




全文預覽已結束
下載本文檔
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
一株發酵產黑色素的枯草芽孢桿菌及發酵產黑色素的方法技術領域:本發明屬于生物工程發酵技術領域,具體涉及通過枯草芽孢桿菌液體發酵生產黑色素及提取方法。背景技術:黑色素是一種廣泛存在于生物體中的一類天然色素,是酪氨酸經過一連串的化學反應形成的,通常以聚合的方式存在。黑色素可以作為吸收紫外線的化妝品成分、天然染發劑的成分、以及生物殺蟲劑的光保護劑尤其是應用于化妝品,因其具有吸收紫外線的作用,可以保護皮膚;色素有很多重要的生物學功能,它能通過與蛋白質的交聯起到強化結構的作用,同時黑色素還能提供一些機械力,并且保護蛋白質不被降解;此外黑色素在醫學上也具有很廣的應用范圍,具有清除自由基、阻止心磷脂脂質體的氧化、抗輻射及抗氧化、對病理學和分類學的研究具有重要意義、作為新型的天然藥物載體、用來治療某些與黑色素缺乏相關的神經性疾病,例如白癜風是常見的一種由于黑色素的缺失而引起的一種疾病。目前,黑色素既可以通過酪氨酸或其衍生物的氯化進行化學合成,也可以從動植物材料中提取,還可以利用微生物合成,但現在大規模生產黑色素仍以化學合成法為主。例如一種以哺乳類動物的毛發為原料和一種以黑芝麻味原料,用氫氧化鈉溶液浸提后采用鹽析作為沉淀劑使黑色素沉淀來制取黑色素的方法。但隨著人們對以化學原料合成黑色素安全性問題的認識,現越來越傾向于對天然黑色素的開發和應用。尤其傾向于用微生物液體發酵生產黑色素。天然黑色素安全性高,成分確定可操作性強,尤其是采用微生物發酵生產黑色素具有反應條件溫和、操作簡單、低成本等特點。現在國內對利用微生物發酵生產黑色素的研究還較少,本發明是利用枯草芽孢桿菌液體發酵生產黑色素。發明內容:本發明針對現有黑色素合成工藝的不足,提供一種利用微生物液體發酵生產黑色素并提取的方法。本發明所用菌株為枯草芽孢桿菌*( )現已保藏在中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心(CGMCC),保藏編號為*本枯草芽孢桿菌*( )屬于革蘭氏陰性菌 本發明的技術方案:通過枯草芽孢桿菌的液體發酵生產黑色素,其過程包括菌種的斜面培養、種子液培養、搖床發酵培養、深層液體發酵培養和黑色素的提取。本發明的具體步驟為:(1)發酵菌種的準備:取保存在-80的枯草芽孢桿菌接種于于固體培養基中,劃線培養,培養溫度3638,培養時間4872h,挑取單菌落作為種子菌。固體培養基的配制方法:成分為蛋白胨1g、葡萄糖0.1g、NaCl0.5g、CaCl2 0.01g、L-酪氨酸0.1g、瓊脂粉1.5g,然后用去離子水定容到100ml,調節PH為7.0,最后在溫度121、高壓蒸汽滅菌1520min,冷卻制得固體平板。(2)種子液發酵培養:將固體平板菌接種于種子液中,在溫度3638、轉速181r/min,培養1216h,培養至對數期。種子液的配制方法:成分為蛋白胨1g、牛肉膏0.5g、NaCl1g然后用去離子水定容至100ml,調節PH為7.0,分裝到若干個250ml搖瓶中,在溫度121、高壓蒸汽滅菌1520min,冷卻得到種子液。(3)將種子液進行放大培養:取上述(2)種子液按接種量6%(V/V)接種于發酵培養基中,在溫度3638、轉速181r/min培2226h,然后加入L-酪氨酸0.1g/100ml,再繼續培養2030h。發酵培養基制備:成分為氮源1.5%2.5%、碳源1.5%2.5%、NaCl0.4g、KH2PO4、MgSO4.7H2O 0.02g、KNO31g、(NH4)2SO4 1g、玉米粉1g,然后用去離子水定容到100ml,調節PH為7.0,在溫度121、高壓蒸汽滅菌20min制得發酵液。上述(3)中發酵液:氮源可為酵母膏、尿素中的一種或多種。碳源可為麩皮、蔗糖、乳糖中的一種或多種。深層通風液體發酵培養:(5)發酵液中黑色素的提取:發酵結束后將枯草芽孢桿菌黑色素發酵液過濾或者離心除去菌體,取發酵液濃縮,用5mol/LHCl調pH值至23,充分振蕩,靜置40100min,在攪拌的同時加入等體積有機溶劑使其充分沉淀,用濾布過濾棄上清,得黑色粗提物,于50真空干燥至恒重。所述發酵液離心轉速為50008000r/min,離心10min,除去菌體。所述有機溶劑為無水乙醇、無水甲醇或無水丙酮中任意一種。