第2節基因工程的操作程序 ii 1 目的基因的獲取 2 基因表達載體的構建 3 將目的基因導入受體細胞 4 目的基因的檢測與鑒定 一 將目的基因導入受體細胞 一 轉化 目的基因進入 內 并且在受體細胞內維持 和 的過程 受體細胞 穩定 表達 將目的基因導入受體細胞的原理 借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑 自學課本 回答 1 將目的基因導入植物細胞常采用的方法是什么 2 農桿菌轉化法的過程是怎樣的 3 將目的基因導入動物細胞常用的方法 受體細胞分別是什么 4 早期基因工程都用原核細胞作為受體細胞 這是為什么 5 目的基因導入微生物細胞常用的方法是什么 4 二 方法 將目的基因導入植物細胞 將目的基因導入動物細胞 將目的基因導入微生物細胞 農桿菌轉化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射法 氯化鈣法 感受態細胞 農桿菌 植物的受傷組織會產生一些糖類和酚類物質吸引根瘤農桿菌向受傷組織集中 使植物形成腫瘤 此類物質主要在雙子葉植物細胞壁中合成 通常不存在于單子葉植物中 農桿菌易感染雙子葉植物和裸子植物 對大多數單子葉植物沒有感染能力 1 將目的基因導入植物細胞 1 農桿菌轉化法 ti質粒上的t dna可以轉移到受體細胞 并整合到受體細胞染色體的dna上 原理 轉化過程 ti質粒目的基因 構建 表達載體 植物細胞 植物細胞染色dna 新性狀 農桿菌 2 基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法 是利用壓縮氣體產生的動力 將包裹在金屬顆粒表面的表達載體dna打入受體細胞中 使目的基因與其整合并表達的方法 3 花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發后 花粉管要穿過花柱直通胚囊 花粉管通道法就是在植物受粉后 花粉形成的花粉管還未愈合前 剪去柱頭 然后 滴加dna 含目的基因 使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞 2 將目的基因導入動物細胞 1 方法 顯微注射法 將基因表達載體提純 用顯微儀注射到受精卵中 思考 為什么要用受精卵而不用體細胞 2 操作程序 提純含目的基因表達載體 受精卵 顯微注射 移植到子宮 新性狀動物 早期胚胎培養 常用法 cacl法 ca2 增加細菌細胞的通透性 常用菌 大腸桿菌 微生物作受體細胞原因 繁殖快 多為單細胞 遺傳物質相對少 過程 ca2 處理大腸桿菌 感受態細胞 表達載體與感受態細胞混合 感受態細胞吸收dna 3 將目的基因導入微生物細胞 細菌能夠吸收dna的狀態 受精卵體細胞 受精卵 細胞 個體 農桿菌轉化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射技術 用ca2 處理成感受態細胞 小結 二 目的基因的檢測與鑒定 1 分子檢測 檢測轉基因生物染色體的dna上是否插入了目的基因 檢測目的基因是否轉錄出了mrna 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質 方法 方法 方法 dna分子雜交 分子雜交 抗原 抗體雜交 如果顯示出雜交帶 就表明待測樣品含有目的基因 dna分子雜交 提取 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質 方法 抗原 抗體雜交 bt毒素蛋白 將bt毒蛋白注射小鼠體內 從小鼠血管抽出血液分離出抗bt毒素的抗體 抗體 蛋白質 出現雜交帶 脫分化 組織培養 2 個體鑒定 抗蟲鑒定 抗病鑒定 活性鑒定等 若不能表達 要對抗蟲基因再進行修飾 怎樣檢驗抗蟲基因在棉細胞內是否表達呢 沒有抗蟲基因的棉植株 有抗蟲基因的棉植株 棉鈴蟲 蟲都沒有死 對照組蟲正常 實驗中蟲被殺死 抗蟲基因沒有表達 抗蟲基因表達 1 目的基因的獲取 2 基因表達載體的構建 3 將目的基因導入受體細胞 4 目的基因的檢測與鑒定 基因工程基本操作的四個步驟 有了目的基因 我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性 使目的基因在受體細胞中穩定存在 并可進行遺傳 表達和發揮作用 載體進入受體細胞穩定表達 才能實現一種生物的基因在另一種生物中的轉化 才能確定目的基因是否真正在受體細胞中穩定遺傳和正確表達 胰島素是治療糖尿病的特效藥 長期以來只能依靠從豬 牛