動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教案動(dòng)物生理學(xué)研究性實(shí)驗(yàn)的程序與基本要求動(dòng)物生理學(xué)不僅是一門(mén)理論性很強(qiáng)的基礎(chǔ)性學(xué)科，而且是實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的學(xué)科，它的許多理論都來(lái)自科學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，在學(xué)生經(jīng)過(guò)了一段時(shí)間的動(dòng)物生理學(xué)理論的學(xué)習(xí)和一定的實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)操作訓(xùn)練及經(jīng)典性實(shí)驗(yàn)實(shí)踐之后，進(jìn)一步進(jìn)行有關(guān)的動(dòng)物生理學(xué)研究性實(shí)驗(yàn)的基本訓(xùn)練是非常必要的。通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、探索性實(shí)驗(yàn)過(guò)程，能使學(xué)生充分認(rèn)識(shí)實(shí)驗(yàn)在科學(xué)理論產(chǎn)生和發(fā)展中的作用；培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新精神及觀察和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題的能力；解決實(shí)際問(wèn)題和分析、綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力；通過(guò)撰寫(xiě)研究性論文使學(xué)生學(xué)會(huì)用邏輯性語(yǔ)言表達(dá)研究結(jié)果的能力；為今后獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究打下良好的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)技術(shù)與實(shí)驗(yàn)儀器一、動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)目的 本課程旨在通過(guò)實(shí)驗(yàn)教學(xué)訓(xùn)練學(xué)生基本操作技能，培養(yǎng)其動(dòng)手能力，并使學(xué)生通過(guò)該課程的學(xué)習(xí)與理論知識(shí)融會(huì)貫通；培養(yǎng)學(xué)生實(shí)事求是、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)和嚴(yán)密的科學(xué)邏輯思維方法，以及觀察、分析、解決問(wèn)題的綜合能力。同時(shí)，通過(guò)學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)課程中的新技術(shù)、新方法，使學(xué)生了解和掌握機(jī)能學(xué)科實(shí)驗(yàn)方法的更新和發(fā)展方向，啟發(fā)學(xué)生在機(jī)能學(xué)科實(shí)驗(yàn)研究中的創(chuàng)新性思維。為培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)研究思維和科學(xué)研究能力奠定良好基礎(chǔ)。二、學(xué)習(xí)動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的要求 1做好實(shí)驗(yàn)前理論與操作準(zhǔn)備 (1)熟悉相關(guān)理論知識(shí)，以明確相關(guān)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)目的、實(shí)驗(yàn)原理以及正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 (2)預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)教材中擬進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理，了解實(shí)驗(yàn)步驟及操作要點(diǎn)、注意事項(xiàng)等。 2以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度進(jìn)行實(shí)驗(yàn) (1)實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)小組各成員合理分工并密切合作，注意培養(yǎng)自己的動(dòng)手能力與獨(dú)立解決實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的問(wèn)題的能力。 (2)仔細(xì)、耐心觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真做好記錄。主動(dòng)聯(lián)系理論思考、分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果和各種實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。認(rèn)真總結(jié)實(shí)驗(yàn)成敗原因。培養(yǎng)實(shí)事求是的科學(xué)作風(fēng)。 (3)所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)完整記錄。整理分析其結(jié)果后書(shū)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的記錄方法與實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)要求 1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示方法 (1)圖形表示法：實(shí)驗(yàn)結(jié)果如以圖形記錄在實(shí)驗(yàn)儀器上的，可通過(guò)輸出設(shè)備打印，再附在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。如神經(jīng)肌肉的電活動(dòng)記錄，心肌、腸肌收縮曲線，血壓曲線等。某些數(shù)據(jù)亦可經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后做成圖形表示。如不同血藥濃度與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，此時(shí)血藥濃度為縱坐標(biāo)、時(shí)間為橫坐標(biāo)，描記出藥時(shí)曲線圖形。 (2)數(shù)據(jù)表示法：實(shí)驗(yàn)結(jié)果以測(cè)定數(shù)據(jù)記錄的，也可以統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表格形式表示，如：各組動(dòng)物不同情況下的血液、體液電解質(zhì)濃度，PC02、P02等數(shù)據(jù)。 2實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)要求 在實(shí)驗(yàn)報(bào)告封頁(yè)上應(yīng)寫(xiě)上姓名、學(xué)號(hào)、年級(jí)、班次和實(shí)驗(yàn)組別。字跡清楚，工整。按格式要求逐一書(shū)寫(xiě)（1）實(shí)驗(yàn)題目：一般將實(shí)驗(yàn)題目放在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙的第一行或第一行正中。（2）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模鹤謹(jǐn)?shù)不宜繁多。一般用12句話闡明實(shí)驗(yàn)所要證實(shí)的論點(diǎn)或要研究的內(nèi)容即可。（3）實(shí)驗(yàn)方法：應(yīng)注明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物名稱(chēng)，麻醉方法。其余實(shí)驗(yàn)操作如實(shí)驗(yàn)儀器、實(shí)驗(yàn)藥物或試劑、實(shí)驗(yàn)步驟與過(guò)程等，可用“按XX章XX實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行”等字樣表示。（4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)、完整地以圖形、表格或文字方式表示出來(lái)。如因操作失誤或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物發(fā)生意外未能完成所需觀察的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中如實(shí)說(shuō)明。（5） 討論和結(jié)論：討論應(yīng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行，宜簡(jiǎn)明扼要。主要是分析解釋所觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和現(xiàn)象，如為預(yù)期結(jié)果，應(yīng)結(jié)合理論知識(shí)進(jìn)行其作用、作用機(jī)制的闡述。如未達(dá)預(yù)期結(jié)果，應(yīng)找出原因，總結(jié)其經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)。 結(jié)論放在實(shí)驗(yàn)討論后，作為結(jié)尾完成。結(jié)論應(yīng)以實(shí)驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，在討論的基礎(chǔ)上概括、總結(jié)具有代表性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的論點(diǎn)或推論。四、實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和操作規(guī)程 1按時(shí)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，不得遲到早退或隨意缺席。 2養(yǎng)成良好的學(xué)習(xí)和工作作風(fēng)，保持實(shí)驗(yàn)室安靜。嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室里高聲喧嘩、打鬧。 3愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施。實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟和方法進(jìn)行。未經(jīng)教師同意不得隨意動(dòng)用實(shí)驗(yàn)室儀器或器械。切忌違規(guī)操作或粗暴使用精密儀器。如微機(jī)操作應(yīng)掌握如何正確開(kāi)機(jī)、如何進(jìn)入實(shí)驗(yàn)程序、如何啟動(dòng)記錄、如何存儲(chǔ)與輸出、如何打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果及關(guān)機(jī)等。嚴(yán)禁在微機(jī)上玩游戲、作個(gè)人文件、隨意啟動(dòng)其他程序，甚至損壞實(shí)驗(yàn)程序等與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)甚至非法的活動(dòng)。 4實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真按教材清點(diǎn)實(shí)驗(yàn)桌上的實(shí)驗(yàn)器材，如有實(shí)驗(yàn)器械缺少或損壞應(yīng)及時(shí)向教師報(bào)告。實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)將器械清洗干凈，擺放整齊。如在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中意外損壞實(shí)驗(yàn)器械，應(yīng)向教師報(bào)告說(shuō)明，以及時(shí)檢修或更換。故意損壞實(shí)驗(yàn)儀器或器械者，除照價(jià)賠償外，學(xué)校將給予行政處罰。 5養(yǎng)成節(jié)約用物的良好習(xí)慣，不得隨意浪費(fèi)動(dòng)物標(biāo)本、器材、藥品和試劑。能重復(fù)利用的器材如紗布、縫合針、試管、插管、針頭等，應(yīng)洗凈再用。實(shí)驗(yàn)中不得圖個(gè)人方便而隨意移走公用物品。實(shí)驗(yàn)廢物不得亂倒、亂扔，尤其是強(qiáng)酸、強(qiáng)堿試劑或具放射性的液體或污物，動(dòng)物皮毛，組織器官，紙屑等不得倒入水槽內(nèi)，應(yīng)統(tǒng)一放置在指定地點(diǎn)。 6實(shí)驗(yàn)完成后，應(yīng)及時(shí)關(guān)閉微機(jī)。離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室以前應(yīng)安排值日小組打掃實(shí)驗(yàn)室清潔，整理桌面物品，關(guān)閉總電源及穩(wěn)壓器開(kāi)關(guān)、水開(kāi)關(guān)、門(mén)窗等。最后請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室管理人員檢查驗(yàn)收后方能離開(kāi)。五、 動(dòng)物生理實(shí)驗(yàn)常用手術(shù)器械1 常用手術(shù)器械 動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用手術(shù)器械與醫(yī)學(xué)外科手術(shù)器械大致相同,但也有一些專(zhuān)用器械.