自身免疫病與自身抗體的檢測 1 與自身免疫性疾病相關的基本概念 免疫機體識別和排除抗原性異物的功能 也就是機體免疫系統對抗原刺激所產生的以排除抗原為目的的生理過程 體液免疫 產生抗體細胞免疫 致敏淋巴細胞 2 與自身免疫性疾病相關的基本概念 隱蔽抗原 機體有些組織成分由于解剖位置的特殊性 正常情況下終生不與免疫系統接觸 稱為隱蔽抗原 眼晶狀體 葡萄膜 交感性眼炎 精子 男性不育 3 與自身免疫性疾病相關的基本概念 自身免疫 是指機體免疫系統對自身抗原發生免疫應答 產生自身抗體和 或 致敏淋巴細胞的現象 4 與自身免疫性疾病相關的基本概念 自身免疫病 是指在各種內外因素的作用下 自身免疫反應過強 超過了生理性自身免疫反應的強度且持續相當長時間 造成對正常細胞 器官的功能與結構的破壞 呈現與此損傷相關的臨床表現及免疫學異常 5 自身免疫性疾病發生的原因 機體抗原特異性淋巴細胞發生異常 對正常組織發生免疫應答狀態 機體自身組織成分發生改變從而引起的免疫應答狀態 6 自身免疫病的基本特征 多數自身免疫病的病因不清 有些自身免疫病的發生和復發似乎與某些外因有關 但大多數自身免疫病是 自發 地發生的 目前未找到肯定的外因 7 自身免疫病的基本特征 血液中可檢出高滴度的自身抗體和 或 與自身組織成分起反應的致敏淋巴細胞 8 自身免疫病的基本特征 組織器官損傷和功能障礙的范圍取決于自身抗原分布 器官特異性自身免疫病 橋本氏甲狀腺炎 非器官特異性自身免疫病 如系統性紅斑狼瘡 SLE 9 自身免疫病的基本特征 自身免疫病的發生與多因素相關 包括遺傳因素 性別差異 年齡大小 氣候環境及地理位置等 10 自身免疫病的基本特征 遺傳因素 強直性脊柱炎 AS 患者90 為HLA B27陽性 然而在HLA B27陽性的人群中發生強直性脊柱炎的可能僅為2 而第一級HLA B27陽性的親屬中 發生強直性脊柱炎的危險性達20 11 自身免疫病的基本特征 系統性紅斑狼瘡 SLE 的家族發病率也較高 在SLE第一代親屬中發病率達3 5 同胞姐妹發病率更高 特別是單卵雙胎更為常見 在1980年的調查中35組單卵雙胎的患者中 有22組患SLE 共患病率達62 9 而雙卵雙胎8組中僅1組患病 為12 5 12 自身免疫病的基本特征 性別差異和年齡大小 強直性脊柱炎 AS 多見于年輕男性 其發病年齡從4 90歲不等 但以15 20歲多見 男女比列為9 10 1 但最近有人調查發現男女比列約為1 5 3 1 只不過女性強直性脊柱炎患者起病緩慢 病情較輕 易被誤診 13 自身免疫病的基本特征 系統性紅斑狼瘡 SLE 是最常見的自身免疫性疾病之一 發病的男女比列為1 9 在生肓年齡甚至可高達1 30 而且多發生于20 40歲的孕齡婦女 14 自身免疫病的基本特征 大多數自身免疫病呈現出發作 緩解 復發 緩解 遷延的臨床特征 以致成為終身痼疾 15 自身免疫病的基本特征 免疫抑制劑 腎上腺皮質激素 環磷酰胺 治療有一定療效 但副作用與不良反應嚴重 停藥后常易復發 16 自身免疫性疾病臨床 病譜 器官特異性非器官特異性橋本甲狀腺炎類天皰瘡自身免疫性腎小球腎炎系統性紅斑狼瘡原發性粘液水腫惡性貧血肺腎出血綜合征干燥綜合征甲狀腺機能亢進自身免疫性萎縮性胃炎絕經過早 少數病例 類風濕關節炎Addisino病自身免疫性肝炎男性不育 少數病例 硬皮病1型糖尿病原發性膽汁性肝硬化潰瘍性結腸炎多發性肌炎 