌。另外將種子的轉移，接種等操作放在超凈工作臺上進行，嚴格按照無菌操作要求接種。四.簡述染菌的檢驗方法及染菌類型的判斷。答：生產上要求準確，迅速的方法來檢查出污染雜菌的類型及其可能的染菌途徑，目前有一下幾種常用的方法。1.顯微鏡檢查法。通常用簡單的染色法或革蘭氏染色法，將菌體染色后鏡檢。對于霉菌，酵母發酵，

36、先用低倍鏡觀察生產菌的特征，然后用高倍鏡觀察有無雜菌的存在。根據生產菌與雜菌的不同特征來判斷是否雜菌，必要時還可用芽胞染色或鞭毛染色。2.平板劃線培養檢查法。先將待檢樣品愛無菌平板上劃線，根據可能的染菌類型分別置于37或27攝氏度下培養，8個小時后可觀察到是否有雜菌污染。對于噬菌體檢查，可采用雙層平板培養法。3.肉湯培養檢查法。將待檢樣品介入無菌的肉湯培養基中，分別置于37或27攝氏度下進行培養，隨時觀察微生物的生長情況，并取樣鏡檢，判讀是否有雜菌污染及雜菌的類型。4.發酵過程的異常現象觀察法。發酵過程出現的異常現象如溶解氧，ph，尾氣中二氧化碳含量，發酵液的粘度等的異常變化，都可能產生染菌的

37、重要信息，也根據這些異常現象來分析發酵是否染菌。五.簡述影響培養基滅菌效果和滅菌時間的因素有那些？答：影響培養基滅菌效果和滅菌時間的因素有很多，主要有以下幾種因素：污染雜菌的種類，數量，滅菌的溫度，壓力和時間，培養基的成分，ph，物理狀態，泡沫以及微生物德爾熱阻等。 六.感染了噬菌體后應采取哪些措施？答：在細菌或放線菌發酵過程中，由于噬菌體的感染力非常強，傳播蔓延迅速，發酵體系容易受噬菌體的污染。噬菌體易在空氣中傳播，因此環境污染是噬菌體染菌的主要根源。目前最有效的防止噬菌體感染的方法是以凈化環為中心的綜合防治法，主要有凈化生產環境，消滅污染源，提高空氣的凈化度，保證純種培養，輪換使用同類型的

38、菌種，使用抗噬菌體的軍中，改進設備裝置消滅死角，遵從操作規范等措施。若在培養前期染菌，重新滅菌然后重新接種：若培養中后期染菌，則要倒掉培養基，重新配制。七.為提高空氣過濾除菌效率可采取哪些有效措施？答：提高空氣過濾除菌效率生產上進場采用以下一些措施：1.正確選擇采氣口，提高采氣口的位置或安裝前置粗過濾器，提高空壓機進口空氣的潔凈度等。2.根據發酵工廠地理氣候條件，設計合理的空氣預處理流程，盡可能的減少過濾空氣的含油量和濕度，適當的提高空氣的溫度，降低空氣的相當濕度，保持過濾的干燥狀態。此外，防止空氣過濾器的滲漏，勿使冷卻水進入空氣處理系統。3.設計和安裝合理的空氣過濾器，防止過濾器失效，選擇除

39、菌效率高的過濾介質。(蘇磊)第二章1 發酵工業用菌種應具備哪些特點？能在廉價原料制成的培養基上生長，且生成的目的產物產量高、易于回收；生長較快，發酵周期短；培養條件易于控制；抗噬菌體及雜菌污染的能力強；菌種不易變異退化，以保證發酵生產和產品質量的穩定；對放大設備的適應性強；菌種不是病原菌，不產生任何的生物活性物質和毒素。2.什么是選擇性培養基？它在菌種篩選中有何應用價值？試舉例說明選擇性培養基的篩選原理。選擇性培養基是用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養基。根據不同種類微生物的特殊營養需求或對某種化學物質的敏感性不同，在培養基中加入相應的特殊營養物質或化學物質，抑制不需要的

