第一章 基因工程第一節(jié) 基因工程概述基因工程的誕生和發(fā)展和基因工程的工具學(xué)習(xí)目標簡述基因工程的概念含義簡述基因工程誕生歷程認同基因工程的誕生和發(fā)展離不開理論突破和技術(shù)創(chuàng)新簡述基因工程的原理說出DNA重組技術(shù)的基本工具及其作用、特點課前導(dǎo)學(xué)一、基因工程的誕生和發(fā)展1理論基礎(chǔ)(1)艾弗里：證明了 。(2)沃森和克里克：闡明了 。(3)尼倫貝格等破譯了。2工具基礎(chǔ)(1)酶： 和 、逆轉(zhuǎn)錄酶。(2)載體：等。3發(fā)展(1)19731976年為。 (2)19771981年為。(3)1982年以后為 。4誕生：科恩等將兩種不同來源的DNA分子進行，并首次實現(xiàn)了在大腸桿菌中的表達，創(chuàng)立了改造生物的新技術(shù)基因工程。二、基因工程的概念方法在體外通過人工 和 等方法原理對生物的基因進行改造和 操作水平 水平過程包括基因的 、_轉(zhuǎn)移及在受體細胞內(nèi)的 和 等。.目的獲得人類需要的 。三、基因工程的工具 1限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”(1)功能：只能特定的核苷酸序列，并在合適的反應(yīng)條件下使每條鏈特定部位的 之間的 斷開，從而切割DNA分子。(2)作用結(jié)果產(chǎn)生黏性末端：通過錯位切，在兩條鏈的部位切割形成。產(chǎn)生平口末端：通過平切，在兩條鏈的部位切割形成。2DNA連接酶“分子針線”(1)功能：把DNA分子這把“梯子”的扶手連接起來。(2)結(jié)果：用限制性核酸內(nèi)切酶切割質(zhì)粒和外源DNA分子，并通過的連接，形成_分子。3載體運載工具(1)功能：將導(dǎo)入受體細胞。(2)種類：質(zhì)粒、以及一些。(3)質(zhì)粒：來自于細胞中的一種很小的分子，是最早應(yīng)用的載體。質(zhì)疑探究1切斷和形成磷酸二酯鍵的酶分別有哪些？2原核生物中限制酶有何意義？細菌是如何防止自身DNA被限制酶降解？3在基因工程中，為什么要用同一種限制性核酸內(nèi)切酶（如EcoR）切割兩種DNA分子呢？P12實踐中的圖示切割后的片段可以連接成幾種DNA分子？4從結(jié)構(gòu)上分析為什么不同生物的DNA能夠重組？5不同限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端一定不同嗎？6要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？7作為載體應(yīng)具備什么條件？8天然的質(zhì)粒都可以直接用做基因工程載體嗎？為什么？例題精講 1最早創(chuàng)立基因工程技術(shù)的科學(xué)家是 A沃森和克里克 B帕米特 C科恩 D穆里斯2科學(xué)家們經(jīng)過多年的努力，創(chuàng)立了一種新興生物技術(shù)基因工程，實施該工程的最終目的是 ( )A定向提取生物體的DNA分子 B定向地對DNA分子進行人工“剪切”C在生物體外對DNA分子進行改造 D定向地改造生物的遺傳性狀3下列關(guān)于限制酶的說法正確的是 A限制酶廣泛存在于各種生物中，但微生物中很少B一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列C不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端D限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵4下圖所示是限制酶切割某DNA分子的過程，從圖中可知，該限制酶能識別的堿基序列及切點是 ACTTAAG，切點在C和T之間BCTTAAG，切點在G和A之間CGAATTC，切點在G和A之間DGAATTC，切點在C和T之間5在基因工程中，科學(xué)家所用的“剪刀”、“針線”和“運載體”分別是指 A大腸桿菌病毒、質(zhì)粒、DNA連接酶B噬菌體、質(zhì)粒、DNA連接酶C限制性核酸內(nèi)切酶、RNA連接酶、質(zhì)粒D限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、質(zhì)粒6作為基因的運輸工具載體，必須具備的條件及理由是 A能夠在宿主細胞中穩(wěn)定地保存下來并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因B具有多個限制酶切點，以便于目的基因的表達C具有某些標記基因，以便為目的基因的表達提供條件D能夠在宿主細胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存，以便于進行篩選7下圖為DNA分子的切割和連接過程。 (1)EcoRI是一種酶，其識別序列是，切割位點是與之間的鍵。切割結(jié)果產(chǎn)生的DNA片段末端形式為。(2)不同來源DNA片段結(jié)合，在這里需要的酶應(yīng)是酶，此酶的作用是在之間形成鍵，而起“縫合”作用的。還有一種連接平末端的連接酶是。反饋矯正1在基因工程中，切割質(zhì)粒和含有目的基因的DNA片段，需要使用 ( )A同種限制性核酸內(nèi)切酶 B兩種限制性核酸內(nèi)切酶C同種DNA連接酶 D兩種DNA連接酶2下列黏性末端中，屬于同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割而成的是 ( )A B C D3要使目的基因與對應(yīng)的載體重組，所需的兩種酶是 ( )(1)限制酶(2)連接酶(3)解旋酶(4)還原酶A、(1)(2)(3) B、(1)(2)(4) C、(1)(2) D、(1)(3)4在受體細胞中能檢測出目的基因是因為 ( )A、目的基因上有標記 B、質(zhì)粒具有某些標記基因 C、重組質(zhì)粒能夠復(fù)制 D以上都不正確5質(zhì)粒是基因工程最常見的載體，它的主要特點是 ( )能自主復(fù)制不能自主復(fù)制結(jié)構(gòu)很小是蛋白質(zhì)是環(huán)狀RNA是環(huán)狀DNA能“友好”地“借居”A、 B、 C D6下列各項中，a、b、c、d代表的結(jié)構(gòu)正確的是 （ ） Aa一質(zhì)粒RNA Bb一DNA連接酶 Cc一限制性內(nèi)切酶 Dd-外源基因7下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是 A B C D8限制酶是一群核酸切割酶，可辨識并切割DNA 分子上特定的核苷酸堿基序列。下圖為四種限制酶 BamHI , EcoRI , Hind以及 BgI的辨識序列： （ ） 箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位，其中哪兩種限制酶所切割出來的DNA片段末端，可以互補結(jié)合？其正確的末端互補序列為何？ ABamHI和BgI；末端互補序列GATC BBamHI和EcoRI；末端互補序列AATT CBamHI和Hind ；末端互補序列GATC DEcoRI和Hind ；末端互補序列AATT遷移創(chuàng)新1基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識別序列和切點是GGATCC，限制酶的識別序列和切點是GATC。根據(jù)圖示,判斷下列操作正確的是 （ ）A.質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割B.質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割C.目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割 D.目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割2下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圈l、圈2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答下列問 （1）一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma 切割前后，分別含有 個游離的磷酸基團。 （2）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的Sma酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越 。 （3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用Srna 切割，原因是 。 （4）與只使用EcoR I相比較，使用BamH 和Hind 兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止 。 （5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。 （7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。第一章 基因工程第一節(jié) 基因工程概述基因工程的誕生和發(fā)展和基因工程的工具答案課前導(dǎo)學(xué)：一、基因工程的誕生和發(fā)展1DNA是遺傳物質(zhì) DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu) 遺傳密碼2限制性核酸內(nèi)切酶 DNA連接酶 質(zhì)粒3開始期 發(fā)展期 迅猛發(fā)展和實際運用期4體外重組 定向二、基因工程的概念剪切 拼接 修飾 DNA分子 分離 復(fù)制 表達 基因產(chǎn)物的技術(shù)三、基因工程的工具識別 2個核苷酸 磷酸二酯鍵 不同 相同 斷口處 同種 DNA連接酶 重組DNA 外源基因 噬菌體 動植物病毒 細菌 環(huán)狀DNA 遺傳標記基因 目的基因插入位點 低分子量質(zhì)疑探究例題精講 1-6 C D B C D A 7. (1)限制 GAATTC G A 磷酸二酯鍵 黏性末端 (2) Ecoli DNA連接酶 互補的黏性末端斷口 磷酸二酯鍵 T4DNA連接酶反饋矯正 A B C B C D C A遷移創(chuàng)新 1。 A 2（1）0、2（2）高（3）Sma會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化（5）DNA連接（6）鑒別和篩選含有目的基因的細胞（7）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)當(dāng)我被上帝造出來時，上帝問我想在人間當(dāng)一個怎樣的人，我不假思索的說，我要做一個偉大的世人皆知的人。于是，我降臨在了人間。我出生在一個官僚知識分子之家，父親在朝中做官，精讀詩書，母親知書答禮，溫柔體貼，父母給我去了一個好聽的名字：李清照。小時侯，受父母影響的我飽讀詩書，聰明伶俐，在朝中享有“神童”的稱號。小時候的我天真活潑，才思敏捷，小河畔，花叢邊撒滿了我的詩我的笑，無可置疑，小時侯的我快樂無慮。“興盡晚回舟，誤入藕花深處。爭渡，爭渡，驚起一灘鷗鷺。”青春的我如同一只小鳥，自由自在，沒有約束，少女純凈的心靈常在朝陽小，流水也被自然洗禮，纖細的手指拈一束花，輕拋入水，隨波蕩漾，發(fā)髻上沾著晶瑩的露水，雙腳任水流輕撫。身影輕飄而過，留下一陣清風(fēng)?？墒峭砟甑奈覅s生活在一片黑暗之中，家庭的衰敗，社會的改變，消磨著我那柔弱的心。我?guī)缀鯇ι罱^望，每天在痛苦中消磨時光，一切都好象是灰暗的。“尋尋覓覓冷冷清清凄凄慘慘戚戚”這千古疊詞句就是我當(dāng)時心情的寫照。最后，香消玉殞，我在痛苦和哀怨中凄涼的死去。在天堂里，我又見到了上帝。上帝問我過的怎么樣，我搖搖頭又點點頭，我的一生有歡樂也有坎坷，有笑聲也有淚水，有鼎盛也有衰落。我始終無法客觀的評價我的一生。我原以為做一個著名的人，一生應(yīng)該是被歡樂榮譽所包圍，可我發(fā)現(xiàn)我錯了。于是在下一輪回中，我選擇做一個平凡的人。我來到人間，我是一個平凡的人，我既不著名也不出眾，但我擁有一切的幸福：我有溫馨的家，我有可親可愛的同學(xué)和老師，我每天平凡而快樂的活著，這就夠了。天兒藍藍風(fēng)兒輕輕，暖和的春風(fēng)帶著春的氣息吹進明亮的教室，我坐在教室的窗前，望著我擁有的一切，我甜甜的笑了。我拿起手中的筆，不禁想起曾經(jīng)作詩的李清照，我雖然沒有橫溢的才華，但我還是拿起手中的筆，用最樸實的語言，寫下了一時的感受：人生并不總是完美的，每個人都會有不如意的地方。這就需要我們靜下心來閱讀自己的人生，體會其中無盡的快樂和與眾不同。“富不讀書富不久，窮不讀書終究窮?！睘槭裁磸墓诺浇穸寄敲纯粗赜袑W(xué)識之人？那是因為有學(xué)識之人可以為社會做出更大的貢獻。