實驗大鼠的麻醉,2014年3月5日,1,2,引言,麻醉(anesthesia)的基本任務是消除實驗過程中所致的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。,3,(一)常用的麻醉劑由于動物種屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和選用的麻醉劑亦有不同。動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。1揮發(fā)性麻醉劑這類麻藥包括乙醚、氯仿等。機制：抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醚時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)上情況。,4,2非揮發(fā)性麻醉劑這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。,5,3中藥麻醉劑動物實驗時有時也用到象洋金花和東莨菪堿等中藥麻醉劑。特點：作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想。因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。,6,乙醚,(1)藥理學作用：乙醚在簡便裝置中也容易揮發(fā)。乙醚的使用是比較安全的，因為它很少因為過量而致動物死亡。(2)不良反應：動物誘導時不舒服，而且乙醚對粘膜的刺激可導致咳嗽、大量的支氣管和唾液腺分泌物，偶爾還會導致喉痙攣。乙醚還能在動物的麻醉蘇醒期后誘發(fā)既有的慢性呼吸系統(tǒng)疾病急性發(fā)作，特別是兔和嚙齒類動物。乙醚是可燃的，和空氣或氧氣構(gòu)成爆炸性混合物。,7,巴比妥類,硫噴妥鈉：超短效巴比妥類戊巴比妥鈉：短效巴比妥類，多用3溶液。靜脈一次注射，犬用40mg/kg，兔、鼠用30mgkg，腹腔注射劑量增加20，可維持持2小時有效全麻，在外科麻醉中，對呼吸和循環(huán)系統(tǒng)都有嚴重抑制。用于兔、鼠死亡率較高；用于大等較大動物，亦需要輔助呼吸和其他復蘇措施，且完全蘇醒需要68小時。苯巴比妥鈉：長效巴比妥類,8,氯胺酮,適用于大多數(shù)實驗動物。肌肉、腹腔或靜脈注射皆可。對犬等體型較大動物，呼吸抑制不明顯，但對鼠類則常有嚴重呼吸抑制，對免和鼠的鎮(zhèn)痛效果不可靠。單獨使用氯胺酮亦有骨骼肌緊張、唾液和氣管支氣管分泌物增多以及咽反射消失過遲等缺點，與安定合用可糾正此類缺點。靜注誘導劑量，為1氯胺酮溶液25ml/kg，復合安定12mg/kg。維持劑量每次用誘導量的1/31/2。肌肉或腹腔注射氯胺酮用510溶液410m1誘導。,9,神經(jīng)安定鎮(zhèn)痛藥,神經(jīng)安定鎮(zhèn)痛合劑由強麻醉性鎮(zhèn)痛藥和神經(jīng)安定藥組成。如氟芬合劑。神經(jīng)安定鎮(zhèn)痛合劑對大多數(shù)動物可產(chǎn)生良好的麻醉作用，給藥途徑有肌肉、腹腔或靜脈注射，單獨使用神經(jīng)安定鎮(zhèn)痛合劑，適用于無需肌肉松弛的表淺外科小手術。,10,烏拉坦,用20溶液靜脈注射，劑量1g/kg；亦可作腹腔、肌肉或皮下注射，劑量11.5g/kg，宜用于鼠類。作用溫和持久，有效麻醉時間可長達610小時，對于深度外科麻醉，呼吸及循環(huán)均無明顯抑制。但此藥本身有致癌作用，不能用作與腫瘤有關的實驗。工作人員亦應小心，禁止長期接觸。使用此藥的動物，用后即作為有害廢棄物，嚴格按照規(guī)定深埋或作其他無害處理。,11,水合氯醛,用5溶液；犬靜脈注射100mg/kg，腹腔注射150mg/kg，兔和鼠用后常有肌肉緊張，宜與烏拉坦合用；臨用前將兩藥等量混合，用60等滲鹽水配制成510注射液，按12m1/kg靜脈注射。麻醉持續(xù)時間長，深度較淺，蘇醒期常有激惹現(xiàn)象。一般只用于不要求存活的刺激較輕的手術。,12,（二）麻醉方法分類1全身麻醉包括：吸入法和腹腔、靜脈給藥麻醉法。,（1）吸入法用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚作麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醚倒可其中，迅速放入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔4-6分鐘即可麻醉，麻醉后應立即取出，并準備一個蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動物麻醚變淺時給套在鼻上使其補吸麻藥。,13,（2）腹腔和靜脈給藥麻醉法非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。