皮肌炎重癥肌無力原發性硬化性膽管炎克隆氏病混合性結締組織病多發性硬化癥自身免疫性溶血性貧血交感性眼炎系統性血管炎脫髓鞘疾病特發性血小板減少性紫癜晶狀體源性葡萄膜炎抗磷脂綜合征尋常天皰瘡特發性粒細胞減少癥藥物性狼瘡自身免疫性疾病有一百多種 發病率占世界人口的10 自身免疫性疾病幾乎遍布臨床各科 非手術科 疑難病癥 17 常見的自身免疫性疾病圖片資料 系統性紅斑狼瘡 SLE 18 常見的自身免疫性疾病圖片資料 類風濕性關節炎 RA 19 常見的自身免疫性疾病圖片資料 系統性硬化癥 PSS 20 常見的自身免疫性疾病圖片資料 干燥綜合癥 SS 21 常見的自身免疫性疾病圖片資料 皮肌炎 多發性肌炎 DM PM 22 自身抗體的檢測 自身抗體 是指抗自身細胞內 細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白 23 自身抗體的檢測 自身抗體是自身免疫病的重要標記 每種自身免疫病都伴有特征性的自身抗體 某些自身抗體因對疾病的診斷具有高度的特異性 已成為診斷某些疾病的血清標記性抗體或特異性抗體 某些自身抗體與疾病的活動性有相關性 個別的自身抗體被證實參與了組織的免疫病理損傷 24 自身抗體的檢測 自身抗體檢測的臨床意義有助于自身免疫病的早期診斷 有助于判斷疾病的活動性和預后 觀察治療反應 指導臨床用藥 有助于進一步研究和闡明自身免疫性疾病的發病機制 25 自身抗體的檢測方法 間接熒光染色技術 IIF 實驗原理細胞 組織切片或純化的 生化性質明確的物質均可作為檢測自身抗體或病原體抗體的抗原基質 如標本為陽性 已稀釋血清中的特異性抗體將與包被在固相上的抗原結合 第二步 已結合的抗體與熒光素標記的抗人抗體結合 然后在熒光顯微鏡下觀察結果 26 自身抗體的檢測方法 間接熒光染色技術 IIF 27 自身抗體的檢測方法 間接熒光染色技術 IIF 特異性高 陰陽性結果的信號強度對比明顯 每種已結合的抗體在相應抗原的位置產生典型的熒光模型 基質中抗原譜完整 可檢測多種抗體 并且檢出率高 當制備酶免試劑所需要的抗原太困難或復雜時 可選擇間接免疫熒光法 28 自身抗體的檢測方法 核均質型 ds DNA或抗組蛋白 29 自身抗體的檢測方法 斑點型 S 抗SSA 抗SSB 30 自身抗體的檢測方法 著絲點型 ACA 抗著絲點抗體 31 自身抗體的檢測方法 抗紡錘體抗體 32 自身抗體的檢測方法 ELISA法檢測ANA 原理 利用ELISA法 搜集細胞核和細胞漿抗原 如ds DNA Histones Sm RNP SSA SSB Scl 70 centromere Jo 1等混合液包被微孔板 檢測抗核抗體 33 自身抗體的檢測方法 ELISA法與IIF法比較 有操作簡便 結果判斷較客觀 無需熒光顯微鏡等優點 現在一些醫院用ELISA法來作檢測ANA的篩選方法 34 自身抗體的檢測方法 顆粒凝集法 PA 原理 以檢測抗脫氧核糖核蛋白體 抗DNP抗體 為例 從小牛胸腺中提取脫氧核糖核蛋白 DNP 抗原 致敏聚苯乙烯乳膠 制成抗DNP抗體乳膠凝集試劑 當血清中存在抗DNP抗體時 便與乳膠顆粒上的DNP抗原結合 使乳膠顆粒相互凝集出現肉眼可見的凝集顆粒 35 自身抗體的檢測方法 金標免疫斑點法 原理 斑點反應板上固相純化抗原與血清中抗體形成復合物 膠體金標記抗人IgG單抗與復合物結合 形成肉眼可見的紅色圓斑點 本法用于快速檢測血清中抗體 36 自身抗體的檢測方法 免疫印跡法 IB 原理 用SOS 聚丙烯酰胺凝膠電泳 將抗原按分子量大小予以分離 再將其轉移至硝酸纖維薄膜 