那時因為讀書能給人帶來快樂。自從看了丑小鴨這篇童話之后，我變了，變得開朗起來，變得樂意同別人交往，變得自信了因為我知道：即使現(xiàn)在我是只“丑小鴨”，但只要有自信，總有一天我會變成“白天鵝”的，而且會是一只世界上最美麗的“白天鵝”我讀完了這篇美麗的童話故事，深深被丑小鴨的自信和樂觀所折服，并把故事講給了外婆聽，外婆也對童話帶給我們的深刻道理而驚訝不已。還吵著鬧著多看幾本名著。于是我給外婆又買了幾本名著故事，她起先自己讀，讀到不認識的字我就告訴她，如果這一面生字較多，我就讀給她聽整個一面。漸漸的，自己的語文閱讀能力也提高了不少，與此同時我也發(fā)現(xiàn)一個人讀書的樂趣遠不及兩個人讀的樂趣大，而兩個人讀書的樂趣遠不及全家一起讀的樂趣大。于是，我便發(fā)展“業(yè)務(wù)”帶動全家一起讀書現(xiàn)在，每每遇到好書大家也不分男女老少都一擁而上，爭先恐后“搶書”，當(dāng)我說起我最小應(yīng)該讓我的時候，卻沒有人搭理我。最后還把書給撕壞了，我生氣地哭了，媽媽一邊安慰我一邊對外婆說：“孩子小，應(yīng)該讓著點?！蓖馄艆s不服氣的說：“我這一把年紀的了，怎么沒人讓我呀？”大家人你一言我一語，誰也不肯相讓讀書讓我明白了善惡美丑、悲歡離合，讀一本好書，猶如同智者談心、談理想，教你辨別善惡，教你弘揚正義。讀一本好書，如品一杯香茶，余香繚繞。讀一本好書，能使人心靈得到凈化。書是我的老師，把知識傳遞給了我；書是我的伙伴，跟我訴說心里話；書是一把鑰匙，給我敞開了知識的大門；書更是一艘不會沉的船，引領(lǐng)我航行在人生的長河中。其實讀書的真真樂趣也就在于此處，不是一個人悶頭苦讀書；也不是讀到好處不與他人分享，獨自品位；更不是一個人如癡如醉地沉浸在書的海洋中不能自拔。而是懂得與朋友，家人一起分享其中的樂趣。這才是讀書真正之樂趣呢！這所有的一切，不正是我從書中受到的教益嗎？我閱讀，故我美麗；我思考，故我存在。我從內(nèi)心深處真切地感到：我從讀書中受到了教益。當(dāng)看見有些同學(xué)寧可買玩具亦不肯買書時，我便想到培根所說的話：“世界上最庸俗的人是不讀書的人，最吝嗇的人是不買書的人，最可憐的人是與書無緣的人?！痹S許多多的作家、偉人都十分喜歡看書，例如毛澤東主席，他半邊床上都是書，一讀起書來便進入忘我的境界。書是我生活中的好朋友，是我人生道路上的航標，讀書，讀好書，是我無怨無悔的追求。下午13：0017：00B實行不定時工作制的員工，在保證完成甲方工作任務(wù)情況下，經(jīng)公司同意,可自行安排工作和休息時間。312打卡制度3.1.2.1公司實行上、下班指紋錄入打卡制度。全體員工都必須自覺遵守工作時間，實行不定時工作制的員工不必打卡。3.1.2.2打卡次數(shù)：一日兩次，即早上上班打卡一次，下午下班打卡一次。3.1.2.3打卡時間：打卡時間為上班到崗時間和下班離崗時間； 3.1.2.4因公外出不能打卡：因公外出不能打卡應(yīng)填寫外勤登記表,注明外出日期、事由、外勤起止時間。因公外出需事先申請，如因特殊情況不能事先申請，應(yīng)在事畢到崗當(dāng)日完成申請、審批手續(xù)，否則按曠工處理。因停電、卡鐘（工卡）故障未打卡的員工，上班前、下班后要及時到部門考勤員處填寫未打卡補簽申請表，由直接主管簽字證明當(dāng)日的出勤狀況，報部門經(jīng)理、人力資源部批準后，月底由部門考勤員據(jù)此上報考勤。上述情況考勤由各部門或分公司和項目文員協(xié)助人力資源部進行管理。3.1.2.5手工考勤制度3.1.2.6手工考勤制申請：由于工作性質(zhì)，員工無法正常打卡（如外圍人員、出差），可由各部門提出人員名單，經(jīng)主管副總批準后，報人力資源部審批備案。3.1.2.7參與手工考勤的員工，需由其主管部門的部門考勤員(文員)或部門指定人員進行考勤管理，并于每月26日前向人力資源部遞交考勤報表。3.1.2.8參與手工考勤的員工如有請假情況發(fā)生，應(yīng)遵守相關(guān)請、休假制度，如實填報相關(guān)表單。3.1.2.9 外派員工在外派工作期間的考勤,需在外派公司打卡記錄;如遇中途出差,持出差證明,出差期間的考勤在出差地所在公司打卡記錄;3.2加班管理3.2.1定義加班是指員工在節(jié)假日或公司規(guī)定的休息日仍照常工作的情況。A現(xiàn)場管理人員和勞務(wù)人員的加班應(yīng)嚴格控制，各部門應(yīng)按月工時標準，合理安排工作班次。