40、微生物的生長，有利于所需微生物的生長，提高所需微生物的分離效率。一種類型選擇培養基是依據某些微生物的特殊營養需求設計的，也可以稱為富集培養基。例如，利用以纖維素或石蠟油作為唯一碳源的選擇培養基；利用以蛋白質作為唯一氮源的選擇培養基；缺乏氮源的選擇培養基等。另一種類型選擇培養基是在培養基中加入某種化學物質，這種化學物質沒有營養作用，對所需分離的微生物無害，但可以抑制或殺死其他微生物。例如，在培養基中加入數滴10酚可以抑制細菌和霉菌的生長，從而從混雜的微生物群體中分離出放線菌；在培養基中加入亞硫酸鉍，可以抑制革蘭氏陽性細菌和絕大多數革蘭氏陰性細菌的生長，而革蘭氏陰性的傷寒沙門氏菌可以在這種培養基上

41、生長；在培養基中加入染料亮綠或結晶紫，可以抑制革蘭氏陽性細菌的生長，從而達到分離革蘭氏陰性細菌的目的。現代基因克隆技術中也常用選擇培養基，在篩選含有重組質粒的基因工程菌株過程中，利用質粒上具有的對某種（些）抗生素的抗性選擇標記，在培養基中加入相應抗生素，就能比較方便地淘汰非重組菌株，以減少篩選目標菌株的工作量。3. 以氨基酸代謝為例，說明為什么有些突變菌株對末端代謝產物的結構類似物具有抗性？答：正常情況下，代謝末端產物氨基酸a是菌體蛋白的必需組成成分，它能反饋阻遏或抑制合成它的有關酶。它的結構類似物a在空間結構上與之相似，也能象a一樣與原阻遏物或調節酶的調節亞基結合，從而發生阻遏或抑制作用。但

42、a不能正常參與蛋白質的合成，或只能合成無活性的蛋白質。當結構類似物a達到一定濃度后，一方面a能起反饋控制作用，阻止a的正常合成，另一方面a又無法代替a參與正常蛋白質的合成，從而造成正常的細胞因缺乏a而饑餓死亡。但如果突變株解除了反饋控制，即末端產物氨基酸a無法與原阻遏物或調節亞基結合，那么a也就無法起反饋調節作用，a的毒害作用就表現不出來。我們說該菌株對a有抗性而得以生存下來。根據以上原理，只要選取結構類似物抗性突變株，就有可能得到解除了反饋調節的突變株。結構類似物抗性菌株不一定都是解除反饋調節的菌株。4.防止菌種退化的方法有：減少傳代，創造良好的培養條件，用單細胞移植傳代及科學保藏等措施5簡

43、述自然界分離微生物的一般步驟自然界分離微生物主要是從土壤中采集 具體步驟如下：1. 含微生物的樣品的采集采樣時應注意的問題:n土壤微生物的分布n采土深度n土壤植被情況n采樣季節n土壤的酸堿度對于分離篩選新菌種，還存在另兩個選擇標準：n土壤來源廣泛n在已適應相當苛刻環境壓力的微生物類群中尋找新菌種2) 樣品的預處理目的：提高分離效率方法：n物理方法：熱處理；膜過濾法；離心法n化學方法n誘餌法3)分離方法的選擇 根據目的菌有無選擇性特征來選擇分離方法:選擇性分離 n菌種的營養特征獨特 n生長特征獨特 n無選擇性特征: 根據產物的特征進行隨機分離 選擇性分離的關鍵：生長培養條件的選擇與控制，從而實現

44、定向富集篩選。 6.菌種選育分子改造的目的是什么，具體方法有哪些？來源于自然界中的微生物菌種，在長期進化過程中形成了一整套緊密的代謝機制，微生物細胞內具有反饋抑制阻遏代謝等代謝調控系統，不會過量生產超過其自身生長.代謝需要的酶或代謝產物。所以，從自然界分離得到的野生菌株，不論在產量或質量上，都很難適合工業話生產的要求，因此需要進行菌種改良。改良目的主要有以下四點：1）。提高目標產物的產量。2）。提高目標產物的純度，減少副產物。3 ).改良菌種性狀，改善發酵過程，4 ）改變生物合成途徑，以獲得高產的新產品。改良方法：1 ）代謝水平調節：是只對生物的初級和次級代謝的酶合成和酶活性的調節。2 ）常規