現(xiàn)僅介紹常規(guī)的手術(shù)器械。 (1)手術(shù)刀 手術(shù)刀主要用來(lái)切開(kāi)皮膚和臟器。手術(shù)刀片有圓刃、尖刃和彎刃三種。刀柄也分多種，最常用的是4號(hào)刀柄和7號(hào)刀柄（圖3.1-1）。可根據(jù)手術(shù)部位、性質(zhì)的需要自由拆裝和更換變鈍或損壞的手術(shù)刀片（圖3.1-2）。持刀的方式有4種(圖3.1-3)，其中“執(zhí)弓式”是一種常用的的持刀方式。其動(dòng)作范圍廣泛而靈活，用于腹部、頸部或股部的皮膚切口。 (2)手術(shù)剪和粗剪刀 手術(shù)剪分鈍頭剪、尖頭剪。其尖端有直、彎之分。主要用于剪皮膚、肌肉等軟組織。也可用來(lái)分離組織，即利用剪刀尖插入組織間隙，分離無(wú)大血管的結(jié)締組織。另外，還有一種小型的眼科剪，主要用于剪血管和神經(jīng)等軟組織。一般說(shuō)來(lái)，深部操作宜用彎剪，不致誤傷。剪線大多為鈍頭直剪，剪毛用鈍頭、尖端上翹的。正確執(zhí)剪姿勢(shì)是用拇指與無(wú)名指持剪，食指置于手術(shù)剪的上方（圖3.1-4）。粗剪刀，為普通的剪刀。在蛙類(lèi)的實(shí)驗(yàn)中，常用來(lái)剪蛙的脊柱、骨和皮膚等粗硬組織。 (3)手術(shù)鑷 手術(shù)鑷種類(lèi)很多，名稱(chēng)也不統(tǒng)一，常用的有無(wú)齒鑷和有齒鑷兩種,用于夾住或提起組織，以便剝離、剪斷或縫合。有齒鑷用于提起皮膚、皮下組織、筋膜、肌腱等較堅(jiān)韌的組織，使其不易滑脫。但有齒鑷不能用以?shī)A持重要器官，以免造成損傷。無(wú)齒鑷用于夾持神經(jīng)、血管、腸壁或其他臟器,較脆弱組織，而不致使之受損傷。正確執(zhí)鑷方法如圖3.1-5，用力適當(dāng)?shù)匕殉种?(4)血管鉗 血管鉗又稱(chēng)止血鉗，有直、彎、帶齒和蚊式鉗等數(shù)種。主要用于夾血管或止血點(diǎn)，以達(dá)止血的目的。也用于分離組織、牽引縫線，把持或拔縫針等。正確持鉗和持剪方法相同（圖3.1-6）。開(kāi)放血管鉗的方法是利用右手已套入血管鉗的拇指與無(wú)名指相對(duì)擠壓，繼而兩指向相反的方向旋開(kāi)，放開(kāi)血管鉗(圖3.1-7)。 (5) 骨鉗 在打開(kāi)顱腔和骨髓腔時(shí)，用于咬切骨質(zhì)。 (6)顱骨鉆 用于開(kāi)顱時(shí)鉆孔。(7)氣管插管 急性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，插入氣管，以保證呼吸通暢，或做人工呼吸。將一端接氣鼓或換能器，可記錄呼吸運(yùn)動(dòng)。 (8)血管插管 有動(dòng)脈插管和靜脈插管。一些小型動(dòng)物的動(dòng)脈插管可用16號(hào)輸血針頭磨平來(lái)替代。在急性實(shí)驗(yàn)時(shí)插入動(dòng)脈，另一端接壓力換能器或水銀檢壓計(jì)，以記錄血壓。靜脈插管插入靜脈后固定，以便在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中隨時(shí)用注射器向靜脈血管中注入藥物和溶液。 (9)金屬探針 專(zhuān)門(mén)用來(lái)毀壞蛙類(lèi)腦和脊髓。 (10)玻璃分針 專(zhuān)用于分離神經(jīng)與血管等組織。 (11)蛙心夾 使用時(shí)將夾的前端在蛙心室舒張時(shí)夾住心室尖，尾端用線系在換能器（或扛桿）上。 (12)動(dòng)脈夾 用于阻斷動(dòng)脈血流。 (13)蛙板 一塊20 cm15 cm的木板，用于固定蛙類(lèi)。 各種手術(shù)器械使用后，都應(yīng)及時(shí)清洗，齒間、軸間的血跡也應(yīng)用小刷刷洗干凈。洗凈后用干布擦拭干，忌用火烤烘干或重?fù)簟＞弥貌挥玫慕饘倨餍祽?yīng)檫油保護(hù)。2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物六、計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)在生理學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用 生物信號(hào)采集、處理系統(tǒng)是應(yīng)用大規(guī)模集成電路、計(jì)算機(jī)硬件和軟件技術(shù)開(kāi)發(fā)的一種集生物信號(hào)的放大、采集、顯示、處理、存儲(chǔ)和分析的電機(jī)一體化儀器。該系統(tǒng)可替代傳統(tǒng)的刺激器、放大器、示波器、記錄儀，一機(jī)多用，功能強(qiáng)大。廣泛地被應(yīng)用于生理學(xué)、病理學(xué)、藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。1 計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采、集處理系統(tǒng)的基本組成和工作原理 目前我國(guó)的生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)多達(dá)十余種,因各制造商開(kāi)發(fā)的年代和使用風(fēng)格不同,相互之間存在著一定的差異。早期的產(chǎn)品基于DOS操作系統(tǒng)，而近期產(chǎn)品多以Windows操作系統(tǒng)，雖然產(chǎn)品有不同的特點(diǎn)，但基本的結(jié)構(gòu)和工作原理具有一定的共性,現(xiàn)做一簡(jiǎn)要的介紹。 該系統(tǒng)由硬件和軟件兩大部分組成。硬件主要完成對(duì)各種生物電信號(hào)(如：心電、肌電、腦電)與非電生物信號(hào)(如：血壓、張力、呼吸)的采集。并對(duì)采集到的信號(hào)進(jìn)行調(diào)理、放大，進(jìn)而對(duì)信號(hào)進(jìn)行模數(shù)(AD)轉(zhuǎn)換，使之進(jìn)入計(jì)算機(jī)。軟件主要用來(lái)對(duì)已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號(hào)進(jìn)行顯示、記錄、存儲(chǔ)、處理及打印輸出，同時(shí)對(duì)系統(tǒng)各部分進(jìn)行控制，與操作者進(jìn)行人機(jī)對(duì)話(圖2.5-1)。（1） 傳感器和放大器 生物所產(chǎn)生的信息，其形式多種多樣，除生物電信號(hào)可直接檢取外，其它形式的生物信號(hào)必須先轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，對(duì)微弱的電信號(hào)還需經(jīng)過(guò)放大，才能作進(jìn)一步的處理。生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)中的刺激器和放大器都是由計(jì)算機(jī)程控的,其工作原理和一般的刺激器、放大器完全一樣。主要的區(qū)別在于一般儀器是機(jī)械觸點(diǎn)式切換，而生物信號(hào)采集系統(tǒng)是電子模擬開(kāi)關(guān)，由電壓高低的變化控制，是程序化管理，提高了儀器的可靠性，延長(zhǎng)了儀器的壽命。 （2） 生物信號(hào)的采集 計(jì)算機(jī)在采集生物信號(hào)時(shí)，通常按照一定的時(shí)間間隔對(duì)生物信號(hào)取樣，并將其轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)后放入內(nèi)存。這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為采樣。 (1)A/D轉(zhuǎn)換器 生物信號(hào)通常是一種連續(xù)的時(shí)間函數(shù)，必需轉(zhuǎn)換為離散函數(shù)，再將這離散的函數(shù)按照計(jì)算機(jī)的“標(biāo)準(zhǔn)尺度”數(shù)字化，以二進(jìn)制表達(dá)，才能被計(jì)算機(jī)所接受。A/D轉(zhuǎn)換設(shè)備能提供多路模/數(shù)轉(zhuǎn)化和數(shù)/模轉(zhuǎn)換化。A/D轉(zhuǎn)換需要一定時(shí)間，這個(gè)時(shí)間的長(zhǎng)短決定著系統(tǒng)的最高采樣速度。A/D轉(zhuǎn)換的結(jié)果是以一定精度的數(shù)字量表示，精度愈高，（曲線的）幅度的連續(xù)性愈好。對(duì)一般的 生物信號(hào)采樣精度不應(yīng)低于12位數(shù)字。轉(zhuǎn)換速度和轉(zhuǎn)換精度是衡量A/D轉(zhuǎn)換器性能的重要指標(biāo)。 (2)采樣與采樣有關(guān)的參數(shù)包括：通道選擇、采樣間隔、觸發(fā)方式和采樣長(zhǎng)度等方面。 通道選擇： 一個(gè)實(shí)驗(yàn)往往要記錄多路信號(hào)，如心電、心音、血壓等。計(jì)算機(jī)對(duì)多路信號(hào)進(jìn)行同步采樣，是通過(guò)一個(gè)“多選一”的模擬開(kāi)關(guān)完成的。在一個(gè)很短暫的時(shí)間內(nèi)，計(jì)算機(jī)通過(guò)模擬開(kāi)關(guān)對(duì)各路信號(hào)分別選通、采樣。這樣，盡管對(duì)各路信號(hào)的采樣有先有后，但由于這個(gè)“時(shí)間差”極短暫，因此，仍可以認(rèn)為對(duì)各路信號(hào)的采樣是“同步”的。 采樣間隔： 原始信號(hào)是連續(xù)的，而采樣是間斷進(jìn)行的。對(duì)某一路信號(hào)而言，兩個(gè)相鄰采樣之間的時(shí)間間隔稱(chēng)為采樣間隔。間隔愈短，單位時(shí)間內(nèi)的采樣次數(shù)愈多。采樣間隔的選取與生理信號(hào)的頻率也有關(guān)，采樣速率過(guò)低，就會(huì)使信號(hào)的高頻成分丟失。但采樣速率過(guò)高會(huì)產(chǎn)生大量不必要的數(shù)據(jù)，給處理、存儲(chǔ)帶來(lái)麻煩。根據(jù)采樣定律，采樣頻率應(yīng)大于信號(hào)最高頻率的2倍。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，常取信號(hào)最高頻率的35倍來(lái)作為采樣速率。 采樣方式： 采樣通常有連續(xù)采樣和觸發(fā)采樣兩種方式。在記錄自發(fā)生理信號(hào)(如心電、血壓)時(shí)，采用連續(xù)采樣的方式。而在記錄誘發(fā)生理信號(hào)(如皮層誘發(fā)電位)時(shí)，常采用觸發(fā)采樣的方式。后者又可根據(jù)觸發(fā)信號(hào)的來(lái)源分為外觸發(fā)和內(nèi)觸發(fā)。 采樣長(zhǎng)度： 在觸發(fā)采樣方式中啟動(dòng)采樣后，采樣持續(xù)的時(shí)間稱(chēng)為采樣長(zhǎng)度。它一般應(yīng)略長(zhǎng)于一次生理反應(yīng)所持續(xù)的時(shí)間。這樣既記錄到了有用的波形，又不會(huì)采集太多無(wú)用的數(shù)據(jù)造成內(nèi)存的浪費(fèi)。（3）生物信號(hào)的處理 計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)因其強(qiáng)大的計(jì)算功能，可起到濾波器的功能，而且性能遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)模擬電路，恢復(fù)被噪音所淹沒(méi)的重復(fù)性生理信號(hào)。人們可以測(cè)量信號(hào)的大小、數(shù)量、變化程度和變化規(guī)律，如波形的寬度、幅度、斜率、零交點(diǎn)數(shù)等參數(shù)。做進(jìn)一步的分類(lèi)統(tǒng)計(jì)、分析給出各頻率分能量（如腦電、肌電及心率變異信號(hào)）在信號(hào)總能量中所占的比重、對(duì)信號(hào)源進(jìn)行定位。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以用計(jì)數(shù)或圖形方式輸出。對(duì)來(lái)自攝像機(jī)或掃描儀的圖像信息經(jīng)轉(zhuǎn)換后，也可輸入計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析。所以計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，不僅具備了刺激器、放大器、示波器、記錄儀和照相機(jī)等儀器的記錄功能外，而且還兼有微分儀、積分儀、觸發(fā)積分儀、頻譜分析儀等信號(hào)分析儀器的信息處理功能。為節(jié)省存儲(chǔ)空間，計(jì)算機(jī)可對(duì)其獲得的數(shù)據(jù)可按一定的算法進(jìn)行壓縮。2 計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集、處理系統(tǒng)的基本操作 計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集、處理系統(tǒng)種類(lèi)繁多，用其進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作方法各有所異,這里只能做一般的、原則性介紹。掌握實(shí)驗(yàn)的一般流程、配置實(shí)驗(yàn)和刺激參數(shù)設(shè)置方法是我們用好生物信號(hào)采集系統(tǒng)的關(guān)鍵。 (1)進(jìn)入系統(tǒng)，選擇通道：確定信號(hào)輸入到哪個(gè)通道，以打“對(duì)勾”表示。 (2)刺激方式的選擇:根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要確定是否需要刺激。一般可有7種刺激方式可被選擇（見(jiàn)刺激參數(shù)設(shè)置） (3)選擇輸入方式：根據(jù)生物信號(hào)的性質(zhì)：是非電信號(hào)（如骨骼肌張力、血壓、呼吸道壓力、心肌收縮力、腸肌張力等）還是電的信號(hào)（如神經(jīng)干動(dòng)作電位、心電、神經(jīng)放電、腦電等），確定是否需要換能器。 (4)交/直流的選擇 根據(jù)生物信號(hào)是快信號(hào)（如神經(jīng)干動(dòng)作電位、心室肌動(dòng)作電位、神經(jīng)放電等）還是慢信號(hào)（如血壓、呼吸、心電、平滑肌張力等）確定以何種電流輸入。