如果受檢血清含有相應抗原的自身抗體 則在相應位置會發生免疫反應 再加酶標抗體 底物 顯色液和終止液 在抗原抗體反應的位置出現顯色帶 與標準帶相比較 37 自身抗體的檢測方法 免疫印跡法 IB 38 自身免疫病常規實驗室檢查 血常規 RA 80 貧血 活動期PLT升高 SLE WBC PLT Hb均可能降底 免疫血管炎 WBC增高 對藥物引起的骨髓抑制的監測 39 自身免疫病常規實驗室檢查 尿常規 SLE 尿蛋白及RBC的出現表明腎臟損傷 40 自身免疫病常規實驗室檢查 肝功能 如有異常 應鑒別是何種性質 自身免疫肝病 病原感染常規檢查肝炎病毒 HAV HBV HCV HDV HEV HGV EBV TB 41 自身免疫病常規實驗室檢查 腎功能 免疫腎病 SLE 血管炎 肌酶 多發性肌炎 皮肌炎 PM DM 尿酸 痛風 42 自身免疫病常規實驗室檢查 免疫血清學檢查免疫球蛋白 血清蛋白電泳 高球蛋的血癥 ESR CRP 急性期蛋白 對病情活動性的判斷 CH50 C3 C4 SLE活動期均降底 ASO 鏈球菌感染 風濕熱 43 自身免疫病常規實驗室檢查 抗核抗體譜 ANAs 抗中性粒細胞胞漿抗體 ANCAs 類風濕關節炎相關抗體自身免疫性肝病相關抗體抗磷脂抗體其它 44 抗核抗體譜 ANAS 的檢測 抗核抗體 ANA 是自身抗體中的一組抗體 ANA的研究 從發現狼瘡 LE 細胞算起 迄今40多年來 人們對ANA的認識不斷加深 已衍生出具有不同臨床意義的二十余種ANA 形成了抗核抗體譜 ANAS 45 抗核抗體譜 ANAS 的檢測 抗核抗體 傳統定義 顧名思義是指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱 現代定義 是指抗細胞內所有抗原成分的自身抗體的總稱 46 抗核抗體譜 ANAS 的檢測 ANA檢測 IIF法 金標準 1 90 以上實驗室使用Hep 2細胞為底物 2 為人來源培養細胞 人喉癌細胞 據有核大 細胞結構清晰特點 3 便于結構觀察及熒光染色核型分析 4 核抗原豐富 特異性強 有完整的ANA抗原譜 細胞核 漿 骨架 周期 5 可預測分析ANA靶抗原范圍 6 經驗性強 47 48 IIF法檢測ANA陽性常見熒光染色模型細胞核細胞漿細胞骨架細胞周期均質型核糖體型肌動蛋白型中心體型核膜型線粒體型波形蛋白型紡錘體型斑點型高爾基體中間體型核仁型溶酶體型著絲點顆粒型 粗 細 PCNA型核 多 少 點型 49 抗核抗體譜 ANAS 的檢測 在實際工作中 不管用何種方法來檢測ANA 實際上都是指總抗核抗體檢測 若檢測結果為陽性 則需進行分型 50 抗核抗體譜 ANAS 的檢測 抗核抗體 ANA 的陽性率SLE 95 PSS70 80 MCTD 95 SS60 70 PM DM50 60 RA20 30 自身免疫性肝炎80 90 正常人5 20 51 IIF法檢測ANA陽性常見熒光染色模型細胞核細胞漿細胞骨架細胞周期均質型核糖體型肌動蛋白型中心體型核膜型線粒體型波形蛋白型紡錘體型斑點型高爾基體中間體型核仁型溶酶體型著絲點顆粒型 粗 細 PCNA型核 多 少 點型 52 抗心磷脂抗體 ACL 抗心磷脂抗體 Anti CardiolipinAntibodiesACL 是抗磷脂抗體中的一個重要組成部分 可在多種結締組織病中出現 抗心磷脂抗體可分為IgA IgM IgG 53 抗心磷脂抗體 ACL 研究表明ACL在SLE中陽性率為30 