45、育種，包括誘變和篩選。3 ）細胞工程育種。雜交育種和原生質體融和育種。4 ）基因工程育種。 5 ）蛋白質工程育種 6 ）代謝工程育種7. 自然選育 在生產過程中，不經過人工處理，利用菌種的自發突變，從而選育出優良菌種的過程，叫做自然選育自然選育的主要作用是對菌種純化以獲得遺傳背景較為均一的細胞群體。一般菌種經過多次傳代或長期保藏后，由于自然突變或異核體和多倍體的分離，使有些細胞的遺傳性狀發生改變，造成菌種不純，嚴重者生產能力下降，稱為菌種退化。因此在工業生產和發酵研究中要經常進行菌種純化。微生物的自然突變率很低，因此通過自然選育來獲得優良菌株的效果遠不如誘變育種。8.如何實現使微生物合成比自身

46、需求多得多的產物？試舉例說明。育種工作者的任務是設法在不損及微生物的基本活動的前提下，采用物理、化學或生物學以及各種工程學方法，改變微生物的遺傳結構，打破其原有的代謝控制機制，使之成為“浪費型”菌種。同時，按照人們的需要和設計安排，進行目的產物的過量生產，最終實現產業化的目的。分為以下育種方法：常規育種，細胞工程育種，基于代謝調節的育種技術，基因工程育種，蛋白質工程育種，代謝工程育種，組成生物合成育種，反向生物工程育種。常規育種包括誘變和篩選，其理論基礎是基因突變，新的誘變技術如：低能離子束誘變，激光輻射誘變和微波電磁輻射誘變，原生質體誘變等。細胞工程包括雜交育種和原生質體融合育種。代謝工程育

47、種是通過特定突變型的選育，達到改變代謝通路、降低支路代謝產物的生產或切斷支路代謝途徑及提高細胞膜的透性，使代謝流向目的產物積累的方向進行。基因工程能創造新的物種，能賦予微生物新的機能，使微生物生產出自身本來不能合成的新物質，或者增強它原有的合成能力。蛋白質工程主要是尋找新的物種，再從中分離篩選新的蛋白，或通過對天然功能蛋白進行改造。9. 設計一個從自然界中篩選高溫淀粉酶產生菌的實驗方案，說出主要步驟及基本原理。答：欲從自然界中篩選高溫淀粉酶產生菌，最好在溫度較高的南方，或溫泉，火山爆發及北方堆肥中采集樣品。將采集來的樣品經過預處理（如高溫加熱），減少雜菌量，然后進行富集培養，富集培養以淀粉為唯

48、一碳源，這樣形成的優勢菌種即為以為能產生淀粉酶的一類菌株，然后采用平板篩選，通過初篩與復篩，最終獲得性能優越的高溫淀粉酶產生菌。10. 如果纖維素酶的合成受反饋阻遏作用的調控，如何根據這一調控機制設計纖維素酶高產菌的選育方案？答：將菌種經過紫外線照射或其他方式誘變后接種在纖維素基質培養基上，在篩選纖維素酶活高產菌時可通過剛果紅染色透明圈法篩選、進行發酵產物酶活性11.菌種保藏主要利用哪些原理，試舉例說明。菌種保藏的基本原理主要是根據微生物的生理、生化特點，人工地創造條件，使微生物的代謝處于不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態。斜面低溫保藏法的原理是低溫；礦油封藏法（液體石蠟保藏法）的原理是低溫、缺

49、氧、缺營養；冷凍真空干燥法的原理是低溫、干燥、缺氧；液氮超低溫保藏法的原理是在超低溫（低于-130）狀態下，所有的代謝活動暫時停止而生命延續，并且不會發生變異。第四章 發酵工業的無菌技術1、 答：滅菌指用物理或化學方法殺死物料或設備中所有生命物質的過程；消毒指用物理或化學方法殺死空氣、地表以及容器和器具表面的微生物；消毒和滅菌的區別在于：消毒僅僅是殺滅生物體或非生物體表面的微生物，而滅菌是殺滅所有的生命體。2、 答：染菌對發酵的危害：a、消耗營養；b、雜菌合成新產物，改變發酵液的某些物化性質，造成產物分離困難；c、改變ph；d、分解產物；e、噬菌體破壞極大，使微生物細胞裂解，導致整個發酵失敗。