所述有機溶劑為濃度40%100%的乙醇。所述黑色素發酵液的濃縮比為50%。所述靜置可以為恒溫水浴中靜置,水浴溫度為0100。所述水浴溫度優選為80。本發明制備黑色素的優點:本發明方法制備的黑色素具有安全、簡單、高效等優點。在化妝業、工農業、醫藥業具有廣泛的應用前景。產自枯草芽孢桿菌的黑色素降低的生產能耗、縮短的生產周期、對環境危害小,于國家倡導的可持續性發展相結合。具體實施方式:下面結合具體事例對發明做詳細介紹:本發明所用菌種為枯草芽孢桿菌*( )現已保藏在中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心(CGMCC),保藏編號為*本枯草芽孢桿菌*( )屬于革蘭氏陰性菌 實施例一、種子液的培養 (1)發酵菌種的準備:取保存在-80的枯草芽孢桿菌菌種于固體培養基中,劃線培養,培養溫度3638,培養4872h,挑取單菌落作為種子液菌種。固體培養基的配制方法:成分為蛋白胨1g、葡萄糖0.1g、NaCl0.5g、CaCl2 0.01g、L-酪氨酸0.1g、瓊脂粉1.5g,然后用去離子水定容到100ml,用NaOH或HCL調節PH為7.0,在溫度121、高壓蒸汽滅菌1520min,冷卻制得固體平板。(2)枯草芽孢桿菌種子液培養:將固體平板菌接種于種子液中,在溫度3638、轉速181r/min,培養1216h,培養至對數期。 種子液的配制方法:成分為蛋白胨1g、牛肉膏0.5g、NaCl1g然后用去離子水定容至100ml,用NaOH或HCL調節PH為7.0,分裝到2個250ml搖瓶中,在溫度121 、高壓蒸汽滅菌1520min,冷卻得到種子液。實施例二、 搖瓶發酵培養取上述枯草芽孢桿菌種子液按接種量6%(V/V)接種于發酵培養基中,在溫度3638、轉速181r/min培2226h,然后加入L-酪氨酸0.1g/100ml,再繼續培養2030h。發酵培養基制備:成分為氮源1.5%2.5%、碳源1.5%2.5%、NaCl0.4g、KH2PO4、MgSO4.7H2O0.02g、KNO31g、(NH4)2SO41g、玉米粉1g,然后用去離子水定容到100ml,調節PH為7.0,在溫度121、高壓蒸汽滅菌20min制得發酵液。上述發酵培養基中:源可為酵母膏、尿素中的一種或多種。碳源可為麩皮、蔗糖、乳糖中的一種或多種。實施例三、深層通風液體發酵培養實施例四、發酵液中黑色素的提取發酵罐裝液量為15L,接種量為6%(V/V),溶氧量20%,37181r/min,在24h后加入L-酪氨酸0.1g/100ml培養2-3d。發酵結束后將枯草芽孢桿菌黑色素發酵液過濾或者離心除去菌體,取發酵液濃縮,用5mol/LHCl調pH值至23,充分振蕩,靜置40100min,在攪拌的同時加入等體積有機溶劑使其充分沉淀,用濾布過濾棄上清,得黑色粗提物,于50真空干燥至恒重。所述發酵液離
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
- 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 新解讀《CB-T 3862-1999船用機械術語 軸系及傳動裝置》新解讀
- Brand KPIs for health insurance:SBK in Germany-英文培訓課件2025.4
- 商貿公司消防管理制度
- 協會業務培訓管理制度
- 初中英語七年級下冊統編教案 第七單元
- 物理中考二輪復習教案 2圖像專題
- 倉儲管理提升年活動方案
- 仙桃加油活動方案
- 安徽省合肥市廬陽區2023-2024學年四年級下學期數學期末試卷(含答案)
- 以學定教教研活動方案
- 金賽 說明書完整版
- 《格力電器企業內部審計存在的問題及優化對策分析案例(論文)10000字》
- 2023年山東省威海市中考歷史試題
- 命令注入漏洞利用實例(共12張PPT)
- 工程勘察設計收費管理規定
- 機器視覺課件
- 2022年廣東省普通高等院校校招收中等職業學校畢業生統一考試英語試卷及答案
- 示范文本-《電池消費稅納稅申報表》
- 項目施工條件分析
- 2022秋期版2208國開電大專科《政治學原理》網上形考(任務1至4)試題及答案
- 初中英語一詞多義重點詞匯匯總大全
評論
0/150
提交評論