其次在RA中陽性率為23 都以IgG型為主 在SLE病人當中ACL陽性者狼瘡腦病的發病率明顯高于ACL陰性患者 另外 血小板減少 血管栓塞和習慣性流產也與ACL抗體密切相關 54 抗心磷脂抗體 ACL 55 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 類風濕因子 RheumatoidFactorRF 是IgGFc端的自身抗體 因為它是抗體 即IgG 的對應抗體 故也稱為抗抗體 RF可以是IgG IgA IgM型 現在一般說的RF是指IgM類風濕因子 56 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 RF出現于的RA病人血清中 約30 的SLE 約50 的SS 部分MCTD和少數PSS病人也可呈陽性 在某些病毒 原蟲 細菌感染和腫瘤等非自身免疫病患者也可以出現 57 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 RA是一種最常見的自身免疫性疾病 在全世界大約有1 的人患有此病 是以關節滑膜炎癥的慢性自身免疫性疾病 其預后變異大 輕者發生輕度關節畸形 重者則發生嚴重致死性病變 RA診斷和治療晚 則療效不滿意 早期診斷和治療 炎癥有可能發生可逆性改變 這就顯得RA的早期診斷極為重要 58 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 類風濕因子 RF 陽性率為79 特異性為63 抗核周因子抗體 APF 陽性率達為81 特異性為73 90 抗角質蛋白抗體 AKA 陽性率為36 69 特異性為95 99 抗RA33抗體 陽性率為35 病情相對較重 59 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 抗Sa抗體 IB法檢測的敏感性為40 特異性為99 陽性預報率為98 60 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 抗環瓜氨酸肽 CCP 抗體 一種遠比類風濕因子特異的RA的指標 抗CCP陽性患者比陰性的患者更容易發展成可通過放射性方法檢測到的關節損傷 ELISA法敏感性為80 特異性為96 在79 的早期患者中可檢出抗CCP抗體 61 類風濕性關節炎 RA 的早期診斷 這幾種抗體都可以在RA起病一年內出現 除RF外的幾種抗體對RA的診斷具有很高的特異性 故對RA的早期診斷有很大的幫助 62 抗中性粒細胞胞漿抗體譜 ANCA ANCA是一種以中性粒細胞和單核細胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體 80年代中期發現ANCA 是臨床診斷原發小血管炎的重要血清學標志 近10年來國際上對ANCA的研究進入了高潮 重要的ANCA抗原相繼發現 63 抗中性粒細胞胞漿抗體譜 ANCA ANCA靶抗原包括 蛋白酶3 PR3 髓過氧化物酶 MPO 人白細胞彈性a蛋白酶 HEL 乳鐵蛋白 LF 組織蛋白酶G CG 人溶酶體相關膜蛋白2 H LAMP2 64 抗中性粒細胞胞漿抗體譜 ANCA 溶菌酶 LYS 殺菌 膜通透性增高蛋白 BPI 天青殺素防御素 浠醇酶 葡萄糖醛酸酶 65 抗線粒體抗體 antimitochondrialantibodiesAMA AMA是一種無種屬特異性和器官特異性的自身抗體