50、若污染耐熱芽孢桿菌，則染菌原因通常為滅菌不徹底；若污染球菌、無芽孢桿菌，則種子帶菌、無菌空氣帶菌、設備滲漏和操作失誤都有可能；若污染淺綠色菌落的雜菌，則與水有關，通常為冷卻盤管滲漏的原因。染菌以后采取的措施：種子擴大時期染菌，滅菌后棄去；發酵前期染菌，應迅速重新滅菌，補充必要的營養成分，重新接種；發酵中期染菌，挽救困難，應早發現，快處理，處理方法應根據各種發酵的特點和具體情況來決定；發酵后期污染，若染菌量不多，可繼續發酵，若污染嚴重，則提前放罐。3、 答：a、嚴格無菌室管理制度，嚴格控制無菌室的潔凈程度；b、交替使用各種滅菌手段對無菌室進行經常性的潔凈處理；c、將種子的轉移、接種等操作放在潔凈

51、工作臺上進行，嚴格按照無菌操作要求接種。4、 答：染菌檢驗方法與判斷：a、顯微鏡檢查；b、平板劃線培養或斜面培養檢查法，噬菌體檢查可采用雙面平板法：噬菌斑；c、肉湯培養檢查法；d、發酵過程的異常現象觀察。5、 因素有：a、培養基成分；b、培養基ph；c、培養基的物理狀態；d、泡沫；e、培養基中的微生物量。6、 答：如果污染了噬菌體，通常采用甲醛、雙氧水或高錳酸鉀等滅菌劑處理。（不是很有把握）7、 答：可采用措施有：a、提高空氣吸氣口的位置；b、在空氣吸入口處設置粗過濾器，以濾去空氣中顆粒較大的塵埃。8、 解：t = 2.303 / k *lg(105*30*106/0.001)=3.24 mi

52、n 由于連消塔不能保證先進先出，所以培養液至少需維持8min。故維持體積為：v= 6 / 60 *8 *0.9=0.89 m3 (0.9為充滿系數)9、 解：由 得： 查表得26，所以至少應冷卻至 26。（曹雄文）第三章 史達 生物技術0502班1、什么是培養基？簡述發酵培養基的特點和要求。培養基是指用于維持微生物生長繁殖和產物形成的營養物質。發酵培養基的特點和要求：單位培養基既能夠產生最大量的目的產物；能夠使目的產物的合成速率最大；能夠使副產物合成的量盡可能少；所采用的培養基應該質量穩定、價格低廉、易于長期獲得；所采用的培養基盡量不影響工業好氣發酵中的通氣攪拌性能以及發酵產物的后處理等。2、

53、什么是生長因子？從廣義上講，凡是微生物生長不可缺少的微量的有機物質，如氨基酸、嘧啶、嘌呤、維生素等均為生長因子。生長因子不是對于所有微生物都必須的，它只是對于某些自己不能合成這些成分的微生物才是必不可少的營養物。3、簡述培養基設計的一般步驟和應注意的問題。培養基設計和優化過程一般步驟：根據以前的經驗以及在培養基成分確定前必須考慮的一些問題，初步確定可能的培養基組分；通過單因子優化試驗確定最為適宜的各個培養基組分及其最適濃度；最后通過多因子實驗，進一步優化培養基的各種成分及其最適濃度。應注意的問題：必須根據具體情況抓住主要環節，使其既能滿足微生物的生長要求，又能獲得優質高產的產品，同時也要符合增