一般電信號(hào)選擇交流輸入，非電信號(hào)經(jīng)換能后選擇直流輸入。來(lái)自另外的前置放大器的輸入信號(hào)，采用直流輸入的方式（如經(jīng)微電極放大器后的心室肌動(dòng)作電位信號(hào)）。可用放大器的時(shí)間常數(shù)進(jìn)行選擇（或有專(zhuān)門(mén)的開(kāi)關(guān)）。 (5)放大器放大倍數(shù)的選擇：采樣卡的有效采樣電壓一般位+/-5V。所以輸入信號(hào)的強(qiáng)度一般不能超過(guò)5 V，根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱選擇適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù),在不溢出的前提下,放大倍數(shù)選大一些為好。 (6)濾波選擇： 根據(jù)是否需要濾波確定高頻濾波和時(shí)間常數(shù)，使采樣在最好的波段中進(jìn)行（見(jiàn)2.3.1）。 (7)選擇顯示模式 ：用計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集、處理系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)有兩種顯示模式的選擇：一類(lèi)為快捷（或標(biāo)準(zhǔn)）方式，系統(tǒng)內(nèi)提供了許多常規(guī)的生理、病理、藥理專(zhuān)項(xiàng)實(shí)驗(yàn)方法，所配置及標(biāo)定的參數(shù)都已提供在每一專(zhuān)項(xiàng)實(shí)驗(yàn)選項(xiàng)中。因此只要進(jìn)入系統(tǒng)，激活實(shí)驗(yàn)菜單，選擇具體的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，即可按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容做好各項(xiàng)配置、標(biāo)定而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。另一類(lèi)是一般性（或通用）方式，適用于科研與特殊教學(xué)實(shí)驗(yàn)，可根據(jù)需要不斷改變系統(tǒng)參數(shù)（進(jìn)行顯示設(shè)置），使采集的波形更好，更適合于觀察及符合實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 “連續(xù)記錄”方式：用來(lái)記錄變化較慢，頻率較低的生物信號(hào)。如電生理實(shí)驗(yàn)中的血壓，呼吸，心電、張力等，掃描線的方向是由右向左，連續(xù)滾動(dòng)，與傳統(tǒng)儀器的二導(dǎo)記錄儀相一致。它的采樣間隔從最慢50 ms至最快25 s，有11檔可選。在上述經(jīng)典實(shí)驗(yàn)中一般選l ms 10 ms之間即可。 “記憶示波”方式：用來(lái)記錄變化快，頻率高的生物信號(hào)。如：電生理實(shí)驗(yàn)中的神經(jīng)干動(dòng)作電位，動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度，心室肌動(dòng)作電位等。掃描線的方向是由左至右，一屏一屏地記錄，與傳統(tǒng)示波器相一致。它的采樣間隔選項(xiàng)從最快每次1 ms10 s,有8檔可選。(注意：在10 s檔即100 KHz采樣頻率只允許單窗口運(yùn)行)在經(jīng)典型實(shí)驗(yàn)一般選25 s或50 s即可。 刺激觸發(fā)顯示方式 是一種單幀波形顯示方式。表示發(fā)出一個(gè)刺激信號(hào)，采集一幀生物信號(hào)數(shù)據(jù)，并把它顯示在屏幕上。如果選擇了“記憶示波”顯示方式則應(yīng)考慮選擇“刺激器觸發(fā)顯示”，要求刺激與采樣同步工作。還有其它顯示方式，此處不再列舉。 (8)采樣間隔選擇：注意采樣間隔與所采信號(hào)相匹配。采樣間隔調(diào)控的合適值應(yīng)多試幾次，以求最好。 (9)采樣 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（通道采樣內(nèi)容）從14通道輸入生理信號(hào)并選擇希望進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，點(diǎn)擊開(kāi)始按鈕，系統(tǒng)開(kāi)始采樣，采樣窗中即有掃描線出現(xiàn)，并隨外部信號(hào)變化，顯示起伏波形。 注意：如果在觸發(fā)方式中選定了刺激器觸發(fā)，則應(yīng)當(dāng)在主界面中點(diǎn)擊“刺激”按鈕啟動(dòng)刺激器，即可開(kāi)始同步采樣。 (10)實(shí)時(shí)調(diào)整采樣參數(shù)：為使采樣波形達(dá)到最好即最有利于觀察的狀態(tài)，可以在采樣過(guò)程中,時(shí)實(shí)按以下步驟調(diào)節(jié)各部分： 如感信號(hào)太大或太小,可實(shí)時(shí)點(diǎn)擊各通道放大器增益按鈕，改變放大倍數(shù),將信號(hào)幅度放大至適當(dāng)程度。 調(diào)節(jié)各通道的時(shí)間常數(shù)和高頻濾波值 調(diào)節(jié)各通道的掃描速度。 如感到圖形顯示太大或太小, 可實(shí)時(shí)在Y軸上進(jìn)行壓縮或擴(kuò)展，使圖形大小適中。注意此時(shí)輸入的信號(hào)并沒(méi)有改變，僅是圖形的變形。 如果感到圖形X軸壓縮比不合適,可實(shí)時(shí)點(diǎn)擊X軸壓縮或擴(kuò)展按鈕，使掃描線滾動(dòng)速度適合觀察。 在需要刺激時(shí)，可在刺激器參數(shù)調(diào)整欄中，逐個(gè)調(diào)整刺激參數(shù)，形成最佳參數(shù)。 如果出現(xiàn)50 Hz的干擾,可啟動(dòng)50 Hz抑制,將50 Hz電源的干擾信號(hào)消除掉。該命令只能對(duì)當(dāng)前通道起作用。 (11)結(jié)束采樣 點(diǎn)擊采樣結(jié)束按鈕結(jié)束采樣，全部結(jié)果數(shù)據(jù)以圖形方式顯示在各自的窗口，可移動(dòng)X方向棍條從頭到尾觀察所有的圖形。并可拖選圖形進(jìn)行觀測(cè)量、進(jìn)入表格、打印等后處理。 (12) 設(shè)置存盤(pán) 如果本次實(shí)驗(yàn)成功，所選的設(shè)置參數(shù)合理，可將本設(shè)置以自定義文件名存盤(pán)。實(shí)驗(yàn)二 呼吸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)【實(shí)驗(yàn)原理】呼吸運(yùn)動(dòng)能夠有節(jié)律地進(jìn)行，并能適應(yīng)機(jī)體代謝的需要，是由于體內(nèi)呼吸中樞調(diào)節(jié)的緣故。體內(nèi)、外各種刺激可以作用于中樞或經(jīng)不同的感受器反射性地通過(guò)膈神經(jīng)和肋間神經(jīng)影響呼吸肌尤其是膈肌的活動(dòng)。