由于各麻醉劑的作用長短以及毒性的差別，所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定控制藥物的濃度和注射量。,下腹部腹中線兩側(cè)。,14,2局部麻醉浸潤麻醉。根據(jù)手術，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等順序逐步深入注射到術野周圍。3.麻醉的基本原則注意不同個體的耐受性及時判斷麻醉的深淺靜脈麻醉堅持先快后慢原則補充麻醉,15,(三)麻醉前準備：禁食812h，防止嘔吐，可飲水。犬、豬、猴等大動物可在麻醉前給予一些藥物以減少動物緊張，減少支氣管分泌。實驗開始時，首先應當根據(jù)實際條件，確定動物的藥物用量。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動物死亡。,16,17,(四)麻醉時的注意事項靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應，當這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。（配制的藥液濃度要適中，不可過高，以免麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。）,18,麻醉時需注意保溫。麻醉期間，動物的體溫調(diào)節(jié)機能往往受到抑制，出現(xiàn)體溫下降，可影響實驗的準確性。此時常需采取保溫措施。保溫的方法有，實驗桌內(nèi)裝燈，電褥，臺燈照射等。無論用哪種方法加溫都應根據(jù)動物的肛門體溫而定。大鼠為39.30.5。,19,作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應加熱至動物體溫水平。,20,（五）麻醉效果的觀察動物的麻醉效果直接影響實驗的進行和實驗結(jié)果。麻醉過淺，動物會因疼痛而掙扎，甚至出現(xiàn)興奮狀態(tài)，呼吸心跳不規(guī)則，影響觀察。麻醉過深，可使機體的反應性降低，甚至消失，更為嚴重的是抑制延髓的心血管活動中樞和呼吸中樞，使呼吸、心跳停止，導致動物死亡。因此，在麻醉過程中必須善于判斷麻醉程度，觀察麻醉效果。判斷麻醉程度的指標有：,21,22,（六）不同麻醉方法操作,1.吸入麻醉法將乙醚棉球投入密閉容器中，放入大鼠。計時觀察與判斷大鼠的麻醉程度及蘇醒時間。當大鼠倒下，四肢緊張明顯減輕，皮膚痛覺消失，則表示其已進入麻醉狀態(tài)。注意事項1.乙醚易揮發(fā)，易燃，應遠離火源。2.實驗過程中避免大鼠逃脫。,23,2.注射麻醉法實驗開始時，應先稱重，確定大鼠的藥物用量。10%水合氯醛溶液經(jīng)預試確定麻醉劑量為4.5ml/kg;按文獻(劉忠和等,2006)戊巴比妥鈉配制為1%溶液,麻醉劑量為6ml/kg。麻醉方法均為腹腔注射。將大鼠固定，腹腔注射。計時觀察與判斷大鼠的麻醉程度及蘇醒時間。水合氯醛麻醉起效時間3.31.9分鐘，麻醉維持時間為85.325.3分鐘，麻醉死亡率為10.0%，總死亡率為15.0。,24,（七）大鼠麻醉后生化指標變化,初次采血后肝功能指標ALT、AST、TP、ALB、AKP出現(xiàn)不同程度波動,可能與呼吸系統(tǒng)抑制造成組織缺氧,肝功能繼發(fā)性損傷有關。腎功能指標BUN水平隨麻醉時間延長增加,而CREA水平無波動,提示機體由于蛋白質(zhì)分解代謝加快使血漿尿素濃度增加,從而發(fā)生腎前性氮質(zhì)血癥。GLU水平隨時間延長而增加,可能與麻醉方法和采血操作引起糖相關激素變化從而影響糖的代謝有關。而TG、CHOL水平則出現(xiàn)先下降后反彈,可能與腹腔注射麻醉劑使血容量增加有關。,25,ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、AST（天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶）、TP（總蛋白）、ALB（白蛋白）、AKP（堿性磷酸酶）、CREA（肌酐）、GLU（血糖）、TG（甘油三酯）、CHOL（總膽固醇）,26,水合氯醛和戊巴比妥鈉對SD大鼠麻醉效果的比較,戊巴比妥鈉對大鼠的呼吸頻率、體溫抑制較強,并能抑制大鼠的心肌收縮性,表現(xiàn)為+dp/dtmaxt值降低,t-dp/dtmax值增大,心室峰壓及心率下降;水合氯醛對大鼠呼吸頻率和體溫的抑制作用較少,但與前者比較,維持相同麻醉時間,使用劑量對心功能的抑制作用明顯時間均達3h左右,戊巴比妥鈉組動物在麻醉潛伏期內(nèi)有較劇烈的四肢強直、痙攣等表現(xiàn),需進入深度麻醉期后上述情況才能消失;水合氯醛組動物未有發(fā)現(xiàn),且其麻醉潛伏期明顯短于戊巴比妥鈉,麻醉起效迅速。水合氯醛腹腔注射PO2、血樣飽和度、Hct（紅細胞壓積）、Hb（血紅蛋白濃度）、血氧含量、aPA均顯著高于戊巴比妥鈉腹腔注射組細胞外剩余堿、剩余堿、標準碳酸氫根濃度、靜脈血氧分壓均顯著低于戊巴比妥鈉腹腔注射組。,27,（八）其他,