第二十三章 需氧革蘭陽性桿菌及檢驗檢驗系劉濤 1 棒狀桿菌屬 第一節 2 G 菌 菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名 菌體染色不均勻 出現節段濃染或異染顆粒 排列不規則 呈柵欄狀 或L形 或V形 無莢膜 無鞭毛 不產生芽胞 多為條件致病菌 只有白喉棒狀桿菌是致病菌 3 白喉棒狀桿菌 4 CASE 患兒 男 6歲 咽痛 聲嘶 咳嗽 發熱3天 體溫37 心率96 分 白細胞升高 亞碲酸鉀培養 病史 百白破疫苗出生后三個月打了第一針 加強免疫因經濟困難而未接種 家屬說舍不得花錢 一針要40多元 孩子的父親右手殘疾 問題 什么病 患者和密切接觸者需如何處理 5 白喉 Diphtheria 是一種急性呼吸道傳染病 特征 患者咽喉部出現灰白色的假膜 假膜 6 一 生物學性狀 7 1 白喉棒狀桿菌的形態學特征 細長桿菌 粗細不一 一端或兩端膨大呈棒狀 排列不規則 呈柵欄狀 V字形或L形 奈瑟染色 革蘭染色 8 1 白喉棒狀桿菌的形態學特征 異染顆粒成分 核糖核酸 多磷酸鹽作用 儲存養料 鑒定價值 Albert染色 9 2 培養特性 呂氏血清斜面培養物含凝固的血清 生長迅速 異染顆粒明顯 亞碲酸鉀血平板黑色菌落 還原 在亞碲酸鉀血瓊脂平板上的白喉棒狀桿菌菌落 18 24h 亞碲酸鹽 碲 黑色 10 根據對亞碲酸鉀的還原能力 菌落形態及生化反應可將白喉棒狀桿菌分為3種類型 重型 gravis 輕型 mitis 和中間型 intermedius 重型 輕型 菌落不溶血 不規則 有條紋 菌落 溶血 光澤 凸起 11 3 變異 白喉棒狀桿菌形態 菌落和毒性均可發生變異 無毒株溶原性細菌 產生外毒素 噬菌體 12 4 抵抗力 抗寒冷和干燥 對濕熱抵抗力弱 對青霉素 氯霉素 紅霉素敏感對磺胺不敏感 13 二 致病性與免疫性 14 1 致病物質 白喉毒素 diphtherotoxin 索狀因子 cordfactor K抗原 Kantigen 15 2 致病機制 1 白喉外毒素 只有攜帶 棒狀桿菌噬菌體的溶原性白喉桿菌才能產生外毒素 外毒素結構 B亞單位 有結合和轉位功能A亞單位 其上有1個催化區 作用靶位 心肌和神經細胞 16 2 致病機制 2 索狀因子破壞哺乳動物細胞中的線粒體 影響細胞呼吸與磷酸化 3 K抗原 抗吞噬 17 3 所致疾病 傳染源 患者 恢復期帶菌者 健康帶菌者 傳播途徑 飛沫或污染 多在秋冬季 臨床表現 白喉 急性呼吸道傳染病 18 臨床表現 1 細菌與毒素共同作用引起局部癥狀 炎癥 壞死 纖維蛋白滲出 假膜導致窒息2 毒素入血引起全身中毒癥狀 外周神經炎 膈肌麻痹 呼吸困難 聲帶麻痹 聲音嘶啞 軟頜麻痹 吞咽困難心肌炎 3 所致疾病 19 20 1 人群易感性 普遍易感 1 5歲兒童 成人也有可能 4 免疫性 21 2 免疫特點 抗毒素免疫 感染后機體可獲得牢固的免疫力 機體還可通過其它方式獲得免疫力 六月以下嬰兒 母親成人 隱性感染 疫苗 22 三 微生物學檢查法 23 標本 假膜邊緣取材 涂片鏡檢 革蘭染色菌體顏色奈瑟染色典型菌體排列Albert染色異染顆粒 標本片 鏡下特點 24 分離培養 標本 接種 呂氏血清斜面 37 6 12h 直接涂片鏡檢 接種 亞碲酸鉀瓊脂平板 培養 黑色菌落 12 18h 灰白色小菌落 快速診斷 25 Elek平板試驗白喉桿菌的有毒菌株可產生白喉外毒素 白喉抗毒素可與其特異性結合 中和白喉外毒素的毒性 可用細菌培養法和動物試驗予以證實 原理 Elek平板毒力試驗是一種體外的毒力測定方法 通過觀察白喉抗毒素與白喉外毒素的雙向瓊脂擴散現象 判斷所培養的白喉桿菌的產毒性 材料 1 產毒素的白喉桿菌 類白喉桿菌及待測的白喉桿菌呂氏血清斜面24h培養物 2 Elek瓊脂蛋白胨培養基 3 白喉抗毒素 1000u m1 馬或兔血清 無菌 無菌濾紙條 6 0 1 5cm 無菌5ml刻度吸管 無菌平皿及鑷子等 26 方法 1 將Elek瓊脂蛋白胨培養基10ml加熱融化 待冷至50 55 時 加入無菌的馬或兔血清2ml 立刻混勻 并傾注平板 2 趁瓊脂未凝固前 用無菌鑷子將浸有白喉抗毒素 1000u m1 的濾紙條 盡量使濾紙條上的抗毒素流盡 貼于平板中央 待瓊脂凝固后將平板置37 溫箱內1 2h 平板面朝下 使培養基略干燥 27 3 接種細菌 以接種環取產毒素白喉桿菌 類白喉桿菌和待檢的白喉桿菌分別以與濾紙條成垂直的方向劃線接種 接種線須密且集中 接種的菌量宜多 若用此法測未知標本需設陽性對照 產毒株 及陰性對照 無毒株 一般每個平板可接種5 6個標本 置37 培養24 48 72h觀察結果 28 結果 注意觀察在接種線兩側距濾紙條約1cm處有無與接種線呈45 角的白色沉淀線出現 有沉淀者 白喉桿菌毒力試驗陽性 該菌株產生白喉外毒素 無沉淀線者 白喉桿菌毒力試驗陰性 該菌株不產生白喉外毒素 29 毒力鑒定 動物試驗 Elek平板毒力實驗 白喉桿菌菌苔 沉淀線 陽性 含白喉抗毒素