【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹勘緦?shí)驗(yàn)的目的是觀察某些因素對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)的影響及膈肌活動(dòng)時(shí)的生物電現(xiàn)象。【實(shí)驗(yàn)材料】 1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象 家兔2.實(shí)驗(yàn)器材 哺乳類(lèi)動(dòng)物手術(shù)器械，兔手術(shù)臺(tái)、MS4000U生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、氣管插管、50cm長(zhǎng)的乳膠管、保護(hù)電極、20ml、5ml注射器、250ml抽濾瓶、紗布、棉線。3.藥 品 生理鹽水、20%氨基甲酸乙酯、3%乳酸、CaCO3、 稀鹽酸、【實(shí)驗(yàn)步驟及觀察項(xiàng)目】1. 麻醉及氣管插管 用20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg體重）由耳緣靜脈注入，待動(dòng)物麻醉后仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，沿頸部正中切開(kāi)皮膚，分離氣管，并插入氣管插管。分離出頸部雙側(cè)迷走神經(jīng)穿線備用。在劍突下剪一小口，暴露劍突下的膈肌，注意切勿導(dǎo)致氣胸。具體步驟：抓兔方法、稱(chēng)重、麻醉、手術(shù)等靜脈注射法：家兔靜脈注射一般采用耳緣靜脈。耳緣靜脈沿耳背后緣走行，較粗，剪除其表面皮膚上的毛并用水濕潤(rùn)局部，血管即顯現(xiàn)出來(lái)。注射前可先輕彈或揉擦耳尖部并用手指輕壓耳根部，刺入靜脈(第一次進(jìn)針點(diǎn)要盡可能靠遠(yuǎn)心端，以便為以后的進(jìn)針留有余地)后順著血管平行方向深入1cm，放松對(duì)耳根處血管的壓迫，左手拇指和食部指移至針頭刺入部位，將針頭與兔耳固定。進(jìn)行藥物注射。若注射阻力較大或出現(xiàn)局部腫脹，說(shuō)明針頭沒(méi)有刺入靜脈，應(yīng)立即拔出針頭，在原注射點(diǎn)的近心段重新刺入。注射完畢，拔出針頭，用棉球壓住針刺孔，以免出血。若實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需補(bǔ)充麻藥或靜脈給藥，也可不拔出針頭，而用動(dòng)脈夾將針頭與兔耳固定，只拔下注射器筒，用一根與針頭內(nèi)徑吻合且長(zhǎng)短適宜的針芯(可用針灸針代替)插入針頭小管內(nèi)，防止血液流失，以備下次注射時(shí)使用(見(jiàn)圖2-11中)。 2-11 兔耳靜脈注靜烏拉坦：又名氨甲乙酸乙酯(urethane)，與氯醛糖類(lèi)似，可導(dǎo)致較持久的淺麻醉，對(duì)呼吸無(wú)明顯影響。烏拉坦對(duì)兔的麻醉作用較強(qiáng)，是家兔急性實(shí)驗(yàn)常用的麻醉藥。對(duì)貓和狗則奏效較慢，在大鼠和兔能誘發(fā)腫瘤，需長(zhǎng)期存活的慢性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最好不用它麻醉。本藥易溶于水，使用時(shí)配成1025%的溶液。頸部手術(shù) 頸部手術(shù)主要以免、狗、貓、大白鼠、豚鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。將動(dòng)物仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1頸部切開(kāi)剪去頸前皮膚上的毛。用手術(shù)刀在喉頭與胸骨上緣之間沿頸腹正中線作一切口。切口的長(zhǎng)度：大白鼠或豚鼠為2.5-4cm，兔、貓為5-7Cm，狗為10cm。用止血鉗分離皮下結(jié)締組織，然后將切開(kāi)的皮膚向兩側(cè)拉開(kāi)，可見(jiàn)到頸部有3條淺層肌肉：(1)胸骨乳突肌 起自胸骨，斜向外側(cè)方頭部顳骨的乳突處，在狗稱(chēng)為胸頭肌。左右胸骨乳突肌呈“V”型斜向分布。(2)胸骨舌骨肌 起自胸骨，止于舌骨體，位于頸腹正中線，左右兩條平行排列，覆蓋于氣管腹側(cè)面。(3)胸骨甲狀肌 起自胸骨和第一肋軟骨，止于甲狀軟骨后緣正中處。2氣管切開(kāi)及氣管插管術(shù)氣管切開(kāi)術(shù)是哺乳類(lèi)動(dòng)物急性實(shí)驗(yàn)中常作的手術(shù)。一方面切開(kāi)氣管和插入氣管插管可保證呼吸通暢；另一方面為實(shí)驗(yàn)要求做準(zhǔn)備。氣管位于頸部正中位，全部被胸骨舌骨肌與胸骨甲狀肌所覆蓋。用止血鉗分開(kāi)左右胸骨舌骨肌，在正中線沿其中縫插入并向前后兩端擴(kuò)張創(chuàng)口。注意止血鉗不能插入過(guò)深，以免損傷氣管或其他小血管。也可用兩食指沿左右胸骨舌骨肌中縫輕輕向上下拉開(kāi)，此時(shí)即可見(jiàn)到氣管。在喉頭以下氣管處，分離一段氣管與食管之間的結(jié)締組織，并穿一根浸過(guò)生理鹽水的棉線備用。于甲狀軟骨下1-2cm處的兩個(gè)軟骨環(huán)之間，用手術(shù)刀或剪刀將氣管橫向切開(kāi)，再向頭端作一小縱向切口，使呈“”形，將口徑適當(dāng)?shù)臍夤懿骞苡汕锌谙蛐囟瞬迦霘夤芮粌?nèi)，用備用線結(jié)扎，并再在插管的側(cè)管上打結(jié)固定，以防插管滑出。插入插管后需仔細(xì)檢查，若管內(nèi)有血液，必須拔出插管，經(jīng)止血處理后再插入。3. 頸部神經(jīng)、血管分離的基本方法神經(jīng)和血管都是比較嬌嫩的組織，因此在剝離的過(guò)程中應(yīng)細(xì)心，動(dòng)作要輕柔，切不可用帶齒的鑷子進(jìn)行剝離，也不可用止血鉗或鑷子夾持，以免其結(jié)構(gòu)和機(jī)能受損。剝離頸部較粗大神經(jīng)和血管時(shí)，先用止血鉗將神經(jīng)或血管周?chē)慕Y(jié)締組織稍加分離，然后在神經(jīng)或血管附近結(jié)締組織中插入大小適合的止血鉗，順著神經(jīng)或血管走行方向擴(kuò)張止血鉗，逐漸使其周?chē)Y(jié)締組織剝離。分離細(xì)小神經(jīng)或血管時(shí)，要特別注意保持局部的自然解剖位置，不要把結(jié)構(gòu)關(guān)系弄亂，同時(shí)需用玻璃分針輕輕地進(jìn)行分離。剝離組織時(shí)的用力方向應(yīng)與神經(jīng)或血管的走行方向一致。分離完畢，在神經(jīng)或血管的下面穿過(guò)浸有生理鹽水的細(xì)線(根據(jù)需要穿一根或兩根)，以備刺激時(shí)提起或結(jié)扎之用。然后用一塊浸有溫?zé)嵘睇}水的紗布或棉花蓋在切口組織上，經(jīng)常保持組織濕潤(rùn)(見(jiàn)圖2-22)。圖2-22 兔頸、胸部的神經(jīng)和血管示意圖(2)兔氣管插管 動(dòng)物（以家兔為例）暴露、游離出氣管，并在氣管下穿一較粗的線。用剪刀或?qū)Ｓ秒姛峤z于喉頭下23 cm處的兩軟骨環(huán)之間，橫向切開(kāi)氣管前壁約1/3的氣管直徑，再于切口上緣向頭側(cè)剪開(kāi)約0.5 cm長(zhǎng)的縱向切口，整個(gè)切口呈”。若氣管內(nèi)有分泌物或血液要用小干棉球拭凈。