梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）1.原理梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）是用超聲裂解梅毒螺旋體抗原致敏明膠粒子，致敏粒子與待檢血清（漿）中的梅毒螺旋體抗體結合，產生肉眼可見的顆粒凝集。2. 方法2.1儀器耗材：1) TPPA檢測試劑盒2) 移液器3) 保濕盒2.2檢測流程：1) 試劑準備：試驗前30分鐘將待檢標本和試劑從冰箱中取出，恢復至室溫。2) 加稀釋液：每份樣本作4孔，用移液器將血清稀釋液滴入微量反應板第1孔（100l），從第2孔-第4孔各滴25l。3) 樣本稀釋：用移液器取待檢血清25l置第1孔中，然后以2n 的方式從第1孔稀釋至第4孔。4) 加對照液：用移液器在第3孔滴入25l未致敏粒子；在第4孔滴入25l致敏粒子。5) 混合：以不會導致微量反應板內容物濺出的強度混合30秒鐘。6) 反應：加蓋置濕盒內，于室溫（15-30）下水平靜置。2小時后觀察并記錄結果。附：重吸收試驗對于未致敏粒子和致敏粒子均顯示以上凝集的樣品，要按照下列程序在完成吸收操作的基礎上進行再試驗。1) 取用定量的溶解液調制好的未致敏粒子0.95ml至小試管中。2) 加入樣品50l混合，于室溫（15-30）下放置20分鐘以上。3) 離心分離（2000rpm、5分鐘），然后分別吸取上清液【吸收完畢的稀釋樣品（1：20）】50l至反應板第3孔中，特別注意不要混入粒子。4) 從第4孔以后，要預先各滴入25l血清稀釋液，從第3孔至最后一孔用移液器以2n 的方式進行稀釋。5) 之后的步驟同上。3.結果3.1結果判讀首先觀察未致敏粒子反應孔是否出現凝集（第3孔），判斷試驗有效性后，再根據致敏粒子與標本反應孔（第4孔）與致敏粒子是否產生1+ 2+凝集反應凝集反應，判斷結果。如未致敏粒子反應孔出現凝集（第3孔）為無效試驗，需要對標本進行重吸收試驗后再進行檢測。+ ：產生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜狀延展；+ ：粒子環明顯變大，其外周邊緣不均勻且雜亂的凝集在周圍； ：粒子形成小環狀，呈現出外周邊緣均勻且平滑的圓形；- ：粒子呈紐扣狀聚集，呈現出外周邊緣均勻且平滑的圓形。3.2結果報告陽性：未致敏粒子反應孔（第3孔）不出現凝集，致敏粒子反應孔（第4孔）出現1+2+凝集反應，報告陽性。陰性：未致敏粒子反應孔（第3孔）和致敏粒子反應孔（第4孔）均未出現凝集反應，報告陰性。弱陽性：未致敏粒子反應孔（第3孔）不出現凝集，致敏粒子反應孔（第4孔）出現凝集反應，報告弱陽性。4.臨床意義1) 梅毒螺旋體一旦感染人體后約2-4周即可檢測到抗梅毒螺旋體抗體，此抗體特異性高可達98%以上，所以檢測到梅毒螺旋體抗體陽性可確證為現在或既往有過梅毒螺旋體感染。2) 患者感染梅毒螺旋體后產生的抗梅毒螺旋體抗體一般能保持終生，梅毒患者即使經過正規療程的抗梅毒治療后，梅毒螺旋體抗原血清學試驗仍可陽性，故梅毒螺旋體抗原血清學試驗不能作為療效觀察的指標。3) 梅毒螺旋體抗原血清試驗亦不能區分既往感染和現癥感染，試驗陽性結果應進一步進行非梅毒螺旋體抗原血清試驗，以判斷是否為梅毒現癥感染。5.注意事項1) 若未致敏粒子孔出現凝集反應，血標本需要進行吸收后再重復試驗，或改用其他方法復檢。2) 試驗加入致敏粒子、未致敏粒子后，應以不會導致微量反應板內容物濺出的強度混合。3) 紅細胞及其他血液的有形成分會影響結果，所以血液標本應通過離心分離血清。4) 致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均應混合均勻后再使用。5) 微量