M蛋白的檢測與鑒定一、M蛋白的基礎知識M蛋白是漿細胞或B 淋巴細胞單克隆大量增殖時所產生的一種異常免疫球蛋白，其氨基酸組成及排列順序十分均一，空間構象、電泳特征也完全相同，本質為免疫球蛋白或其片段（輕鏈、重鏈等）。由于它產生于單一克隆（monoclone），又常出現于多發性骨髓瘤（multiple myeloma）、巨球蛋白血癥（macroglobulinemia）、惡性淋巴瘤（malignantlym phoma） 病人的血或尿中，故稱M 蛋白。這些M 蛋白大多無抗體活性，所以又稱為副蛋白（paraprotein）。M 蛋白血癥可分為惡性與意義不明的兩大類。惡性M 蛋白血癥多見于多發性骨髓瘤（包括輕鏈病）、巨球蛋白血癥、重鏈病、7SIg M 病（Solomen Konkel 病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C 端基因缺陷） 等。意義不明的M 蛋白血癥（monoclonal gammopathyof undetermined significance ，M G US） 又分為兩種，一種是與其他惡性腫瘤（如惡性淋巴瘤） 伴發者，另一種即所謂良性M 蛋白血癥。M 蛋白的檢測方法主要有瓊脂或瓊脂糖電泳、免疫電泳、免疫固定電泳、選擇免疫電泳等。二、M蛋白的鑒定1多發性骨髓瘤與巨球蛋白血癥時的M 蛋白檢測和鑒定（1）血清總蛋白定量。90 的患者血清總蛋白含量升高（70 的患者100gL），約10的患者正常或甚至偏低（如輕鏈病時）。（2）血清蛋白醋纖膜或瓊脂糖電泳。M 蛋白在電泳時出現典型的單株峰（亦稱M區帶），特點是區帶窄而濃，掃描時呈現尖高峰，在區高比寬2，在區1。此M區帶可因Ig的不同而出現在在2的任何區域。M蛋白增殖的另一特點是其他各區帶明顯減少，顯示圖像較簡單。有時有的患者血中M蛋白并不高，這是由突變細胞的Ig分泌能力決定的。這種病人的血清在電泳時M峰可不明顯，易被其他蛋白掩蓋，需采用稀釋血清成應用其他敏感方法如免疫固定電泳來檢測。（3）血清Ig定量。一般M蛋白所屬Ig含量均顯著增高，其他類Ig則正常或顯著減低。（4）免疫電泳。 正常人血清免疫電泳結果：可分辨出20 多種蛋白成分。在陽極端有船形很濃的沉淀線為白蛋白。通常Ig組分靠陰極端，最靠近加樣孔者為Ig M，依次為IgA、IgG，三者成平滑的連續沉淀線。 多發骨髓瘤：多發性骨髓瘤分IgG、IgA、Ig M、IgI）和IgE5 種，IgG 和IgA 又分亞類，所有Ig的輕鏈又分兩個型。因此，免疫電泳時變形沉淀線的位置隨各分子的電泳區帶不同而異，從慢2區皆可出現。IgG 1 多出現在慢區，IgG 4 在2區。M 蛋白與相應的抗重鏈血清、抗輕鏈血清形成遷移范圍十分局限的濃密的沉淀弧。由于此種病人血清中Ig 含量甚高，免疫擴散時可出現抗原絕對過剩而不出現沉淀線，此時需稀釋血清重做，往往可獲得滿意結果。 巨球蛋白血癥：由于IgM 分子大量增殖所致。在免疫電泳時，常常出現以下特征：一是沉淀線明顯變形。正常情況下，IgM形成短小沉淀線，不易看到變形。當IgM大量出現時，則會使整個IgM沉淀線變形。二是抗原孔周圍和電泳縱軸出現團塊狀沉淀。三是電泳時IgM組分無遷移，這多是Ig M分子聚合，電泳不移動所致。（5）尿本周蛋白檢測。 定性檢測： 用熱沉淀法和磺基水楊酸法。 