54、產節約、因地制宜的原則。4、工業發酵常用的碳源有哪些？常用的糖類有哪些，各自有何特點？工業發酵中，常用的碳源有糖類、油脂、有機酸和低碳酸等。其中，糖類是發酵培養基中應用最廣泛的碳源，主要有葡萄糖、糖蜜和淀粉。葡萄糖是最容易利用的碳源之一，幾乎所有的微生物都能利用葡萄糖。葡萄糖是加速微生物生長的一種速效碳源，但過多的葡萄糖會抑制微生物的生長和產物的合成(加速呼吸、降低溶解氧、積累中間產物、降低ph、影響酶的活性)。糖蜜是制糖生產時的結晶母液，是制糖工業的副產物。其中含有豐富的糖、氮類化合物、無機鹽和維生素等，是價廉物美的碳源。淀粉等多糖作為碳源，可克服葡萄糖效應對次生代謝產物合成的影響，價格也比

55、較低廉。5、常用的無機氮源和有機氮源有哪些？簡述各類氮源在發酵培養基中的作用。常用的有機氮源有黃豆餅粉、花生餅粉、棉子餅粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、魚粉和酒糟等；常用的無機氮源有銨鹽、硝酸鹽和氨水等。氮源主要用于構成菌體細胞物質和合成含氮代謝物。有機氮源含有豐富的蛋白質、多肽和游離氨基酸外往往還含有少量的糖類、脂肪、無機鹽、維生素及某些生長因子，故其營養豐富；有機氮源除了作為菌體生長繁殖的營養外，大多數發酵工業利用有機氮源來獲得所需的氨基酸；此外，某些有機氮源還是產物的前體。無機氮源也稱為速效氮源，微生物對他們的吸收利用一般較快；此外，其作為生理酸、堿性物質，可以穩定和調節發酵過程

56、的ph。6、什么是理論轉化率和實際轉化率？理論轉化率：理論狀態下根據微生物的代謝途徑進行物料衡算，得出原材料的轉化率大小。實際轉化率：發酵實驗中所得原材料的轉化率大小。由于實際發酵過程中，一般有副產物形成、原材料利用不完全等因素存在，實際轉化率往往要小于理論轉化率。7、舉例說明培養基設計的方法和步驟？首先，做好調查研究工作，了解菌種的來源、生長規律、生理生化特征和一般的營養要求。其次，對生產菌種的培養條件，生物合成的代謝途徑，代謝產物的化學性質、分子結構，一般提煉方法和產品質量要求也需要有所了解，以便在選擇培養基時心中有數。最好先以一種較好的化學合成培養基為基礎，先做一些搖床試驗，然后進一步做

57、小型發酵罐培養，摸索菌種對各種主要營養物質，如碳源和氮源的利用情況和生產代謝產物的能力。注意培養過程中的ph變化，觀察適合于菌種生長繁殖和適合于代謝產物形成的兩種不同的ph，不斷調整配比來適應上述情況和要求。有了初步結果后，先確定培養基配比，再確定各種重要的金屬和非金屬離子對發酵的影響，即對各種無機元素的營養要求，試驗其最佳范圍和最佳用量。在合成培養基上得出一定結果后，在做復合培養基實驗；最后通過實驗確定各種發酵條件和培養基的關系。8、簡述培養基優化在發酵優化控制中的作用。一個好的發酵培養基是一個發酵產品能否成功實現產業化和商業化的關鍵一環。第五章 韓玉玲 生物技術0502班1簡述種子擴大培養的目的與要求及一般步驟。目的：為每次工業規模的發酵生產提供相當數量的代謝旺盛的種子。要求： 菌種細胞的生活力強，轉種之發酵罐后能迅速生長，延遲期短菌種生理壯大穩定，如菌絲形態、菌絲生長速率和種子培養液的特性等符合要求。菌種濃度及總量能滿足大容量發酵罐接種量的要求。無雜菌污染，保證純種發酵。菌種適應性強，能保持穩定的生產能力。一般步驟;：將沙土管或冷凍干燥管中的種子接種到斜面培養基中進行活化培養。將生長良好的斜面孢子或菌絲轉種到扁瓶固體培養基或搖瓶液體培養基中擴大培養，完成實驗室種子制備。將擴大的孢子或菌絲體接種到一級種子罐，制備生產用種子。如有需要，可將一級種子再轉種到二級種子罐進行擴