1、a,酵母蔗糖酶的粗提及其比活力測定,a,蔗糖酶活性及比活性測定原理,蔗糖酶,a,蔗糖酶的酶活單位：在40水浴反應10min，測定吸光值A540，增加0.01個光吸收值的酶量為一個酶活力單位（U）。 蔗糖酶比活力測定：每毫克蔗糖酶蛋白所具有的活力單位，對同一種酶來說，酶的比活力越高，酶的純度越高,a,試劑 （一） 蔗糖酶的粗提及活性測定 （1）冰凍無水乙醇：1瓶/班 （2）0.01 mol/L pH6.0 PBS buffer，2000ml （全班共用） （3）0.01mol/L蔗糖, 用0.01 mol/L pH6.0 PBS buffer配制，200ml （大組共用） （4）2 mol/L

2、NaOH， 1000ml （全班共用） （5）3,5-二硝基水揚酸(DNS)試劑：可配300ml （全班共用） 19.2克酒石酸鉀鈉溶于50ml水中（電爐加熱溶解，不用沸騰），把.0.63克3,5-二硝基水楊酸(DNS)和26.2ml2 mol/L NaOH 加到酒石酸鉀鈉的熱溶液中，電爐加熱溶解，冷卻到50-60，再加0.5克苯酚和0.5克亞硫酸鈉攪拌使溶解冷卻后加水定容至100ml，過濾，貯于棕色瓶中,a,實驗方法 （一）粗提取酵母蔗糖酶 （1） 量取5g的面包酵母，分幾次研磨（加入少量石英砂）至粉狀，再加入10-12ml的0.01mol/LPBS（pH 6.0），攪拌混合。置于小燒杯中。

3、 （2） 置于20冰箱中，反復凍融1-2次,a,二）熱提取酵母蔗糖酶 （3） 解凍，然后置于離心管中，離心，轉速11000r/min離心10min，離心后取上清液，按下表2、3方法分別測蔗糖酶A的活性及蛋白含量（蛋白含量略）。 （4） 將上述上清液置于45的恒溫水浴鍋中，用玻璃棒緩慢攪拌30min，然后置于冰浴中迅速冷卻5min。然后裝入離心管中，離心，轉速11000r/min條件下離心10min，離心后取上清液，按下表2、3方法分別測蔗糖酶B的活性及蛋白含量,a,三）乙醇提取酵母蔗糖酶 （1）取上述第4步中的上清液10ml，緩慢加入10ml的冰凍的無水乙醇（乙醇的終濃度為50），并輕輕的攪拌5min，此過程在冰浴中進行。然后裝入離心管中，轉速3000r/min條件下離心5min，離心后棄上清液，離心管倒置于濾紙上，盡可能去除乙醇殘液。留沉淀。 （2）將沉淀用15ml的0.01mol/L的PBS（pH6.0）攪拌溶解30min，溶液為渾濁液，再離心，轉速10000r/min條件下離心10min，離心后取上清液，按下表2、3方法分別測蔗糖酶C的活性及蛋白含量,a,表1 酵母蔗糖酶酶活性及比活力測定,a,注意： 對照管的顏色不能太深，如果太深，需要重新配蔗糖溶液,a,