.,1,細(xì)胞化學(xué)染色實(shí)驗(yàn),.,2,一、過氧化物酶(PeroxidaseStain，POX)染色,【目的和原理】細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能將底物的過氧化氫分解，產(chǎn)生新生態(tài)氧。后者將試劑中的聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合，進(jìn)而形成棕色化合物沉淀于酶的所在部位。,.,3,【器材和試劑】1第一液聯(lián)苯胺03g360gL亞硝基鐵氰化鈉飽和液lml95L醇加至lOOml貯存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分裝備用。2第二液(稀過氧化氫液，新鮮配制)3過氧化氫03ml蒸餾水25ml,.,4,【步驟和方法】1于新鮮干燥血涂片或骨髓涂片上，滴加第一液5-8滴，使蓋滿整個(gè)血膜，作用1-2min.2滴加等量的第二液，混勻，染4-8min。3勿傾去染液，直接用水沖洗。4干燥后再用瑞氏染液復(fù)染。,.,5,【結(jié)果】在細(xì)胞的胞漿中出現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒為陽性反應(yīng)。1陽性反應(yīng)強(qiáng)度的判斷：陰性：無顆粒。弱陽性：顆粒小，分布稀疏。陽性：顆粒略粗，分布較密集。強(qiáng)陽性：顆粒粗大，密布于整個(gè)胞質(zhì)中。,.,6,2粒細(xì)胞系統(tǒng)：早期原始粒細(xì)胞陰性，晚期(分化好)原始粒細(xì)胞以下各階段呈陽性，粒細(xì)胞越成熟POX反應(yīng)越強(qiáng)。但衰老的中性粒細(xì)胞酶活性降低，反應(yīng)程度減弱，甚至呈陰性反應(yīng)。嗜酸性粒細(xì)胞顆粒更粗大，呈深藍(lán)色，嗜堿性粒細(xì)胞陰性。,.,7,3單核細(xì)胞系統(tǒng)：除早期原始階段外皆呈弱陽性反應(yīng)。其顆粒細(xì)小，彌散分布，可覆蓋核上，有的也可呈陰性反應(yīng)。4正常網(wǎng)狀細(xì)胞(分化型)及吞噬細(xì)胞：可呈不同程度陽性反應(yīng)。5淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞系統(tǒng)等：均為陰性。6Auer小體：呈陽性。,.,8,.,9,.,10,【臨床意義】POX染色是鑒別急性粒細(xì)胞白血病(簡(jiǎn)稱急粒)、急性單核細(xì)胞白血病(簡(jiǎn)稱急單)、急性淋巴細(xì)胞白血病(簡(jiǎn)稱急淋)類型的重要細(xì)胞化學(xué)方法。,.,11,1急性粒細(xì)胞白血病：細(xì)胞分化較好時(shí)，原始粒細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，陽性率可30%，在分化較差的白血病，如AML-M0和未分化型（AML-M1）的部分病例，原粒細(xì)胞的POX染色也可呈陰性。2急性早幼粒細(xì)胞白血病時(shí)白血病細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。,.,12,3急性淋巴細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，F(xiàn)AB分型規(guī)定POX陽性率20%，但難于區(qū)分原粒和原單時(shí)可進(jìn)一步作酯酶染色鑒別。,.,13,5、急性單核細(xì)胞白血病：原單和幼單POX多呈弱陽性或陰性，單核細(xì)胞呈弱陽性，陽性率常3%，陽性顆粒較為細(xì)小、稀疏。,.,14,6、中性粒細(xì)胞髓過氧化酶缺陷癥：中性粒細(xì)胞POX染色，純合子呈陰性，雜合子多為弱陽性。在一些髓系細(xì)胞白血病，如部分慢性髓細(xì)胞白血病（CML）患者，中性粒細(xì)胞POX染色可呈陰性或弱陽性，提示POX獲得性缺陷。,.,15,【注意事項(xiàng)】1過氧化氫必須新鮮配制。過氧化氫的最適濃度是005molL左右，濃度過高，反而抑制酶作用。一般采用5ml蒸餾水，加3過氧化氫一滴。若用30的過氧化氫時(shí)，只能在100ml蒸餾水中加12滴。涂片中粒細(xì)胞看不見陽性顆粒，紅細(xì)胞呈棕色或綠色，即示過氧化氫過濃。若過氧化氫加于血片上不產(chǎn)生氣泡，則示無效。,.,16,2.染色時(shí)稀釋過氧化氫之后必須與聯(lián)苯胺液充分混合，否則同一涂片細(xì)胞染色情況不一致。,.,17,【評(píng)價(jià)】POX染色是鑒別急性白血病類型最常用的細(xì)胞化學(xué)染色方法。但若原始細(xì)胞均呈陰性（陽性率10粒。,.,24,(4)環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為含鐵粒在6粒以上，其中23以上的鐵粒圍核成完全或不完全性環(huán)形(圍核12以上的區(qū)域有鐵粒環(huán)繞)。,.,25,【臨床意義】1參考值細(xì)胞外鐵+-+(23人為“+”，13人為“+”)。細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率為19-44，平均214，以I型為主，少數(shù)為型，所見鐵粒較細(xì)而淺染，散在分布，一般位于胞漿的外側(cè)，及型以及環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞少見。,.,26,2鑒別缺鐵性貧血及某些溶血性貧血。缺鐵性貧血骨髓細(xì)胞外鐵和內(nèi)鐵顯著減少或消失，鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率0-28，平均34，所見鐵粒極細(xì)少而著色淺，以I型為主，型者極少見，型以上者不見。,.,27,3用于診斷鐵粒幼紅細(xì)胞性貧血這時(shí)能找到數(shù)量不等的環(huán)型鐵粒幼紅細(xì)胞，并多見粗顆粒的型與型鐵粒幼紅細(xì)胞。,.,28,【注意事項(xiàng)】1玻璃片需經(jīng)無鐵處理將新片經(jīng)清潔液浸泡24h