部門經(jīng)理要嚴格審批員工排班表，保證員工有效工時達到要求。凡是達到月工時標準的，應(yīng)扣減員工本人的存休或工資；對超出月工時標準的，應(yīng)說明理由，報主管副總和人力資源部審批。 B因員工月薪工資中的補貼已包括延時工作補貼，所以延時工作在4小時（不含）以下的，不再另計加班工資。因工作需要，一般員工延時工作4小時至8小時可申報加班半天，超過8小時可申報加班1天。對主管(含)以上管理人員，一般情況下延時工作不計加班，因特殊情況經(jīng)總經(jīng)理以上領(lǐng)導(dǎo)批準的延時工作，可按以上標準計加班。3.2.2.2員工加班應(yīng)提前申請，事先填寫加班申請表，因無法確定加班工時的，應(yīng)在本次加班完成后3個工作日內(nèi)補填加班申請表。加班申請表經(jīng)部門經(jīng)理同意，主管副總經(jīng)理審核報總經(jīng)理批準后有效。加班申請表必須事前當(dāng)月內(nèi)上報有效，如遇特殊情況，也必須在一周內(nèi)上報至總經(jīng)理批準。如未履行上述程序，視為乙方自愿加班。3.2.2.3員工加班，也應(yīng)按規(guī)定打卡，沒有打卡記錄的加班，公司不予承認；有打卡記錄但無公司總經(jīng)理批準的加班，公司不予承認加班。3.2.2.4原則上，參加公司組織的各種培訓(xùn)、集體活動不計加班。3.2.2.5加班工資的補償：員工在排班休息日的加班，可以以倒休形式安排補休。原則上，員工加班以倒休形式補休的，公司將根據(jù)工作需要統(tǒng)一安排在春節(jié)前后補休。加班可按1：1的比例沖抵病、事假。3.2.3加班的申請、審批、確認流程3.2.3.1加班申請表在各部門文員處領(lǐng)取，加班統(tǒng)計周期為上月26日至本月25日。3.2.3.2員工加班也要按規(guī)定打卡，沒有打卡記錄的加班，公司不予承認。各部門的考勤員(文員)負責(zé)加班申請表的保管及加班申報。員工加班應(yīng)提前申請，事先填寫加班申請表加班前到部門考勤員(文員)處領(lǐng)取加班申請表，加班申請表經(jīng)項目管理中心或部門經(jīng)理同意，主管副總審核，總經(jīng)理簽字批準后有效。填寫并履行完審批手續(xù)后交由部門考勤員(文員)保管。3.2.3.3部門考勤員（文員）負責(zé)檢查、復(fù)核確認考勤記錄的真實有效性并在每月27日匯總交人力資源部，逾期未交的加班記錄公司不予承認。下午13：0017：00度。全體員工都必須自覺遵守工作時間，實行不定時工作制的員工不必打卡。3.1.2.2打卡次數(shù)：一日兩次，即早上上班打卡一次，下午下班打卡一次。3.1.2.3打卡時間：打卡時間為上班到崗時間和下班離崗時間； 3.1.2.4因公外出不能打卡：因公外出不能打卡應(yīng)填寫外勤登記表,注明外出日期、事由、外勤起止時間。因公外出需事先申請，如因特殊情況不能事先申請，應(yīng)在事畢到崗當(dāng)日完成申請、審批手續(xù)，否則按曠工處理。因停電、卡鐘（工卡）故障未打卡的員工，上班前、下班后要及時到部門考勤員處填寫未打卡補簽申請表，由直接主管簽字證明當(dāng)日的出勤狀況，報部門經(jīng)理、人力資源部批準后，月底由部門考勤員據(jù)此上報考勤。上述情況考勤由各部門或分公司和項目文員協(xié)助人力資源部進行管理。3.1.2.5手工考勤制度3.1.2.6手工考勤制申請：由于工作性質(zhì)，員工無法正常打卡（如外圍人員、出差），可由各部門提出人員名單，經(jīng)主管副總批準后，報人力資源部審批備案。3.1.2.7參與手工考勤的員工，需由其主管部門的部門考勤員(文員)或部門指定人員進行考勤管理，并于每月26日前向人力資源部遞交考勤報表。3.1.2.8參與手工考勤的員工如有請假情況發(fā)生，應(yīng)遵守相關(guān)請、休假制度，如實填報相關(guān)表單。3.1.2.9 外派員工在外派工作期間的考勤,需在外派公司打卡記錄;如遇中途出差,持出差證明,出差期間的考勤在出差地所在公司打卡記錄;3.2加班管理3.2.1定義加班是指員工在節(jié)假日或公司規(guī)定的休息日仍照常工作的情況。A現(xiàn)場管理人員和勞務(wù)人員的加班應(yīng)嚴格控制，各部門應(yīng)按月工時標準，合理安排工作班次。部門經(jīng)理要嚴格審批員工排班表，保證員工有效工時達到要求