1、人褪黑素(melato nin )ELISA 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清, 血漿及相關液體樣本 中褪黑素(melatonin)的含量。 實驗原理： 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人褪黑素(melat onin)水平。用純化的人褪黑素 (melatonin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入褪黑素 (melatonin)，再與HRP標記的褪黑素 (melatonin)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物， 經過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的

2、褪黑素(melatonin)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人褪黑素(melatonin)濃度。 試劑盒組成 試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存 說明書 1份 1份 圭寸板膜 2 片(48) 2 片(96) 密封袋 1個 1個 酶標包被板 1X 48 1X 96 2-8 C保存 標準品：54n g/L 0.5ml X 1 瓶 0.5ml X 1 瓶 2-8 C保存 標準品稀釋液 1.5ml X 1 瓶 1.5ml X 1 瓶 2-8 C保存 酶標試劑 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 樣品稀釋液 3 ml X 1

3、 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 顯色劑A液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 顯色劑B液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 終止液 3ml X 1 瓶 6ml X 1 瓶 2-8 C保存 濃縮洗滌液 (20ml X 20 倍)X 1 瓶 (20ml X 30 倍)X 1 瓶 2-8 C保存 樣本處理及要求： 1血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉份)。仔細收集上 清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。 2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心

4、20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次 離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉份)。仔細收集上清，保存過程 中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液，細胞 濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分 鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次

5、離心。 5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS, PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備 用。標本融化后仍然保持2-8C的溫度。加入一定量的PBS （ PH7.4）,用手工或勻漿器 將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待 檢測，其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗，可將標本放于 -20 C保存，但應避免反復凍融 . 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟： 1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10

6、孔，在第一、第二孔中分別加標 準品100 M，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50 d，混勻；然后從第一孔、第二 孔中各取100 d分別加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50 d, 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50 d棄掉，再各取50 d分別加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各 取50 d分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50 d，混 勻后從第七、第八孔中分別取50 d加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準 品稀釋液50 d，混勻后從第九第十孔中各取50 d棄掉。（稀釋后

7、各孔加樣量都為 50 d, 濃度分別為 36 ng/L , 24 ng/L , 12 ng/L , 6 ng/L , 3 ng/L ）。 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣 品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 d,然后再加待測樣品10 d （樣 品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混 勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37 C溫育30分鐘。 4. 配液：將30 （48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 （48T的20倍）倍稀釋后備用。 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗

8、滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50 d，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 d，再加入顯色劑 B50 d，輕輕震蕩混勻，37 C避光顯色 15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50卩,1終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止 液后15分鐘以內進行。 注意事項： 1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。 2. 濃洗滌液可能會

9、有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3. 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值 大于標準品孔第一孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數（Xn X 5）。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6. 底物請避光保存。 7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 2-8Co 2 有效期：6個月 依著風的眼眸, 的風是有靈性

10、的, 我看到了那一株株桃花讀信的倩影，在桃林深處，紫色的青藤爬滿那個小屋。我的小城，桃花已然開成海，像是一場粉色的春夢。是否，可以赴一場最美的相逢，如是，便不負曾經許下的約 定。守住心底最美風景，是一種風度，一種期望。讓心，隨花兒輕舞，讓夢，隨蝶兒翩躚。 等一縷柔風載滿詩意，落滿我的小院，好想，牽著你的手走在花開的路上，臨摹又一個春的相遇，陌上綠色蔓延，讓深情的詩句落在眉彎，打開靈魂的心門，寫盡情意綿綿。春雨如絲， 暖了一季寒涼露出溫暖，碧水映藍天，云朵兒似乎摸到嫩草尖尖。花香十里，暗香盈袖。我們微笑著，不說話，就十分美好。 生命里，總會有一些人，漸行漸遠，偶爾想起，卻只是停留在文字里，那一抹

11、淡淡的回憶。唯有春天，總那么詩意明亮，始終暈染著眉心，讓澀澀的往事隨風，讓一些溫暖的記憶溫潤著 心房。珍惜眼前的幸福，緊握手中的暖意，面向青山綠水，一路微笑，一路行走 情暖山水間，盈一份詩意于心田，以云的飄逸輕盈過往，以花的姿態擁馨香滿懷，以文字的杯盞邀約一曲細水長流。 煮一壺春色，與時光對語。窗前，柳枝兒發芽，玉蘭含苞，時光一直繞指馨香。心念如這徐徐春風，蕩漾成一片流云。春落人間，一種別樣的景致美了心境，所有的疲憊與憂愁也隨風而 去，微笑著面對生活，用內心的那份熱情，那份純真來經營生活，來創造幸福，何嘗不是一種快樂？我的流年，風過，紅塵入畫；雨落，纏綿入心。 行走在春天里，眼里滿是明麗與清澈，一樹一樹的花開，細碎而芬芳；一片一片的綠地，靜美而清新。嗅著陽光的味道，把自己置身于大自然中，真好！只要心足夠明媚，縱然有小小的 陰霾也無妨。 我們一路走來，沿途總會有美麗的風景。于喧囂紅塵中，守著心靈的一方山水。不亂于心，不困于情，不畏將來，不念過往。 春水初生，耐人尋味。春雨如絲，絲如媚，綿綿的不著一點兒聲息。踏春而去，不知是哪一處的紅塵山水在心間已布滿了雅致，心如花開，一朵嫻雅的光陰，柔軟著眼角的笑意，置身于 安暖的春天，一抹淺喜，一懷深愛。一顆心，便在另一顆心的相隨里靜好。 春光無限溫柔地灑滿山川，我愿