然后一手提起氣管下面的縛線，一手將一適當(dāng)口徑的“Y”氣管插管斜口朝下,由切口向肺插入氣管腔內(nèi)，再轉(zhuǎn)動(dòng)插管使其斜口面朝上，用線镈結(jié)于套管的分叉處,加以固定（圖3.7-2）。2. 儀器連接 將壓力傳感器與氣管插管連接，并將側(cè)孔夾閉。將信號(hào)線接CH2輸入座。將兩引導(dǎo)探針插入膈肌，接入CH1輸入座。依次選擇“輸入信號(hào)”、“CH1通道肌電”、“CH2通道呼吸”依次選擇設(shè)刺激器方式：“連續(xù)單刺激”、波寬“5ms”、延時(shí)“30ms”，強(qiáng)度6V，波間隔20ms3.實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3.1觀察正常的呼吸曲線 適當(dāng)調(diào)節(jié)氣管插管另一開(kāi)口大小，使呼吸曲線幅度適中，便于觀察。通道1可見(jiàn)膈肌活動(dòng)時(shí)的生物電現(xiàn)象。通道2可見(jiàn)呼吸曲線，上升相為呼氣，下降相為吸氣。3.2增加二氧化碳 當(dāng)呼吸平穩(wěn)后，將裝有碳酸鈣的三角瓶加入鹽酸后，迅速與套在氣管側(cè)管上的橡皮管相連，觀察呼吸效應(yīng)。3.3缺氧 當(dāng)呼吸恢復(fù)后，將缺氧裝置接氣管插管側(cè)管，觀察呼吸效應(yīng)。3.4增大無(wú)效腔（長(zhǎng)管呼吸） 當(dāng)呼吸恢復(fù)后，將一段長(zhǎng)橡皮管接氣管側(cè)管，觀察呼吸效應(yīng)。3.5注射乳酸 抽取3%乳酸1ml，于耳緣靜脈注射觀察呼吸效應(yīng)。3.6剪斷迷走神經(jīng) 剪斷一側(cè)迷走神經(jīng)時(shí)，觀察呼吸效應(yīng)，稍后，剪斷另一側(cè)迷神經(jīng)時(shí)，觀察呼吸效應(yīng)。【注意事項(xiàng)】1.氣管插管前注意止血并清理氣管內(nèi)容物。2.注射乳酸時(shí)不要刺破靜脈，以免乳酸外漏，引起動(dòng)物躁動(dòng)。3.氣管插管側(cè)管的夾子在實(shí)驗(yàn)全過(guò)程中不得更動(dòng)，以免影響振幅前后比較。【思考題】1. 迷走神經(jīng)在節(jié)律性呼吸中起什么作用？2. 如何排除本實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的干擾？實(shí)驗(yàn)四 神經(jīng)干動(dòng)作電位引導(dǎo)、興奮傳導(dǎo)速度的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】各種可興奮細(xì)胞處于興奮狀態(tài)時(shí)，都有一個(gè)共同的、最先出現(xiàn)的反應(yīng)動(dòng)作電位，即細(xì)胞膜受刺激后在原有靜息電位基礎(chǔ)上發(fā)生的一次膜兩側(cè)電位的快速倒轉(zhuǎn)和復(fù)原。動(dòng)作電位是細(xì)胞興奮的標(biāo)志，它只是在外加刺激達(dá)到一定強(qiáng)度時(shí)方可出現(xiàn)。該實(shí)驗(yàn)中神經(jīng)干動(dòng)作電位的引導(dǎo)采用的是細(xì)胞外記錄，當(dāng)沖動(dòng)傳來(lái)，神經(jīng)的興奮部位對(duì)于靜止部位來(lái)說(shuō)呈負(fù)電位，兩者之間出現(xiàn)的電位差可被擺放在神經(jīng)纖維外的記錄電極和參考電極引導(dǎo)出來(lái)，顯示在熒光屏上。由于本實(shí)驗(yàn)所用的坐骨神經(jīng)標(biāo)本包括許多種類(lèi)的神經(jīng)纖維成分，其各自的興奮閾值不同，傳導(dǎo)速度各異，所引導(dǎo)的動(dòng)作電位為各峰電位之總和，為復(fù)合動(dòng)作電位，因而其幅值在一定范圍內(nèi)隨刺激強(qiáng)度增加而增大。可興奮細(xì)胞任何一個(gè)部位的膜受刺激產(chǎn)生動(dòng)作電位后，該處已除極的膜電位和鄰近仍處于安靜極化狀態(tài)的膜電位之間出現(xiàn)一電位差并引起局部電流，流動(dòng)的結(jié)果是未興奮部位的膜內(nèi)電位升高，而膜外電位降低，膜除極達(dá)閾電位，鄰近的膜也產(chǎn)生動(dòng)作電位。動(dòng)作電位同樣依局部電流的形式沿神經(jīng)纖維傳導(dǎo)，其速度取決于神經(jīng)纖維的直徑、內(nèi)阻、有髓或無(wú)髓等。坐骨神經(jīng)為混合神經(jīng)，通過(guò)測(cè)定該復(fù)合動(dòng)作電位經(jīng)過(guò)的距離和時(shí)間，即可計(jì)算出神經(jīng)干興奮傳導(dǎo)的速度。【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?通過(guò)學(xué)習(xí)神經(jīng)干動(dòng)作電位細(xì)胞外引導(dǎo)記錄方法，了解電生理實(shí)驗(yàn)的基本方法和基本儀器的使用。2觀察神經(jīng)干動(dòng)作電位的波形、幅度、潛伏期，探討其機(jī)制。3了解神經(jīng)干動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的原理和方法。【實(shí)驗(yàn)材料】1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象: 蟾蜍(或蛙)。2.實(shí)驗(yàn)器材:MS4000U生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、蛙手術(shù)器械1套、神經(jīng)標(biāo)本屏蔽盒。3.藥 品:任氏液。【實(shí)驗(yàn)步驟及觀察項(xiàng)目】1.坐骨神經(jīng)腓神經(jīng)標(biāo)本制備1.1坐骨神經(jīng)-腓神經(jīng)所用動(dòng)物多為蟾蜍或蛙。(1)破壞腦脊髓 常用金屬探針插入枕骨大孔破壞腦、脊髓的方法處死。左手握蛙，用拇指按壓背部，食指按壓頭部前端，使頭前俯；用右手食指的指甲由頭端沿正中線向下滑動(dòng)，至耳鼓膜后緣連線前約3mm處可觸及一橫溝，其中點(diǎn)相當(dāng)于枕骨大孔位置(圖2-14)。用探針由此處垂直刺入枕骨大孔，折入顱腔，左右捻轉(zhuǎn)探針，以破壞腦組織；其后，將探針退至枕骨大孔，將針頭轉(zhuǎn)向后，刺入椎管，以破壞脊髓。此時(shí)，如蛙四肢松軟，呼吸消失，表明腦和脊髓已完全破壞。圖2-14 蛙腦脊髓破壞方法(2)除去軀干上部及內(nèi)臟 用粗剪刀在骶髂關(guān)節(jié)水平以上1cm處剪斷脊柱，左手捏住脊柱下方斷端，注意不要損傷腹側(cè)面兩側(cè)的坐骨神經(jīng)干，使蛙頭和內(nèi)臟自然下垂，右手持粗剪刀沿脊柱兩側(cè)剪除一切內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、部分脊柱及緊貼于脊柱兩鋇，J的坐骨神經(jīng)。(3)剝皮、分離兩腿 先剪去肛周一圈皮膚，然后一手捏住脊柱斷端，另一只手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝掉全部后肢皮膚。再用粗剪刀將脊柱沿正中線剪開(kāi)分為兩半，標(biāo)本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。洗凈手及用過(guò)的器械。