免疫電泳法：用待檢尿濃縮后進行免疫電泳，大多數多發性骨髓瘤病人和輕鏈病患者，僅出現一條致密的弓形彎曲的沉淀線。本法6080的骨髓瘤病人和幾乎全部輕鏈病病人可檢出尿本周蛋白。 輕鏈白蛋白戊二醛交聯免疫電泳法：多發性骨髓瘤、華氏巨球蛋白血癥及輕鏈病可呈陽性，正常人陰性。本法尿本周蛋白檢出率為100，假陽性4，尿中含有200gml 時即可出現陽性結果。2重鏈病時M 蛋白檢測與鑒定與多發性骨髓瘤相同，免疫電泳時由于重鏈分子較Ig 分子小，故遷移率快，電泳位置較靠陽極側（）。但重鏈病一般需選擇免疫電泳證實。37SIg M 病時M 蛋白的檢測與鑒定一般Ig M 為五聚體，沉降系數為19S ，而7S IgM患者的IgM為單體，沉降系數為7S 。證明7S IgM 有兩種方法：一種是在測定Ig M 總量后，將被測血清12 ml 過Sepharose 6B柱，再根據洗脫峰圖用面積儀測出7S Ig M占總IgM的百分比，與Ig M總量換算即得7S IgM的絕對值。另一方法即為植物血凝素（PHA）選擇電泳。此法原理是五聚體Ig M可與PHA 結合形成沉淀，而單體IgM不與PHA結合。在瓊脂膠中加入PHA，后進行電泳，五聚體IgM 被P H A 所阻留，而7S Ig M 繼續向陽極泳動，并可與隨后加至抗體槽中的Ig M 抗血清反應，形成單一沉淀弧。4半分子病時M 蛋白檢測與鑒定所謂半分子病（halfmolecule）是指此種M 蛋白由一條重鍵和一條輕鏈組成，分子量是正常Ig 分子的12 或12（因半分子病肽鏈往往有部分缺失）。至今報告過IgG 和IgA 的半分子病。除上述檢測方法外，尚須對“半分子”進行特殊鑒定。方法有： 免疫電泳法鑒定半分子M 蛋白的遷移率。電泳時發現具有IgG 或IgA 的電泳特征而遷移率明顯快于二者時（泳向正極可達2 區），應注意有無本病的可能。 十二烷基硫酸鈉（SDS）聚丙烯酰胺凝膠電泳，推算M 蛋白的分子量。 超速離心分析， 測定M 蛋白的沉淀系數。 Fc抗原決定簇的確定。用相應抗重鏈血清對比患者與正常人相應Ig 的區別。5測定免疫球蛋白輕鏈型篩選M 蛋白正常人有五類免疫球蛋白，其輕鏈有兩種型，即型或型。對于每個Ig分子而言，其輕鏈只有一種，不是就是。但對一個體的Ig 分子而言，則有和兩種鏈型，且其比例基本上是固定的，即約為21 。任何原因引起的Ig 分子多克隆增殖，如慢性肝病，系統性紅斑狼瘡、某些惡性腫瘤時，其值不變。而M 蛋白發生時，是單克隆細胞的惡性增殖，所以在Ig 量明顯增高的同時，其比值必然發生改變， 即一種輕鏈型的Ig 分子增多。利用適當的方法，分別定量測定血清中、型Ig 分子的量，即可特異而簡便地診斷M 蛋白病。測定方法有兩種，一是用濁度測定技術分別測定含或的Ig 的量，一種是用單相免疫擴散法測定型、型Ig 的含量及比值。單擴法是在瓊脂凝膠板上打孔，排列呈梅花型，中心孔注入抗、抗混合抗體，周圍孔放正常人及患者待測血清，然后進行擴散。正常血清與抗血清之間可見對稱雙線。若患者的輕鏈Ig 升高，其沉淀線向內移，而線有不同程度向外移，雙環間距增寬。若輕鏈Ig 含量增高，則表現為環距減小、融合或跨環現象。此外，該法對IgG、IgA、IgD 類型的輕鏈診斷準確率較高，而對Ig M型診斷不夠理想，其原因是Ig M分子大，擴散遷移率小，同時五聚體立體結構也影響了抗輕