(4)游離坐骨神經(jīng)腓神經(jīng) 將一腿標(biāo)本腹面朝上置于蛙板上，用玻璃分針沿脊柱旁游離坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處穿線結(jié)扎。再將標(biāo)本背面朝上放置，把梨狀肌及附近的結(jié)締組織剪去。循神經(jīng)溝找出坐骨神經(jīng)的大腿部分(圖2-15)，用玻璃分針仔細(xì)剝離，然后從脊柱根部將坐骨神經(jīng)剪斷，手持結(jié)扎線將神經(jīng)輕輕提起，剪斷坐骨神經(jīng)的所有分支，游離神經(jīng)至腘窩處。坐骨神經(jīng)在腘窩上方分為脛神經(jīng)和腓神經(jīng)兩支。在分叉下剪斷內(nèi)側(cè)的脛神經(jīng)。腓神經(jīng)于腓腸肌溝內(nèi)下行至足部；在踝關(guān)節(jié)水平用線結(jié)扎腓神經(jīng)，并剪斷。也可剪斷腓神經(jīng)而分離脛神經(jīng)，制成坐骨神經(jīng)脛神經(jīng)標(biāo)本。圖2-15 坐骨神經(jīng)標(biāo)本背面示意圖 圖2-16 坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備法標(biāo)本制成后，浸于任氏液中10-20分鐘，使其興奮性相對(duì)穩(wěn)定后即可用于實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)：制備坐骨神經(jīng)干標(biāo)本時(shí)應(yīng)作鈍性分離，避免過(guò)度牽拉或用金屬器械、手捏碰神經(jīng)干；制備標(biāo)本時(shí)應(yīng)隨時(shí)對(duì)神經(jīng)干滴加任氏液，以保持神經(jīng)濕潤(rùn)，并將暫不用的神經(jīng)置于任氏液培養(yǎng)皿中保存。2.儀器連接和調(diào)試2.1 神經(jīng)屏蔽盒的安裝：一對(duì)刺激電極相互盡量靠近，兩對(duì)記錄電極盡可能分開(kāi)，神經(jīng)槽的所有電極都需要用小刀刮亮除去銹蝕和氧化膜并使各電極處于同一水平，以免接觸不良。用鑷子夾住神經(jīng)標(biāo)本一端的結(jié)扎線，將標(biāo)本放置于電極上，方向是標(biāo)本的近中端接觸刺激電極，遠(yuǎn)中端接觸引導(dǎo)電極。2.2 連接：刺激電極與計(jì)算機(jī)程控刺激器的輸出端相連；距離刺激電極近的一對(duì)記錄電極與計(jì)算機(jī)一通道相連，距離刺激電極遠(yuǎn)的一對(duì)記錄電極與另一通道相連；兩對(duì)記錄電極引導(dǎo)的生物電信號(hào)輸入計(jì)算機(jī)電位通道接口，經(jīng)程控生物放大器放大，A/D轉(zhuǎn)換，計(jì)算機(jī)處理，顯示器顯示。（見(jiàn)圖2-25-1） R1R2 r1 r2 地 r3r4刺激輸出CH1CH2圖2-25-13.實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目打開(kāi)計(jì)算機(jī)電源開(kāi)關(guān)，點(diǎn)擊桌面上MS4000U生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件標(biāo)志，選擇實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目動(dòng)作電位，進(jìn)行觀察實(shí)驗(yàn)。 3.1 雙相動(dòng)作電位 用單脈沖電刺激，調(diào)節(jié)程控刺激器的波寬和幅度，逐漸增加刺激強(qiáng)度，觀察動(dòng)作電位的大小。掃描時(shí)，可在屏幕上見(jiàn)到一個(gè)雙相動(dòng)作電位，即前面一個(gè)大的向上的波，后面?zhèn)€向下的波(圖2-5-2)。每次顯示動(dòng)作電位的同時(shí)，系統(tǒng)可立即計(jì)算出動(dòng)作電位的幅值、波寬、潛伏期。圖2-25-23.2神經(jīng)干動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的測(cè)定 調(diào)節(jié)兩對(duì)記錄電極的位置使其盡量分開(kāi)，并與神經(jīng)干緊密接觸；調(diào)節(jié)刺激器強(qiáng)度以產(chǎn)生最大動(dòng)作電位；量出兩記錄電極之間的距離(d)；給神經(jīng)纖維單脈沖刺激，該刺激經(jīng)歷時(shí)間t1后，傳至距刺激電極較近的記錄電極r1，引導(dǎo)出第一個(gè)動(dòng)作電位，同樣，該刺激經(jīng)歷時(shí)間t2后，傳至距刺激電極較遠(yuǎn)的記錄電極r2，引導(dǎo)出第二個(gè)動(dòng)作電位；分別測(cè)出刺激傳到引導(dǎo)電極r1（近)和引導(dǎo)電極r2 (遠(yuǎn))的時(shí)間(潛伏期t1和t2)，二者之差(t2-t1)就是動(dòng)作電位傳導(dǎo)距離(d)所消耗的時(shí)間，所以，傳導(dǎo)速度v=d/(t2-t1)，單位是m/s。【注意事項(xiàng)】1神經(jīng)標(biāo)本盡量分離長(zhǎng)，分離干凈，但不能損傷神經(jīng)干。2要避免標(biāo)本干燥，但同時(shí)注意電極間不要有過(guò)多的任氏液，以免造成短路。1.常用生理溶液的成分及配制方法各種生理鹽溶液的用途： 生理鹽水：即與血清等滲之NaCl溶液，在冷血?jiǎng)游飸?yīng)用0.6%-0.65%，在溫血?jiǎng)游飸?yīng)用0.85%-0.9%。 任氏溶液：用于青蛙及其他冷血?jiǎng)游铩?樂(lè)氏溶液：用于溫血?jiǎng)游镏呐K、子宮及其它離體臟器。用作灌注液者須于用前通入氧氣泡15分鐘。低鈣樂(lè)氏液（含無(wú)水氯化鈣0.05g）用于離體小腸及豚鼠的離體支氣管灌注。臺(tái)氏溶液：用于溫血?jiǎng)游镏x體小腸。 實(shí)驗(yàn)四 蛙心起博點(diǎn)【實(shí)驗(yàn)原理】哺乳類(lèi)動(dòng)的心臟特殊傳導(dǎo)系統(tǒng)都具有自動(dòng)節(jié)律性，但各部分的自律性高低不同，以竇房結(jié)的自律性為最高，所以竇房結(jié)被稱(chēng)為哺乳動(dòng)物的正常起搏點(diǎn)。蛙和其它兩棲類(lèi)動(dòng)物的正常起搏點(diǎn)是靜脈竇。正常情況下，蛙靜脈竇起博細(xì)胞發(fā)出的沖動(dòng)通過(guò)特殊傳導(dǎo)系統(tǒng)依次傳到心房和心室引起興奮。【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1.學(xué)習(xí)和掌握蛙類(lèi)手術(shù)的操作過(guò)程。 2.觀察蛙心起博點(diǎn)及各部分自律性的高低。【實(shí)驗(yàn)材料】1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 蟾蜍或蛙。2.實(shí)驗(yàn)器材 蛙類(lèi)手術(shù)器械、計(jì)時(shí)器等。3.藥 品 任氏液。【實(shí)驗(yàn)步驟及觀察項(xiàng)目】1. 取蟾蜍一只，用探針搗毀其大腦脊髓，將其仰臥固定于蛙板上，用鑷子提起腹部皮膚，剪一小口，然后向左右兩側(cè)鎖